Matériel et méthodes

Douze chiens Bergers Belges Malinois âgés de 2 à 5 ans (moyenne d’âge : 3,7 ans) sont inclus dans l’étude. Ils appartiennent au 132^ème Bataillon cynophile de l’armée de terre basée à Suippes (France). Ils sont logés en chenil, et sont entraînés cinq jours par semaine pour réaliser leurs missions opérationnelles (éclairage et assault). La note d’état corporelle des chiens est de 3 à 4 (moyenne : 3,4) sur une échelle de 9 points, et leur poids moyen de 29kg. Tous sont en bonne santé selon l’examen clinique, et les examens biochimiques pratiqués avant le début de l’étude. Ils sont nourris avec un aliment industriel formulé pour le chien adulte, sans spécificité liée à l’exercice physique (Profine®, Adult dog)

3.3.1.2. Le supplément nutritionnel

Le supplément testé est constitué d’un mélange de 25% de maltodextrine IT19 , et de 75% d’une source de protéine (protamine- BCF®). La dose distribuée par chien est de 2g/ kg de poids corporel du mélange dilué dans 150mL d’eau. La solution est bue spontanément par l’ensemble des chiens sous le contrôle permanent d’un vétérinaire. Ce supplément est distribué cinq minutes après la fin de la période d’exercice physique du chien. Le groupe non-supplémenté consomme 150mL d’eau pure.

3.3.1.3. Le protocole d’exercice physique

Chaque chien effectue deux fois le protocole d’exercice physique (étude en cross-over) : une fois dans le groupe non supplémenté (CG : groupe contrôle), et une fois dans le groupe non supplémenté (SG : groupe supplémenté). Entre les deux sessions d’exercice, une période de washout de 15 jours sans consommation de supplément a eu lieu. La session durant laquelle le chien est supplémenté a été déterminée par table de randomisation.

Le protocole (figure 22) comprend trois périodes d’exercice physique pour le chien séparées entre elles par une heure de récupération. Chaque période inclut : trois allers-retours sur 50 mètres à vitesse maximale (obtenus grâce à un objet de motivation porté par un homme assistant), puis 20 minutes de course à 14km/h (vitesse contrôlée par un GPS fixé sur le vélo du conducteur cynotechnique), puis trois allers-retours à vitesse maximale sur 50 mètres à

nouveau. Durant la course, les chiens portent un harnais mais n’effectue aucun effort de traction (course au pied, pratiquées de manière hebdomadaire dans les deux mois précédents les tests afin d’habituer les chiens à cette approche).

Figure 22 : protocole d’exercice physique suivi par les chiens.

S/P représente les moments où les chiens consomment le suppléments’ils sont dans le groupe supplémenté

.suivi des paramètres physiologiques pendant 30 minutes (Tn, Tn +10 min ; Tn+20 min ; Tn + 30 min).

Ce protocole a été validé par le comité d’éthique de la société MARS-ROYAL-CANIN, et le comité d’éthique de l’Ecole Nationale Vétérinaire d’Alfort.

Outre la présence de 12 personnels cynotechniciens du 132^ème BCAT, la présence de quatre vétérinaires aux relevés individuels de paramètres physiologiques et prélèvements sanguins, ainsi que deux vétérinaires en charge du traitement immédiat des prélèvements fut nécessaire.

3.3.1.4.Les paramètres biologiques Paramètres physiologiques

Les paramètres physiologiques sont relevés :

- avant le début de chaque période d’exercice (T0, T2, T4),

- pendant la phase de récupération immédiate à 10, 20 et 30 minutes après la période d’exercice (T1+10mn, T1+20mn, T1+30mn, T3+10mn, T3+20mn, T3+30mn, T5+10mn, T5+20mn, T5+30mn) ;

- une heure après la fin des trois périodes d’exercice (T6).

Les paramètres physiologiques relevés incluent : la température rectale, la fréquence cardiaque (prise au pouls et au stéthoscope), et la fréquence respiratoire (mesurée gueule fermée).

Prise de sang

Une prise de sang est effectuée à la veine jugulaire droite ou gauche du chien à T0, T4, T5, T6. Le sang est réparti entre deux tubes secs, et un tube hépariné.

Paramètres biochimiques

- Les lactates sont analysés immédiatement après prélèvement sur sang total à l’aide d’un analyseur portatif Accutrend Plus (Roche®).

- Les triglycérides, le cholestérol, la glycémie, l’urée, la créatinine, les protéines totales, le sodium, le potassium, le magnesium, l’insuline, le glucagon, les créatines kinases, et la C-Reactive Protein (CRP) sont analysés. Après centrifugation immédiate des prélèvements et congélation du serum dans de la carboglace, ils sont analysés par un laboratoire vétérinaire (Iddex®) par kit de dosage spécifique de l’espèce canine. Les pro-BNP sont également analysées après prélèvement dans des tubes spécifiques (Cardiopet®) et envoie au laboratoire Iddex®.

Marqueurs de l’inflammation

Les interleukines IL1β, l’IL6, IL8, IL10, IL15, et le TNFα sont analysés au service de biochimie clinique de l’hopital Bichat (Paris). Immédiatement après prélèvement, le plasma est récupéré après centrifugation pour isolement des cellules mononuclées périphériques contenues dans le « buffle-coat ». Les cytokines sont ensuite dosées par dosage immunologique « Multiplex » en utilisant des anticorps spécifiques de l’espèce canine (Millipore Canine Cytokine 13-plex (Millipore®, Billerica, MA).

Marqueurs du stress oxydatif

Le glutathion réduit, glutathion oxydé, les AOPPs (Advanced Oxidation Protein Products), et la MPO plasmatique (myeloperoxydase) sont analysés après congélation du

plasma au laboratoire de l’hopital Bichat (Paris). Les AOPPs (Advanced Oxidation Proteins Products) ont été dosé selon la méthode décrite par Witko-Sarsat et al (2003). Le glutathion réduit (GSH) est dosé avec un kit canine Reduced Glutathione ELISA Kit (mybiosource®) selon le protocole du fabricant, et le GSSG par le kit Canine Oxidized Glutathione ELISA Kit (mybiosource®). La réaction se déroule à 25 °C pendant 10 min. Les lectures sont réalisées en absorbance ou en dérivée d'ordre deux avec le spectrophotomètre UV-visible Uvikon 860 (Kontron Instruments). Les spectres sont tracés entre 350 et 450 nm, avec une vitesse de balayage de 100 nm/min et un intervalle d'échantillonnage de 2 nm. La MPO est dosée sur un kit immunologique ELISA spécifique de l’espèce canine (MPO ELISA Kit-Cosmobio®).

Tests statistiques

Les tests statistiques ont été réalisés en utilisant les logiciels informatiques Tanagra et Statistical Analysis System (SAS). Des tests non paramétriques sont utilisés sur les données ne suivant pas une loi normale (paramètres physiologiques, cholestérol, CK, Mg, urée, glucagon, insuline, AOPP, GSH/GSSG): tests de Friedman et Wilcoxon. Sur les variables suivant une loi normale (lactates, glucose, pro-BNP, fructosamine, log triglycérides, log IL-6, log IL-8, log TNFα), des tests paramétriques (analyse de variance et covariance) sont réalisés. L’analyse de la kaliémie, la triglycéridémie, et de l’IL 10 a nécessité d’intégrer dans l’analyse statistique la valeur de ce paramètre à T0 en covariable, la valeur étant différente entre les lots à T0. Toutes les autres analyses ont inclus en covariable la durée de sprint total des chiens.