. Protocole Omegaven
Au cours de ce protocole, nous avons étudié les effets vasculaires pulmonaires des AGPI n3. Du sérum physiologique (12 ml/h) est injecté dans le cathéter de la veine cave supérieure, Les mesures hémodynamiques sont enregistrées toutes les 10 min (fréquence cardiaque, pression aortique, pression pulmonaire, pression amniotique, débit dans l’artère pulmonaire gauche, pression de l’oreillette gauche).
48
Après une période de stabilité de 30 minutes, l’Omegaven 10%, 1,2 ml/h associée à du sérum physiologique, 10,8 ml/h) étaient perfusés pendant deux heures (Composition de l’Omegaven 10% en annexe1). Puis du sérum physiologique était perfusé pendant une heure supplémentaire après l’arrêt de la perfusion des AGPI n3. Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant et après la perfusion de l’Omegaven.
Figure 15 : illustration de protocole Omegaven
. Protocole Intralipide
Au cours de ce protocole,
nous avons exploré
les effets vasculaires pulmonaires d’AGPI constituées essentiellement des oméga 6. Les animaux reçoivent de l’Intralipide 10% (composition en annexe 1) selon le même protocole que précédemment.
Figure 16 : illustration de protocole Intralipide
Intralipide 1.2 ml/h + SSI 10.8 ml/h SSI 12ml/h GDS, lactates GDS, lactates 0 30 150 210 min SSI 12ml/h Omegaven 1.2 ml/h + SSI 10.8 ml/h GDS, lactates GDS, lactates 0 30 150 210 min SSI 12ml/h SSI 12ml/h
49
. Protocole LNA, Omegaven
Pour savoir si les effets vasculaires pulmonaires des AGPI n3 sont liés à la libération de NO, nous avons étudié les effets AGPI n3 sur les résistances vasculaires pulmonaires en présence d’un inhibiteur de la NO synthase. Le protocole Omegaven est réalisé 30 min après l’injection de L-nitro-arginine (30 mg en perfusion lente de 10 min).
La L-nitro-arginine (30 mg) était diluée
dans une goutte de chlorhydrique 1M, puis diluée dans 2 ml d’eau, le NaOH 1M est ensuite
ajouté jusqu’à obtenir une solution à pH=7.4.
Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant l’injection de LNA, et après la fin perfusion de l’Omegaven.Figure 17 : illustration de protocole Omegaven LNA
. Protocole LNA, témoin
Pour connaître les effets vasculaires pulmonaires d’une inhibition de la NO synthase, les résistances vasculaires pulmonaires ont été mesurées après injection de L-nitro-arginine (30 mg IV sur 10 min) suivi d’une perfusion de SSI 12 ml/h pendant 210 minutes.
Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant l’injection de LNA, et après 150 minutes de la perfusion de SSI. 0 30 60 180 240 min GDS, lactates GDS, lactates L N A SSI 12ml/h Omegaven 10% 1.2ml/h + SSI 10.8 ml/h SSI 12ml/h SSI 12ml/h
50
Figure 18 : illustration de protocole LNA, témoin
. Protocole TEA - Omegaven
Pour savoir si les effets vasculaires pulmonaires des AGPI -3 sont liés à l’ouverture de canaux potassiques, nous avons étudié les effets du tétraethylammonium (bloqueur des canaux potassiques calcium- et voltage-dépendant) sur la réponse vasculaire pulmonaire aux AGPI n3.
Le tétraethylammonium (Sigma-Aldreich, France) était dilué dans du sérum
physiologique pour obtenir une concentration de 1ml=10mg.
Une perfusion dutétraethylammonium (1ml = 10 mg, 6 ml/h) était débutée 10 minutes avant la perfusion de l’Omegaven10% et poursuivie pendant toute la durée de la perfusion de l’Omegaven 1.2 ml/h avec 4.8 ml de SSI. Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant l’injection de TEA, et après la fin perfusion de l’Omegaven
Figure 19 : illustration de protocole Omegaven, TEA
GDS, lactates GDS, lactates SSI 12ml/h Omegaven 10% 1.2ml/h + SSI 4.8 ml/h + TEA 6ml/h SSI 12ml/h SSI 6 ml/h+ TEA 6ml/h 0 30 40 160 220 m 0 30 60 180 240 min GDS, lactates GDS, lactates L N A SSI 12ml/h SSI 12 ml/h SSI 12ml/h SSI 12ml/h
51 . Protocole TEA, témoin
Pour connaître les effets vasculaires pulmonaires d’une inhibition des canaux potassiques, les résistances vasculaires pulmonaires étaient mesurées pendant une perfusion continue de tétraethylammonium (1 ml = 10 mg, 6 ml/h) + SSI 6ml/h pendant 130 minutes, suivi d’une SSI 12 ml/h pendant une heure. Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant l’injection de TEA, et après la fin son perfusion.
