5. Mandatory Headers
5.5. Newsgroups
Os resultados obtidos para a atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis sobre Escherichia coli estão apresentados nas figuras 2 – 6 e na tabela 3.
Todas as cepas de E. coli testadas mostraram-se sensíveis a ação bactericida deste liófilo, e esta atividade aumentou com o tempo de incubação, sem que fosse observado o recrescimento ao longo das 24 horas de contato.
A diminuição da população inicial das cepas de E. coli foi superior à 2,0 log10 após 24 horas de contato e dependente da cepa testada.
Quando comparadas ao controle todas as culturas de E. coli associadas ao liófilo apresentaram nas primeiras quatro horas e meia de contato um bloqueio significativo no crescimento superior 1,5 log10 UFC/mL p≤ 0,001, exceto a IC 05 cujo decréscimo foi de 1,28 log10 UFC/mL.
E. coli IC 12 mostrou maior sensibilidade à ação do liófilo, cuja redução significativa
Atividade do liófilo de Zymomonas mobilis frente a
Escherichia coli ATCC
0 3 6 9 0 3 6 9 12 15 18 21 24 H O R A S controle contato
Figura 2 – Atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis frente a Escherichia coli ATCC 25922
Atividade do liófilo de Zymomonas mobilis frente a Escherichia coli IC 05 0 3 6 9 0 3 6 9 12 15 18 21 24 H O R A S controle contato
Figura 3 – Atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis frente a cepa Escherichia coli IC 05
Atividade do liófilo de Zymomonas mobilis frente a
Escherichia coli IC 10 0 3 6 9 0 3 6 9 12 15 18 21 24 H O R A S controle contato
Figura 4 – Atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis frente a cepa Escherichia coli IC 10
Atividade do liófilo de Zymomonas mobilis frente a Escherichia coli IC 12 0 3 6 9 0 3 6 9 12 15 18 21 24 H O R A S controle contato
Figura 5 – Atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis frente a cepa Escherichia coli IC 12
Atividade do liófilo de Zymomonas mobilis frente a
Escherichia coli IC 15 0 3 6 9 0 3 6 9 12 15 18 21 24 H O R A S controle contato
Figura 6 – Atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis frente a cepa Escherichia coli IC 15
Tabela 3. Atividade bactericida do liófilo de Zymomonas mobilis frente as cepas de Escherichia coli.
Unidades Formadoras de Colônias –Log10 UFC/mL
E. coli IC 05 E. coli IC 10 E. coli IC 12 E. coli IC 15 E. coli ATCC
25922 E. coli Horas Controle X s± Contato X s± Controle X s± Contato X s± Controle X s± Contato X s± Controle X s± Contato X s± Controle X s± Contato X s± 0 6,50 ± 0,02 6,33 ± 0,04 6,38 ± 0,05 6,31 ± 0,09 6,70 ± 0,06 6,37 ± 0,07 6,34 ± 0,08 6,03 ± 0,04 6,54 ± 0,03 6,16 ± 0,09 1,5 6,76 ± 0,01 6,50 ± 0,04 7,13 ± 0,08 6,41 ± 0,12 7,07 ± 0,08 6,48 ± 0,06 7,05 ± 0,05 6,27 ± 0,01 6,42 ± 0,05 6,28 ± 0,06 3 7,75 ± 0,02 6,64 ± 0,05 7,89 ± 0,04 6,39 ± 0,05 8,11 ± 0,11 6,59 ± 0,06 7,61 ± 0,02 6,42 ± 0,08 7,69 ± 0,05 6,37 ± 0,07 4,5 7,90 ± 0,02 6,62 ± 0,02 8,22 ± 0,15 6,40 ± 0,11 8,18 ± 0,08 6,62 ± 0,02 8,15 ± 0,09 6,49 ± 0,03 8,07 ± 0,06 6,29 ± 0,09 6 8,34 ± 0,04 6,53 ± 0,01 8,27 ± 0,10 6,38 ± 0,09 8,24 ± 0,06 6,47 ± 0,02 8,08 ± 0,08 6,49 ± 0,05 7,90 ± 0,13 6,30 ± 0,05 9 8,42 ± 0,05 6,33 ± 0,02 8,38 ± 0,05 6,42 ± 0,04 8,31 ± 0,08 6,44 ± 0,05 8,24 ± 0,08 6,58 ± 0,03 8,46 ± 0,02 6,43 ± 0,04 12 8,62 ± 0,01 6,24 ± 0,01 8,39 ± 0,06 6,41 ± 0,07 8,41 ± 0,10 6,17 ± 0,11 8,36 ± 0,06 6,45 ± 0,06 8,60 ± 0,03 6,32 ± 0,14 18 8,62 ± 0,04 6,08 ± 0,03 8,55 ± 0,03 6,30 ± 0,07 8,54 ± 0,07 6,04 ± 0,12 8,45 ± 0,04 6,40 ± 0,04 8,47 ± 0,07 6,17 ± 0,08 24 8,41 ± 0,01 5,58 ± 0,02 8,65 ± 0,01 5,68 ± 0,04 8,53 ± 0,03 5,08 ± 0,05 8,44 ± 0,04 6,33 ± 0,02 8,34 ± 0,03 6,14 ± 0,14 X= média s = desvio padrão IC = Isolado Clínico
ATCC = American Type Culture Collection
Em estudos prévios e não publicados sobre a atividade antagonista das culturas de
Zymomonas mobilis em diferentes fases de crescimento, foi evidenciada uma superioridade da
cultura de Zymomonas mobilis incubada por nove horas. Esta superioridade foi refletida na inibição da viabilidade celular e bloqueio do recrescimento do microrganismo teste. Esta constatação justificou a utilização neste trabalho, de uma cultura de Zymomonas mobilis incubada por nove horas, para obtenção do liófilo.
