Matériel & Méthodes
2-TECHNIQUES D’ANALYSE PHYSICO-CHIMIQUES
Pour déterminer les caractéristiques du substrat de Berridge et l’extrait brut de pepsine de poulet après extraction, différentes analyses physico-chimiques ont été effectuées.
A
Glandes gastriques Isthme
B
Matériel & Méthodes
40 1-MATIERES PREMIERES
1-1-Les proventricules de poulet
Après abattage, les proventricules sont récupérés du tube digestif de poulets âgés entre 45 et 50 jours à partir d’un abattoir agrée par l’état situé à El Meridj (7 km de Constantine ville). Acheminés au laboratoire dans une glacière, les proventricules sont rincés à l'eau courante ; égouttés puis conservés à 4°C jusqu’à utilisation. La figure 15 illustre la forme externe et interne du proventricule.
Figure 15 : Proventricule de poulet : A : avant incision ; B : après incision. 1-2-Le lait
Le lait est obtenu par reconstitution à 12 % (m/v) dans une solution de CaCl2(0,01M) d’une poudre de lait écrémé préparant ainsi le substrat de Berridge. Cette poudre de lait (moyen chauffage) provient de l’Ukraine (Molochansk Dairy) ayant une humidité de 3 % et une teneur en matière grasse de 0,15 % selon les descriptions de la fiche technique. Après reconstitution, le lait est conservé à 4°C pendant une nuit pour assurer l’équilibre physico-chimique d’une part, et d’autre part, la stabilité et la réhydratation des micelles. Pour éviter le développement microbien, 0,04 % (m/v) d'azide de sodium sont ajoutés.
2-TECHNIQUES D’ANALYSE PHYSICO-CHIMIQUES
Pour déterminer les caractéristiques du substrat de Berridge et l’extrait brut de pepsine de poulet après extraction, différentes analyses physico-chimiques ont été effectuées.
A
Glandes gastriques Isthme
B
Matériel & Méthodes
40 1-MATIERES PREMIERES
1-1-Les proventricules de poulet
Après abattage, les proventricules sont récupérés du tube digestif de poulets âgés entre 45 et 50 jours à partir d’un abattoir agrée par l’état situé à El Meridj (7 km de Constantine ville). Acheminés au laboratoire dans une glacière, les proventricules sont rincés à l'eau courante ; égouttés puis conservés à 4°C jusqu’à utilisation. La figure 15 illustre la forme externe et interne du proventricule.
Figure 15 : Proventricule de poulet : A : avant incision ; B : après incision. 1-2-Le lait
Le lait est obtenu par reconstitution à 12 % (m/v) dans une solution de CaCl2(0,01M) d’une poudre de lait écrémé préparant ainsi le substrat de Berridge. Cette poudre de lait (moyen chauffage) provient de l’Ukraine (Molochansk Dairy) ayant une humidité de 3 % et une teneur en matière grasse de 0,15 % selon les descriptions de la fiche technique. Après reconstitution, le lait est conservé à 4°C pendant une nuit pour assurer l’équilibre physico-chimique d’une part, et d’autre part, la stabilité et la réhydratation des micelles. Pour éviter le développement microbien, 0,04 % (m/v) d'azide de sodium sont ajoutés.
2-TECHNIQUES D’ANALYSE PHYSICO-CHIMIQUES
Pour déterminer les caractéristiques du substrat de Berridge et l’extrait brut de pepsine de poulet après extraction, différentes analyses physico-chimiques ont été effectuées.
A
Glandes gastriques Isthme
2-1- Matière sèche
La matière sèche est déterminée selon la norme française V 04-207 (Anonyme, 1993). Après dessiccation à 103°C± 2°C par évaporation d’une prise d’essai, le résidu sec obtenu par pesée jusqu’à stabilité de masse est retenu pour quantifier la matière sèche. Celle-ci est exprimée en grammes de matière sèche par unité de masse ou par unité de volume.
