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ORF138D1-43 (-)

ORF138D1-43 (+)

ORF138D58-138 (-)

ORF138D58-138 (+)

ORF138D77-138 (-)

ORF138D77-138 (+)

ORF138 (-)

ORF138 (+)

ORF138D62-76 (-)

ORF138D62-76 (+)

73

55

40

33

24

B

C

Figure 30

A : Représentation schématique des différentes troncatures de l’ORF138.

B : Courbe de croissance d’E. coliexprimant les différentes protéines ORF138. (-) sans IPTG, (+)

avec 1 mM d’IPTG.

C : Détection immunologique des protéines ORF138 tronquées. Les symboles utilisés pour les

courbes de croissance sont ici répétés en face de la piste correspondante. Les extraits protéiques

sont effectués à partir de 1/20 DO600nm à l’exception des extraits de l’ORF138D1-43 qui sont

effectués à partir de 1/400 DO600nm.

Les chiffres sur la gauche indiquent les différentes tailles du marqueur en kDa.

ORF138D1-43

ORF138D58-138

ORF138D77-138

ORF138D62-76

= 1 Acide Aminé

= Domaine Transmembranaire prédit = Domainep

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CHAPITRE II

LOCALISATION CELLULAIRE ET

SUBMITOCHONDRIALE DE L’ORF138

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