Durante cinco meses de estocagem o liófilo manteve suas características organolépticas, pureza microbiana e viabilidade celular inalteradas. Esta última, relacionada à atividade antagonista.
Embora os autores discordem quanto à quantidade de células viáveis que deva conter o probiótico para induzir uma atividade biológica, eles são unânimes em afirmar a importância da manutenção da cultura íntegra e viável (RASIC; KURMANN, 1983; FORESTIER et al., 2000).
Objetivando uma formulação probiótica estável a cultura de Z. mobilis foi liofilizada e padronizada.
Os mecanismos de ação dos probióticos são discutidos em vários trabalhos, mas detalhes desta ação, principalmente nos estudos in vitro não são conclusivos (REID, 1998).
Ao longo do crescimento, microrganismos probióticos biossintetisam substâncias de caráter antimicrobiano, a exemplo do ácido lático, implicado na inibição, por exemplo, de salmonelas (VANDVOORD et al., 1991).
Falcão de Morais et al., (1993) numa revisão sobre Z. mobilis, encontrou valores relativamente altos de acetaldeído, álcool isoamilíco e n-propanol detectados por cromatografia gasosa no destilado de Z. mobilis das cepas Ag 11 e CP 1, mas a atividade antimicrobiana destes compostos nunca fora testada.
As bacteriocinas também são substâncias implicadas na atividade antagônica. Embora nenhum estudo tenha sido realizado tentando relacionar a presença e a quantidade de bacteriocinas ao longo do crescimento de Z. mobilis, estudos recentes realizados por Lima (2002) detectaram a presença de uma substância com caráter microbicida na cultura de Z.
mobilis incubada por 24 horas.
A ação de uma bacteriocina produzida por Z. mobilis, possuindo ou não correlação com outras substâncias, poderia ser a chave da atividade antagonista deste microrganismo, embora muitos dos microrganismos por ela inibidos também biossintetisem proteínas, a exemplo das colinas produzidas por Escherichia coli.
Os questionamentos em relação à substância ou substâncias que isoladamente ou em conjunto desencadeiam a atividade antagônica da cultura de Z. mobilis, suas reações químicas com receptores da mucosa vaginal ou intestinal e suas manifestações in vivo continuarão a ser exploradas.
6 − C O N C L U S Õ E S
A partir da cultura de Zymomonas mobilis foi obtido um liófilo, que se manteve estável ao longo dos cinco meses de estocagem, quanto as suas características organolépticas e a viabilidade celular.
A caracterização deste liófilo em tecnologia farmacêutica satisfez as exigências descritas na farmacopéia, embora esta caracterização possa ser modificada, dependendo da forma farmacêutica escolhida.
A análise granulométrica das partículas do liófilo apresentou uma homogeneidade compatível com diversas formas farmacêuticas.
Todas as cepas de Escherichia coli estudadas mostraram-se sensíveis à atividade bactericida do liófilo. Esta atividade aumentou com o tempo de contato.
Durante as primeiras horas de contato com o liófilo, todas culturas de E. coli testadas tiveram seu crescimento inibido e não foi verificado recrescimento ao longo das 24 horas.
Das cepas testadas, E. coli IC 12 mostrou a maior sensibilidade ao liófilo ao longo das 24 horas.
7 − R E F E R Ê N C I A S B I B L I O G R Á F I C A S
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