2-2-Cendres
Les cendres du lait sont déterminées selon la norme française V 04-208 (Anonyme, 1993). Le principe repose sur l’incinération d’une prise d’essai de lait à 525°C±°25 puis la pesée des cendres obtenues. Le résultat est exprimé en grammes de cendres par unité de masse.
2-3-Matière grasse
La matière grasse contenue dans la poudre de lait est déterminée par gravimétrie selon la norme française V 04-215 (Anonyme, 1993). Le principe est basé sur :
une hydrolyse par l’acide chlorhydrique (
ρ
20= 1,19 g mL-1) à chaud ; une séparation par filtration de l’insoluble contenant la matière grasse hydrolysée ;
une extraction de la matière grasse par l’oxyde diéthylique. Le résultat est exprimé en en grammes de matière grasse par unité de masse ou par unité de volume.
2-4-Protéines et matières azotées
2-4-1-Méthode colorimétrique selon Lowry et al., (1951)
Dans la méthode de Lowry, le réactif de Folin-Ciocalteu réagit avec la tyrosine et le tryptophane, et dans une moindre mesure, avec la cystéine, l'histidine et la liaison peptidique. Une fois le réactif de Folin-Ciocalteu (PROLABO, CE) réduit, il se colore en bleu. La lecture de l’absorbance est faite à une longueur d’onde de 750 nm au spectrophotomètre (LKB Biochrom 4054, Ultrospec Plus, England).
La courbe d’étalonnage des protéines totales du lait, celle des extraits enzymatiques et des unités d’activité aspartylprotéase sont réalisées à partir de solution de caséine (LABOSI, Fisher Scientific, France), de Bovine Serum Albumin (BSA) (SIGMA-ALDRICH, Germany), et de tyrosine (LABOSI, Fisher Scientific, France) respectivement.
Matériel & Méthodes
42 y = 1,2527x R² = 0,9906 0 0,03 0,06 0,09 0,12 0,15 0 0,05 0,1 D .O . à 7 50 n m Caséines (mg mL-1) y = 0,0026x R² = 0,9799 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0 20 40 60 80 100 D .O .à 7 50 n m BSA (µg mL-1) y = 0,0042x R² = 0,971 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0 30 60 90 120 A bso rb an ce 6 50 n m Tyrosine (µg mL-1) (A) (B) (C)Figure 16 : Courbe d’étalonnage : A : des caséines, B : de la BSA, C : de la tyrosine 2-4-2-Azote total
La détermination de la teneur en azote total dans un échantillon par la méthode de Kjeldahl selon la norme française V 04-211 (Anonyme, 1993) repose sur :
une minéralisation par chauffage en présence d’acide sulfurique concentré (
ρ
20= 1,83g mL-1) et en présence de catalyseurs (sulfate de cuivre et sulfate de potassium) ; une alcalinisation des produits minéralisés par l’hydroxyde de sodium concentré (
ρ
20= 1,33g mL-1) ; une distillation de l’ammoniac libéré puis capturé par une solution borique (4 % m/v) contenant l’indicateur rouge de méthyle (0,05 % dans l’éthanol 94-97 % v/v) qui vire du rouge dans un milieu acide au jaune dans un milieu basique ;
une titration du distillat par l’acide sulfurique (0,1N).
Le résultat est exprimé en grammes d’azote par unité de volume ou par unité de masse du lait reconstitué.
2-5-Acidité titrable
Le principe consiste à titrer l’acidité lactique du lait reconstitué (substrat de Berridge) par l’hydroxyde de sodium (0,1N) en présence de phénolphtaléine (1g dans 100 mL d’éthanol 96%) comme indicateur de couleur de neutralisation selon la norme française V 04-206 (ANONYME, 1993). Le résultat est exprimé en en grammes d’acide lactique par unité de volume.
3-EXTRACTION DE LA PEPSINE