Les macrophages sont impliqués dans de nombreuses pathologies humaines dans lesquelles leur rôle positif ou négatif dépend de leur polarisation. Il faudra déterminer si les observations effectuées sur les macrophages générés in vitro sont valables in vivo. Nous avons constaté que la répartition de CSF-1R sur l'ADN variait selon le stade de différenciation et les cytokines. Les macrophages tissulaires constituant des populations individuelles, il est possible que CSF-1R présente des localisations spécifiques à chacune d'entre elles. Toutefois, ces macrophages ne dérivant pas des monocytes sanguins, il est envisageable que CSF-1R ne présente pas la même localisation que dans les macrophages que nous avons générés in vitro.
3.4.1 LMMC
La LMMC se caractérise par une expansion des monocytes classiques209. CSF-1
induit chez l homme une augmentation de la fraction des monocytes CD +
(intermédiaires et non classiques), l'inactivation du récepteur ayant un effet inverse. L accumulation de monocytes classiques dans la LMMC pourrait s expliquer, au moins en partie, par la perte d expression de CSF-1R. A l'exception d'un patient présentant une délétion du bras long du chromosome 5 comprenant CFMS406, il n a pas été observé
d altération du gène dans la LMMC. Les données concernant la concentration plasmatique de CSF-1258 et l augmentation de l'expression de CSF-1R à la surface des
monocytes 209 sont controversées. Nous observons une très forte diminution de
l'expression de CSF-1R dans les monocytes de nombreux patients atteints de LMMC. Notre équipe avait observé précédemment une diminution de son ARNm chez les patients présentant une réduction de l'expression de TIF-1 385. La diminution de
l expression de CFMS pourrait également être liée aux mutations d'AML-1, aux perturbations épigénétiques et de l'épissage ainsi qu'à des modifications d'expression d'autres facteurs qui régulent son expression.
135 Ces résultats doivent être confirmés sur un plus grand nombre de patients en vérifiant l'état de méthylation du promoteur de CFMS, l'expression de facteurs comme PU.1 ou les EGR dans les monocytes de LMMC407 et la réponse des monocytes de ces
patients à CSF- . L activation constitutive de la voie Ras, en particulier lorsque CBL est muté, devrait modifier la signalisation en aval du récepteur, son internalisation, sa dégradation et son adressage au noyau, altérant la maturation des monocytes.
Chez les deux patients que nous avons pu analyser par ChIP-Seq, nous avons observé des modifications de l interaction CSF-1R / chromatine. Le récepteur est localisé dans les régions intronique et intergénique mais à une distance plus faible du TSS (89 et 69kb dans les LMMC#1 et 6 respectivement contre 110kb dans les monocytes sains). Seuls 5% des pics CSF-1R sont communs avec ceux des monocytes du donneur sain contre 15% de pics communs entre deux donneurs sains. Par ailleurs certains pics observés avec les deux anticorps ciblant CSF-1R ne sont pas retrouvés chez les patients comme au niveau du promoteur de PU.1 tandis que de nouveaux pics absents des monocytes contrôles sont détectés (STAT6). En revanche aucune modification significative des motifs de recrutement de CSF-1R n'est observée dans les monocytes de patients comparés aux monocytes contrôles.
Ces données suggèrent une altération de la localisation de CSF-1R sur la chromatine chez les patients atteints de LMMC, lorsque le récepteur y est encore présent en quantité suffisante pour être détecté. Il reste encore à évaluer si les fonctions de régulation de l'expression des gènes par CSF-1R nucléaire sont conservées chez ces patients dans les monocytes et lors de leur différenciation en macrophages. Une altération de l'expression globale et des fonctions nucléaires de CSF-1R pourrait participer au phénotype dysplasique observé dans les monocytes leucémiques.
Enfin, les monocytes peuvent s accumuler dans le sang dans d autres circonstances pathologiques, par exemple dans les monocytoses réactionnelles, et il serait intéressant d explorer le rôle de CSF-1R nucléaire dans ces conditions.
3.4.2 Macrophages infiltrant les tumeurs
Même en l'absence de mutation affectant les monocytes et les macrophages, il est possible que CSF-1R soit relocalisé différemment sur l'ADN. A notre connaissance, la localisation nucléaire de CSF-1R n'a pas été observée dans les macrophages infiltrant les tumeurs, notamment dans les cancers du sein où CSF-1R a été identifié dans le noyau des cellules tumorales. D'autres études sont nécessaires afin de déterminer si CSF-1R nucléaire est présent ou non dans les TAMs. Sa signalisation, différentielle de celle induite par la forme membranaire, pourrait avoir un impact sur la génération de ces cellules.
De plus, des molécules ciblant CSF-1R sont actuellement en développement afin d'inhiber la différenciation et le recrutement des TAMs, mais aussi de favoriser leur polarisation vers un phénotype anti-tumoral. La forme nucléaire d'autres RTKs est souvent associée au développement de résistances aux thérapeutiques ciblées et aux anticorps monoclonaux. Dans le cas de CSF-1R, nous avons montré que l'utilisation d'inhibiteurs de son activité kinase diminuait sa localisation nucléaire. CSF-1R étant acheminé de la membrane vers le noyau en réponse à son ligand, il faudrait déterminer
136 si les anticorps bloquants inhibent également ce transport en empêchant la liaison au ligand et l'activation du récepteur.
Nous avons mené ce type d'expérience mais sans pouvoir obtenir de résultat reproductible. Nos données actuelles suggèrent que les molécules ciblant l'activité kinase de CSF-1R pourraient également cibler sa forme nucléaire et donc inhiber le récepteur de façon globale dans les macrophages.