A exatidão é a concordância dos resultados de um ensaio com aquele considerado como referência e definido como verdadeiro (INMETRO, 2007) e pode ser determinada pelo uso de material de referência certificado (MRC), comparação de métodos ou por ensaios de recuperação. Neste trabalho, a exatidão do método foi determinada através do ensaio de recuperação. Para tanto, amostras branco de solo foram fortificadas com as sulfonamidas em dois níveis de concentração: 2,5 e 7,5 ng g-1. Todas as análises foram realizadas em sextuplicata (n = 6).
Os resultados de exatidão (recuperação) obtidos para as sulfamidas estão apresentados na Tabela IV.5. Em parênteses estão apresentadas as estimativas dos desvios padrões.
Tabela IV.5: Valores de exatidão com as respectivas estimativas dos desvios padrões (RSD) para as sulfonamidas extraídas do solo.
Sulfonamida
Exatidão % (RSD %) 2,5 ng g-1 7,5 ng g-1
LVe RQo LVe RQo
SDZ 77 (20) 108 (5) 93 (12) 98 (5) STZ 109 (20) 101 (12) 112 (13) 100 (8) SMZ 110 (13) 106 (3) 110 (8) 97 (8) SMX 96 (21) 96 (13) 102 (11) 101 (4) SDM 96 (9) 105 (6) 106 (6) 97 (2) SQX 92 (16) 100 (8) 100 (5) 102 (5)
Os valores de exatidão obtidos variaram entre 77 e 112% e foram considerados aceitáveis para o propósito do método e para o nível de concentração avaliado.
O método desenvolvido (extração usando SLE e quantificação por SPE- UHPLC-MS/MS) foi considerado adequado para a quantificação dos resíduos de sulfonamidas presentes no solo, uma vez que todos os parâmetros de validação estão na faixa aceitável para o nível de concentração do estudo e que o limite de quantificação encontrado está na faixa das ocorrências desses antimicrobianos no solo (Tabela I.2).
A HPLC-DAD não é adequada para a determinação de resíduos de sulfonamidas (ng/g) em solos, por não apresentar a seletividade requerida. Embora a UHPLC-MS/MS tenha a seletividade requerida, a etapa de preparo de amostras é fundamental, uma vez que o solo é uma matriz complexa e a co-extração de concomitantes da matriz acabam prejudicando a detectabilidade do método.
A técnica de extração em fase sólida assistida por potencial elétrico (E- MSPD) se mostrou promissora para a extração das sulfonamidas em amostras de solo. No entanto, esse procedimento não foi eficaz na remoção de concomitantes da matriz solo e uma etapa adicional de clean-up foi necessária para permitir a quantificação dos analitos por UHPLC-MS/MS.
A extração sólido-líquido foi eficiente na extração das sulfonamidas do solo. Utilizando a mistura de água:acetonitrila 1:1 (v/v) como solução extratora foram alcançadas eficiências de extração de 70 a 100 % para as seis sulfonamidas. No entanto, também com esse procedimento foi necessário se empregar uma etapa adicional de clean-up. A extração em fase sólida off-line (sorvente C18) e on-line (Oasis HLB) foram eficazes na remoção de concomitantes que pudessem interferir na quantificação.
O procedimento SPE on-line é vantajoso frente ao off-line pela simplicidade, menor manuseio da amostra, concentração on-line dos analitos, menor tempo de análise e menor custo. A coluna de SPE permite a análise de várias amostras (mais de 2000) sem perder a eficiência. Ainda, o método apresenta a vantagem frente a outros reportados na literatura uma vez que não requer equipamentos adicionais para a extração, como por exemplo um extrator de fluido pressurizado, ou mesmo várias etapas de clean-up sequenciais.
Os parâmetros de validação do método SLE seguido por SPE-UHPLC- MS/MS foram considerados adequados para ambos os solos LVe (textura argilosa) e RQo (textura arenosa) com limite de quantificação de 0,5 ng g-1. O método foi
empregado para dois solos de classes texturais diferentes sem comprometer os parâmetros de validação o que indica que o método é abrangente e pode ser aplicado também para outros tipos de solos.
O método desenvolvido e validado é adequado ser empregado na determinação de resíduos de sulfonamidas em solos. Cabe destacar que este trabalho é o primeiro que apresenta um procedimento de SPE on-line ao UHPLC- MS/MS para a determinação de resíduos de sulfonamidas em solos.
ACCINELLI, C.; HASHIM, M.; EPIFANI, R.; SCHNEIDER, R.J.; VICARI, A. Effects of the antimicrobial agent sulfamethazine on metolachlor persistence and sorption in soil.
