Composto ν(OH) ν(C=O) ω(C-Harom.) ν(M-O)
Lapachol (HLp) 3352 1661, 1639 724 --- [Ga(Lp)3]·H2O (1) --- 1635, 1574 735 460, 447
[Bi(Lp)2]C (2) --- 1634, 1623 729 489, 472
5.2 Avaliação da atividade antiangiogênica do lapachol e seus complexos de gálio(III) e bismuto(III)
A atividade antiangiogênica do lapachol, seus complexos de gálio(III) e bismuto(III) e os sais Ga(NO3)3 e BiC3 foi investigada utilizando-se um modelo animal de angiogênese
inflamatória induzida por implante de esponja. Este modelo tem sido amplamente utilizado para induzir respostas inflamatórias crônicas, permitindo a caracterização dos principais componentes do tecido fibrovascular.18,19
17 F. Caruso, M. A. Martínez, M. Rossi, A. Goldberg, M. E. C. Villalba, P. J. Aymonino, Inorg. Chem. 48 (2009)
3529.
18 A.V. Belo, F. Leles, L.S. Barcelos, M.A.N.D. Ferreira, Y.S. Bakhle, M.M. Teixeira, S.P. Andrade,
Microcirculation 12 (2005) 597.
94
5.2.1 Atividade Antiangiogênica
A atividade antiangiogênica dos compostos foi determinada através da avaliação da extensão da vascularização dos implantes, onde detectou-se a quantidade de hemoglobina no tecido.
Inicialmente, a atividade antiangiogênica foi estudada através da administração per os dos compostos, utilizando-se uma dose de lapachol de 25 mg/Kg/dia.20 Doses equivalentes ao lapachol foram utilizadas para os demais compostos.
Após tratamento per os (lapachol 25 mg/Kg/dia), apenas o complexo [Bi(Lp)2]C (2)
reduziu estatisticamente a quantidade de hemoglobina nos implantes, conforme observado na Figura 5.4. Os grupos tratados com lapachol, [Ga(Lp)3]H2O (1) e os sais Ga(NO3)3 e BiC 3 não
foram capazes de diminuir a neovascularização dos implantes.
Figura 5.4. Efeitos na vascularização dos implantes induzidos pelo lapachol, seus complexos de gálio(III) (1) e bismuto(III) (2) e os sais Ga(NO3)3 e BiC3 no modelo de angiogênese inflamatória induzida por implante de
esponja (n = 6-8) para tratamento per os, utilizando-se uma dose de lapachol igual a 25 mg/Kg/dia. Doses dos demais compostos equivalentes à dose de lapachol. Estatisticamente diferente em comparação com o grupo controle: *P < 0,05.
Os resultados obtidos para o tratamento per os estimularam a avaliação de efeitos dose- resposta. No entanto, doses maiores dos compostos não foram utilizadas visto que altas doses de lapachol (80-100 mg/dia) apresentam efeitos tóxicos.9 Por isso, novos experimentos per os foram realizados, utilizando-se doses dez vezes menores de lapachol, seu complexo [Bi(Lp)2]C (2) e o
sal BiC3 (Figura 5.5). Neste caso, nenhuma diferença estatística foi verificada para os níveis de
hemoglobina dos grupos tratados com relação ao grupo controle.
20 D.P. Bezerra, A.P. Alves, N.M. De Alencar, R.O. Mesquita, M.W. Lima, C. Pessoa, M.O. De Moraes, J.N. Lopes,
95 Doses menores de [Ga(Lp)3]H2O (1) e Ga(NO3)3 não foram utilizadas, pois nenhum dos
dois compostos apresentou atividade na concentração de lapachol 25 mg/Kg/dia.
Figura 5.5. Efeitos na vascularização dos implantes induzidos pelo lapachol, seu complexo de bismuto(III) e o sal BiC3 no modelo de angiogênese inflamatória induzida por implante de esponja (n = 6-8) para tratamento
per os, utilizando-se uma dose de lapachol igual a 2,5 mg/Kg/dia. Doses dos demais compostos equivalentes à dose de lapachol.
Para continuação da investigação da atividade antiangiogênica do lapachol e seu complexo [Bi(Lp)2]C (2), tratamento intraperitoneal (i.p.) foi realizado para lapachol 25
mg/Kg/dia e doses equivalentes de 2 e BiCl3. Os resultados obtidos são apresentados na Figura
5.6.
No tratamento i.p., a quantidade de hemoglobina nos implantes dos animais tratados com veículo foi 0,79 ± 0,18 µgHb mg-1 de tecido úmido. A administração i.p. reduziu a neovascularização dos implantes para os animais tratados com lapachol e seu complexo de bismuto(III), onde os níveis de hemoglobina diminuíram cerca de 50 % em ambos os casos. Uma vez que não foi observada diferença estatística entre lapachol e [Bi(Lp)2]C (2), a redução de
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Figura 5.6. Efeitos na vascularização dos implantes induzidos pelo lapachol, seu complexo de bismuto(III) (2) e o sal BiC3 no modelo de angiogênese inflamatória induzida por implante de esponja (n = 6-8) para
tratamento i.p. utilizando-se uma dose de lapachol igual a 25 mg/Kg/dia. Doses dos demais compostos equivalentes à dose de lapachol. Estatisticamente diferente em comparação com o grupo controle. *P < 0,05.