Figure 20 : illustration de protocole TEA, témoin
. Protocole MS-PPOH
Pour savoir si les effets vasculaires pulmonaires des AGPI n3 sont liés à des métabolites produit par la monooxygénase P450, nous avons étudié les effets du -(methylsulfonyl)-2-(2-propynyloxy) – benzenehexanamide (MS-PPOH, 5mg/kg) -Inhibiteur spécifique de la mono-oxygénase P450-sur la réponse vasculaire pulmonaire aux AGPI n3.
Le MS-PPOH (SPI-BIO, Paris/France) était
dilué dans 0,2 de DMSO (Sigma-Aldreich, France) puis dans 10 de sérum physiologique,
puis il
était injecté (dans l’artère pulmonaire gauche) 1h avant la perfusion d’AGPI n3. Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant l’injection de MS-PPOH, et après la fin perfusion de l’Omegaven.GDS, lactates GDS, lactates
SSI 12ml/h
SSI 6 ml/h + TEA 6ml/h SSI 12ml/h SSI 6 ml/h+
TEA 6ml/h
0 30 40 160 220
52
Figure 21 : illustration de protocole Omegaven, MS-PPOH
. Protocole EPA
Pour étudier les effets vasculaires pulmonaires de l’EPA sur le lit vasculaire pulmonaire.
Après l’obtention d’une stabilité sous une perfusion de SSI pendant 30 minutes, nous avons
perfusé l’EPA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA). (dose 25 mg dans 0.25 ml
d’éthanol) associé à du SSI à un débit de 12 ml/h pendant deux heures, suivie d’une période
de surveillance sous SSI 12 ml/h pendant 1 h. Cette dose de l’EPA correspond à la dose
d’EPA dans l’Omegaven10% utilisé dans le protocole précédant.
Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant et après la perfusion de l’EPA.Figure 22 : illustration de protocole EPA
. Protocole DHA
Afin d’identifier les effets vasculaires pulmonaires de la DHA sur le lit vasculaire pulmonaire.
Après l’obtention d’une stabilité sous une perfusion de SSI pendant 30 minutes, nous avons
perfusé le DHA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA). (Dose totale de DHA de 50
GDS, lactates GDS, lactates
SSI 12ml/h (EPA 25 mg + éthanol 0,125 ml/h) + SSI 11, 875 ml/h SSI 12ml/h
0 30 150 210 min m GDS, lactates GDS, lactates SSI 12ml/h Omegaven 10% 1.2ml/h + SSI 10,8 ml/h SSI 12ml/h SSI 12 ml/h
0
30 90 210 270 min MS-PPOH53
mg dans 0, 20 ml d’éthanol) associé à du SSI pour un débit total de 12 ml/h pendant deux
heures, suivie d’une période de surveillance sous SSI 12 ml/h pendant 1 h. Cette dose de
DHA correspond à la dose de DHA dans l’Omegaven utilisé dans le protocole précédant.
Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant et après la perfusion de la DHA.Figure 23 : illustration de protocole DHA
. Protocole Témoin « éthanol »
Après l’obtention d’une stabilité sous une perfusion de SSI pendant 30 minutes, nous avons
perfusé l’éthanol (dose totale de l’éthanol 0, 25 ml d’éthanol) associé à du SSI pour un débit
total de 12 ml/h pendant deux heures, suivie d’une période de surveillance sous SSI 12 ml/h
pendant 1 h.
Un gaz de sang avec lactates ont été prélevés juste avant et après la perfusion de l’éthanol.Figure 24 : illustration de protocole éthanol
GDS, lactates GDS, lactates
SSI 12ml/h (DHA 50 mg + éthanol 0,1 ml/h) + SSI 11, 9 ml/h SSI 12ml/h
0 30 150 210 min
m
GDS, lactates GDS, lactates
SSI 12ml/h Ethanol 0,125 ml/h + SSI 11, 875 mL/h SSI 12ml/h
0 30 150 210 min
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