Chemosphere, v. 63, n. 9, p. 1539-45, 2006.
BALAKRISHNAN, V. K.; EXALL, K. N.; TOITO, J. M. The development of a microwave-assisted extraction method for the determination of sulfonamides antibiotics in sediments and soils. Canadian Journal of Chemistry, v. 92, n. 5, p. 369-377, 2014.
BARKER, S. A. Matrix solid phase dispersion (MSPD). Journal of Biochemical and
Biophysical Methods, v. 70, n. 2, p. 151-62, 2007.
BIALK-BIELINSKA, A.; KUMIRSKA, J.; PALAVINSKAS, R.; STEPNOWSKI, P. Optimization of multiple reaction monitoring mode for the trace analysis of veterinary sulfonamides by LC-MS/MS. Talanta, v. 80, p. 947-953, 2009.
BIAN, K.; LIU, Y.; WANG, Z.; ZHOU, T.; SONG, X.; ZHANG, F.; HE, L. Determination of multi-class antimicrobial residues in soil by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Royal Society of Chemistry Advances, v. 5, n. 35, p. 27584-27593, 2015.
BOXALL, A.; FOGG, L. A.; KAY, P.; BLACKWELL, P. A.; PEMBERTON, E. J.; CROXFORD, A. Prioritisation of veterinary medicines in the UK environment.
Toxicology Letters, v. 142, n. 3, p. 207-218, 2003.
BOURDAT-DESCHAMPS, M.; LEANG, S.; BERNET, N.; DAUDIN, J-J.; NÉLIEU, S. Multi-residues analysis of pharmaceuticals in aqueous environmental samples by online solid-phase extraction-ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry: Optimisation and matrix effects redution by quick, easy, cheap, effetive, rugged and safe extraction. Jounal of Chromatography A, v. 1349, p. 11- 23, 2014.
CHANG, H.; HU, J.; ASAMI, M.; KUNIKANE, S. Simultaneous analysis of 16 sulfonamide and trimethoprim antibiotics in environmental waters by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A, v. 1190, n. 1-2, p. 390-3, 2008.
CHEN, L.; ZENG, Q.; WANG, H.; SU, R.; XU, Y.; ZHANG, X.; YU, A.; ZHANG H.; DING, L. On-line coupling of dynamic microwave-assisted extraction to solid-phase extraction for the determination of sulfonamide antibiotics in soil. Analytica Chimica
CHEN, L.; ZHAO, Q.; XU, Y.; SUN, L.; ZENG, Q.; XU, H.; WANG, H.; ZHANG, X.; YU, A.; ZHANG, H.; DING, L. A green method using micellar system for determination of sulfonamides in soil. Talanta, v. 82, p. 1186-1192, 2010.
CHESWORTH, W. Encyclopedia of soil science, Springer, Dordrecht, 2008.
DÍAZ-CRUZ, M. S.; BARCELÓ, D. LC–MS2 trace analysis of antimicrobials in water,
sediment and soil. TrAC Trends in Analytical Chemistry, v. 24, n. 7, p. 645-657, 2005.
DMITRIENKO, S. G.; KOCHUK, E. V.; APYARI, V. V.; TOLMACHEVA, V. V.; ZOLOTOV, Y. A. Recent advances in sample preparation techniques and methods of sulfonamides detection - A review. Analytica Chimica Acta, v. 850, p. 6-25, 2014.
DORETTO, K. M. Desenvolvimento de métodos visando a quantificação de sulfonamidas em medicamentos de uso veterinário e estudos de sorção/dessorção em solos. 2012. Tese de doutorado. Química Analítica, Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Campinas-SP.
EMA, European Medicines Agency: Veterinary Medicines and Inspections Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP). Revised Guideline on Environmental Impact Assessment for Veterinary Medical Products in support of the VICH Guidelines GL6 and GL38, 2008.
GAO, L.; SHI, Y.; LI, W.; LIU, J.; CAI, Y. Occurrence and distribution of antibiotics in urban soil in Beijing and Shanghai, China. Environmental Science Pollution
Research, v. 22, n. 15, p. 11360-11371, 2015.
GARCIA-GALAN, M. J.; DIAZ-CRUZ, S.; BARCELO, D. Multiresidue trace analysis of sulfonamide antibiotics and their metabolites in soils and sewage sludge by pressurized liquid extraction followed by liquid chromatography-electrospray- quadrupole linear ion trap mass spectrometry. Journal of Chromatography A, v. 1275, p. 32-40, 2013.
HIRSCH, R.; TERNES, T.; HABERER, K. KRATZ, K-L. Ocurrence of antibiotics in aquatic environment. The Science of the Total Environment, v. 299, p. 109-118, 1999.
