presente invention. Les fractions ainsi obtenues sont separees
ou
encore purifiees des autres constituantdu microbe
et deson
milieu de culture parun
procede approprie, parexemple
par centrifugationou
par filtration.On
30 parle alors de fraction antigenique
ou
d'antigene purifie.Le microbe
entierou une quelconque
fractiondu microbe
est appele ci-apres "antigeneparticulate
ou
corpusculaire" en ceque
lemicrobe
entierou une
de ses fractions ne peut pas etre mis en solution par dissolution, maisuniquement
en suspension dansun
fluide approprie.Les microbes
ou
leur fraction ainsi deposes sontremarquablement
5
nettement
visibles en tantque
particules individualisees par observationmicroscopique
a Paide d'unmicroscope
optiqueou
d'unmicroscope
electronique par exemple.Techniquement,
la serologiemicrobienne
consiste a detecter dans leserum du
patientune
reaction antigene—
anticorps dans laquelle l'antigene10 est represente par tout
ou
fraction de l'agent microbien infectieux a detecter et Fanticotps est represente par lesimmunoglobulines humaines ou
animales specifiques dudit agentmicrobien
infectieux presentes dans leserum du
patient. Elle peut etre quantifiee en testant successivementune
serie de dilutions croissantes de raison 2
ou
de raison 10du serum du
15 patient a partir d'une premiere dilution au
1/16 ou
bien au1/50 du serum du
patient.Dans un mode
prefere de realisation,pour chaque
detection et, le cas echeant, quantification d'un dit antigene vaccinal,on
realise lesmesures
suivantes :20 1-
une
premieremesure
d'une premiere valeur representative de laquantite d'un premier
element
demarquage ou
"marqueur", de preferencela premiere valeur de l'intensite d'un signal emis par ledit premier
element
demarquage,
de preference encore fluorescent, ledit premier element demarquage
se fixant demaniere non
specifique sur toute proteine dans la 25zone
dedepot
dudit antigene vaccinal, et2-
une deuxieme mesure
d'unedeuxieme
valeur representative de laquantite d'un
deuxieme
element demarquage
emettantun
signal different dudit premier element demarquage
et emettantun
signal different, de preferenceune deuxieme
valeur de l'intensitedu
signal emis par ce 30deuxieme
element demarquage,
de preference encore fluorescent aune
WO
2005/06434025
PCT/FR2004/003364
longueur d'onde d'excitation differente de celle dudit premier element de
marquage
fluorescent, leditdeuxieme
element demarquage
etant 1'element demarquage
de laditeseconde
substance de detection dudit antigene vaccinal, dans lazone
de depot dudit antigene, et5 3-
on
calcule le rapport desdites premiere etdeuxieme
valeurs, et4-
on compare
la valeur dudit rapport a celle d'un rapport de referenceobtenu
avecune
collection de serums de reference positifs et negatifs, permettant ainsi parcomparaison
de determiner la necessiteou non
de vacciner lapersonne pour
ledit antigene vaccinal selon la valeurdu
10 rapport desdites premiere et
deuxieme
valeurs.La
presente invention fournit egalementune
trousse de diagnostic utilepour
la mise en oeuvre d'unemethode
selon Tinvention, caracterisee en ce qu'ellecomprend
:- au
moins un
dit support solide ,de preferenceun
unique sur15 support solide , sur le(s)quel(s) sont fixes au
moins un
dit antigenemicrobien
et le(s) dit(s) antigene(s) de controle, et- la (ou les) dite(s) substance(s) de detection et reactifs utiles
pour
larevelation des dits elements de element de
marquage
et le cas echeant desdits elements de marquage.20
De
preference,une
trousse selon l'invention,comprend
:-
un meme
dit support solide sur lequel sont fixes par adsorption physique aumoins un
dit antigene corpusculaire et les dits antigenes de controle, et-
Tune
aumoins
d'unememe
dite premiereou deuxieme
substance de25 detection
pour
detecter les differents antigenes microbiens.Avantageusement,
dans lesmethodes
et trousses de diagnostic selon l'invention,on
utilisecomme
support solideune
lame de verreou
en plastique,un
tube de titrageou un
puits d'une plaque de microtitrage enplastique, et plus particulierement,
comme
support solide,on
peut utiliser tout dispositif adapte a la manipulation de suspensions cellulaires et bacteriennes etnotamment
des tubes, des lames de verreou
de polymeres, des tubes "bijoux"ou
des plaques rigides de microtitration en polyethylene,5 polystyrene, chlorure .
Pour
lamise
en oeuvre d'unemethode
selon la presente invention, il est possible de prelever leserum
parune ponction
veineuse a Faiguilleou
bien parprelevement
de sang capillaire,notamment
a partirdu
lobe deForeille, de la pulpe
du
doigt,du
talon, couple aun
recueil surun
disque10 de papier filtre
ou
de preference directement dansun tampon
permettantPelution
du
serum.Selon
une
autre caracteristique avantageuse de la presente invention,on
realise, apresun
prelevement de sang capillaire dansun
tube capillairepermettant de recueillir
un volume connu
de sang total, le recueil dudit15 echantillon dans
un
flacon contenantun volume connu
d'untampon
d'elution. Cette modalite de recueil originale presente
comme
avantages sarapidite (les recueil, elution, et dilution se faisant en
une
minute).Le
faitque le
serum
est dilue aune
concentration connue,notamment
de1/20
a1/100, est
une
securite de manipulation vis a visdu
risque d'accidents 20 d'exposition au sang telsque
transmission de virus et autres pathogenessanguins
pour
le preleveur.Par ailleurs, la presente invention
permet
la determinationdu
statut vaccinal de lapersonne
contre plusieurssimultanement
contre plusieurs antigenes vaccinaux, surun
seul echantillon de serum' preleve par ponction25 capillaire, dans
un
laps detemps
inferieur a 2 heures.Avantageusement, on
recueilleun volume
determine de sang total a
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EN MATIERE DE BREVETS (PCT)
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