A discrepância entre os resultados dos tratamentos per os e i.p. é decorrente de modelos de administração distintos. A administração per os compreende um grande número de variáveis, tais como taxa de dissolução dos compostos e o baixo pH do estômago. Considerando que estes fatores podem influenciar a absorção e biodisponibilidade dos compostos, eles podem ter sido responsáveis pela perda de atividade do lapachol no tratamento per os. Desta forma, os resultados sugerem que a coordenação ao bismuto(III) em 2 foi uma boa estratégia para melhorar o perfil antiangiogênico do lapachol após administração per os.
5.2.2 Medidas de Acumulação de Leucócitos
Componentes inflamatórios da inflamação crônica induzida por esponja foram determinados para os animais tratados com lapachol, [Bi(Lp)2]C (2) e BiC 3. O número de
leucócitos nos implantes foi avaliado para os tratamentos per os (lapachol 25 mg/Kg/dia e 2,5 mg/Kg/dia) e i.p. (lapachol 25 mg/Kg/dia).
A infiltração de células mononucleares nos implantes foi quantificada através da presença da enzima N-acetilglicosaminidase (NAG), a qual está presente em grande quantidade em macrófagos ativados. Por sua vez, o número de neutrófilos nos implantes foi medido pela determinação da atividade de mieloperoxidase (MPO).21,22
Após administração per os com lapachol 25 mg/Kg/dia e doses equivalentes de [Bi(Lp)2]C e BiC3, a atividade de NAG foi inibida com relação ao grupo controle apenas pelo
21 J.B. Mendes, P.P. Campos, M.A. Rocha, S.P. Andrade, Life Sci. 84 (2009) 537.
22 M.A. Ferreira, L.S. Barcelos, P.P. Campos, A.C. Vasconcelos, M.M. Teixeira, S.P. Andrades, Br. J. Pharmacol.
97 complexo de bismuto(III). Por outro lado, a atividade de NAG no tratamento i.p. (lapachol 25 mg/Kg/dia) foi estatisticamente diminuída nos animais tratados com lapachol e [Bi(Lp)2]C ,
indicando um efeito nesta população de células inflamatórias. Estes resultados concordam com a redução de neovascularização, onde a coordenação do lapachol ao bismuto(III) melhorou a atividade do lapachol na administração per os.
Após tratamento per os utilizando lapachol 2,5 mg/Kg/dia e doses equivalentes dos demais compostos, nenhuma diferença estatística foi observada entre a atividade de NAG dos grupos tratados e do grupo controle. Então, neste caso, [Bi(Lp)2]C não é capaz de interferir no
recrutamento de macrófagos.
Em ambos os tratamentos, per os e i.p., atividade de MPO nos implantes não foi reduzida, sugerindo que os compostos estudados são incapazes de reduzir recrutamento/ativação de neutrófilos neste modelo de angiogênese inflamatória.
Figura 5.7. Efeitos na acumulação de macrófagos induzidos pelo lapachol, seu complexo de bismuto(III) e o sal BiC3 no modelo de angiogênese inflamatória induzida por implante de esponja (n = 8-13). A) Tratamento
per os com dose de lapachol igual a 25 mg/Kg/dia; B) Tratamento per os com dose de lapachol igual a 2,5
mg/Kg/dia; C) Tratamento i.p. com dose de lapachol igual a 25 mg/Kg/dia. Doses dos demais compostos equivalentes à dose de lapachol. Estatisticamente diferente em comparação com o grupo controle. *P < 0,05 e **P < 0,01.
5.2.3 Análise Histológica
Nenhum sinal de infecção ou rejeição foi observado no local do implante ou na incisão durante o período de nove dias do experimento.
A análise histológica (Figura 5.8) mostrou que o procedimento utilizado na avaliação da atividade antiangiogênica induziu uma resposta fibrovascular, causando a formação de novos tecidos na esponja sintética.
Os implantes retirados do grupo controle apresentaram um denso infiltrado inflamatório com vários tipos de células, tais como leucócitos e microvasos. Nos grupos tratados com o lapachol e seu complexo de bismuto(III), a vascularização e a quantidade de células
98 inflamatórias diminuíram, conforme esperado, para compostos com propriedades antiangiogênicas e anti-inflamatórias.
Figura 5.8. Corte histológico representativo de tecido fibrovascular induzido em implante de esponja em camundongos suíços após 9 dias de implantação. Formação de tecidos A) no implante do grupo controle; B) no implante do grupo tratado com lapachol C) no implante do grupo tratado com complexo de bismuto(III). A barra correspondente a 100 µm.
99
Capítulo 6. Complexos de antimônio(III) e estanho(IV) de tiossemicarbazonas derivadas de