HOU, J.; WAN, W.; MAO, D.; WANG, C.; MU, Q.; QIN, S.; LUO, Y. Occurrence and distribution of sulfonamides, tetracyclines, quinolones, macrolides and nitrofurans in
livestock manure and amended soils of Northern China. Environmental Science
Pollution Research International, v. 22, n. 6, p. 4545- 4554, 2015.
HU, W.; MA, L.; GUO, C.; SHA, J.; ZHU, X.; WANG Y. Simultaneous extraction and determination of fluoroquinolones, tetracyclines and sulfonamides antibiotics in soils using optimised solid phase extraction chromatography-tandem mass spectrometry,
Internacional Journal of Environmental Analytucal Chemistry V. 92, p. 698-713,
2012.
HU, X.; ZHOU, Q.; LUO, Y. Occurrence and source analysis of typical veterinary antibiotics in manure, soil, vegetables and groundwater from organic vegetables bases, northern China. Environmental Pollution, v. 158, p. 2992-2998, 2010.
HUANG, Y.; CHENG, M.; LI, W.; WU, L.; CHEN, Y.; LUO, Y.; CHRISTIE, P.; ZHANG, H. Simultaneous extraction of four classes of antibiotics in soil, manure and sewage sludge and analysis by liquid chromatography-tandem mass spectrometry with the isotope-labelled internal standard method. Analytical Methods, v. 5, n. 15, p. 3721, 2013.
IBGE, Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística. Manual Técnico de Pedologia, 2a. edição, 2007.
INMETRO, Instituto Nacional de Meterologia, Normalização e Qualidade. Orientação sobre a validação de métodos de ensaios químicos. 2007.
JJEMBA, P. K. The potencial impact of veterinary and human therapeutic agents in manure and biosolids on plants grown on arable land: a review. Agriculture,
Ecosystems and Environment, v. 93, p. 267-278, 2002.
KEMPER, N. Veterinary antibiotics in the aquatic and terrestrial environment.
Ecological Indicators, v. 8, n. 1, p. 1-13, 2008.
KRISTENSON, E.; BRINKMAN, U.; RAMOS, L. Recent advances in matrix solid- phase dispersion. TrAC Trends in Analytical Chemistry, v. 25, n. 2, p. 96-111, 2006.
KUMMERER, K. Antibiotics in the aquatic environment--a review--part I.
Chemosphere, v. 75, n. 4, p. 417-34, 2009.
LOPEZ-SERNA, R.; PETROVIC, M.; BARCELO, D. Development of a fast instrumental method for the analysis of pharmaceuticals in environmental and
wastewaters based on ultra high performance liquid chromatography (UHPLC)- tandem mass spectrometry (MS/MS). Chemosphere, v. 85, n. 8, p. 1390-9, 2011.
MAPA, Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Exportação brasileira. 2015. Disponível em: < http://www.agricultura.gov.br/animal/exportacao >.
MAPA, Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Guia de validação e controle de qualidade analítica para fármacos em produtos para alimentação animal e medicamentos veterinários, 2011.
MARTINEZ-CARBALLO, E.; GONZALEZ-BARREIRO, C.; SCHARF, S.; GANS, O. Environmental monitoring study of selected veterinary antibiotics in animal manure and soils in Austria. Environmental Pollution, v. 148, n. 2, p. 570-9, 2007.
NIETO, A.; BORRULL, F.; MARCÉ, R. M.; POCURULL, E. Pressurized Liquid Extraction of Contaminants from Environmental Samples. Current Analytical
Chemistry, v. 4, p. 157-167, 2008.
ORLANDO, R. M.; RATH, S. Sistema de extração em fase sólida utilizando potenciais elétricos e seu processo de extração, BR Pat. BR200703755-A2, 2009.
ORLANDO, R. M.; ROHWEDDER, J. J. R.; RATH, S. Electric Field-Assisted Solid Phase Extraction: Devices, Development and Application with a Cationic Model Compound. Chromatographia, v. 77, n. 1-2, p. 133-143, 2014.
PAVLOVIĆ, D. M.; BABIĆ, S.; HORVAT, A. J. M.; KASTELAN-MACAN, M. Sample preparation in analysis of pharmaceuticals. TrAC Trends in Analytical Chemistry, v. 26, n. 11, p. 1062-1075, 2007.
PEREIRA, L. A.; JARDIM, I. C. S. F.; FOSTIER, A. H.; RATH, S. Ocorrência, comportamento e impactos ambientais provocados pela presença de antimicrobianos veterinários em solo. Quimica Nova, v. 35, n. 1, p. 159-169, 2012.
PERUCHI, L. M. Antimicrobianos veterinários: estudos de sorção em solos e desenvolvimento e validação de métodos para a determinação em medicamentos. 2015. Tese de doutorado. Química Analítica, Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Campinas-SP.
PROSEN, H. Applications of liquid-phase microextraction in the sample preparation of environmental solid samples. Molecules, v. 19, n. 5, p. 6776-808, 2014.
RIBEIRO, C. C. Avaliação da aplicação de potencial elétrico em extração em fase sólida na determinação de sulfonamidas e fluoroquinolonas em ovos. 2014. Tese de doutorado. Química Analítica, Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Campinas-SP.
RUNNQVIST, H.; BAK, S. A.; HANSEN, M.; STYRISHAVE, B.; HALLING- SORENSEN, B.; BJORKLUND, E. Determination of pharmaceuticals in environmental and biological matrices using pressurised liquid extraction--are we developing sound extraction methods? Journal of Chromatography A, v. 1217, n. 16, p. 2447-70, 2010.
SANCHEZ-PRADO, L.; GARCIA-JARES, C.; DAGNAC, T.; LLOMPART, M. Microwave-assisted extraction of emerging pollutants in environmental and biological samples before chromatographic determination. TrAC Trends in Analytical
Chemistry, v. 71, p. 119-143, 2015.
SHELVER, W. L.; HAKK, H.; LARSEN, G. L.; DESUTTER, T. M.; CASEY, F. X. Development of an ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry multi-residue sulfonamide method and its application to water, manure slurry, and soils from swine rearing facilities. Journal of Chromatography A, v. 1217, n. 8, p. 1273-82, 2010.
SINDAN, Sindicato Nacional da Indústria de Produtos para a Saúde Animal Compêndio de Produtos Veterinários. 2015. Disponível em: < http://www.cpvs.com.br/cpvs/ >.
SLANA, M.; DOLENC, M. S. Environmental Risk Assessment of antimicrobials applied in veterinary medicine-A field study and laboratory approach. Environmental
Toxicology and Pharmacology, v. 35, n. 1, p. 131-41, 2013.
STOOB, K.; SINGER, H. P.; GOETZ, C. W.; RUFF, M.; MUELLER, D. R. Fully automated online solid phase extraction coupled directly to liquid chromatography- tandem mass spectrometry. Quantification of sulfonamide antibiotics, neutral and acidic pesticides at low concentrations in surface waters. Journal of
Chromatography A, v. 1097, n. 1-2, p. 138-47, 2005.
STOOB, K.; SINGER, H. P.; STETTLER, S.; HARTMANN, N.; MUELLER, S. R.; STAMM, C. H. Exhaustive extraction of sulfonamide antibiotics from aged agricultural soils using pressurized liquid extraction. Journal of Chromatography A, v. 1128, n. 1-2, p. 1-9, 2006.
TADEO, J. L.; PÉRES, R. A.; ALBERO, B.; GARCÍA-VALCÁRCEI, A. L.; SÁNCHES- BRUNETE, C. Review of sample preparation techniques for the analysis of pesticide residues in soil. Journal of AOAC International, v. 95, n. 5, p. 1258-1271, 2012.
USDA, United States Department of Agriculture, Natural Resources Conservation Service, Soil Survey Staff. Keys to soil taxonomy. Washington, 2010.
VAZQUEZ-ROIG, P.; SEGARRA, R.; BLASCO, C.; ANDREU, V.; PICÓ, Y. Determination of pharmaceuticals in soil and sediments by pressurizes liquid extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry. Journal of
Chromatography A, v. 1217, p. 2471-2483, 2010.
VAZQUEZ-ROIG, P.; PICÓ, Y. Pressurized liquid extraction of organic contaminants in environmental and food samples. TrAC Trends in Analytical Chemistry, v. 71, p. 55-64, 2015.
VAZQUEZ-ROIG, P.; SEGARRA, R.; BLASCO, C.; ANDREU, V.; PICO, Y. Determination of pharmaceuticals in soils and sediments by pressurized liquid extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry. Journal of
Chromatography A, v. 1217, n. 16, p. 2471-83, 2010.
ZHOU, L. J.; YING, G. G.; LIU, S.; ZHAO, J. L.; CHEN, F.; ZHANG, R. Q.; PENG, F. Q.; ZHANG, Q. Q. Simultaneous determination of human and veterinary antibiotics in various environmental matrices by rapid resolution liquid chromatography- electrospray ionization tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A, v. 1244, p. 123-38, 2012.