Chapitre 3 : Infections à pneumocoques
4. Marquage CE du test Pneumoresp
Pour le marquage CE du test PneumoResp, plusieurs expériences ont été réalisées et sont toujours en cours. Le Tableau 7 résume les tests effectués ou à faire.
Tableau 7. Expériences réalisées pour le marquage CE du PneumoResp. Expérience Objectif
Répétabilité Vérifier que le test est répétable en testant plusieurs fois le même échantillon dans les mêmes conditions Reproductibilité inter-jours Vérifier que le test donne les mêmes résultats
quel que soit le jour
Reproductibilité inter-lots Vérifier que le test donne les mêmes résultats quel que soit le lot
Reproductibilité inter-personnes Vérifier que le test donne les mêmes résultats quel que soit le manipulateur
Reproductibilité inter-lieux Vérifier que le test donne les mêmes résultats quel que soit le lieu
Robustesse de la solution 2 Vérifier la robustesse de la dilution de la solution 2 Robustesse de l’évaluation du test
après ouverture et variations de température
Vérifier que le test est robuste s’il est ouvert à des températures autres que celles préconisées Robustesse de la stabilité de
l’échantillon
Vérifier que le test fonctionne avec un échantillon ayant subi des variations de traitement (comme des écarts de
température ou des cycles de congélation) Robustesse du temps de lecture
Vérifier que des variations mineures de temps de lecture n’influent pas sur le résultat par rapport aux temps
indiqués dans la notice Robustesse du volume de
l’échantillon
Vérifier que des variations mineures de volume de l’échantillon n’influent pas sur le résultat par rapport au
volume indiqué dans la notice Robustesse du volume du tampon
pousseur
Vérifier que des variations mineures de volume du tampon n’influent pas sur le résultat par rapport au
volume indiqué dans la notice Interférences
Vérifier que les substances pouvant être présentes dans la matrice (par exemple du sang) n’influent pas sur les
résultats du test
Les tests restant à effectuer incluent les tests de stabilité afin de confirmer la date d’expiration de la trousse. Pour cela, une stabilité accélérée sera effectuée en mettant le produit dans une enceinte climatique à température plus élevée pendant un temps relativement court (par exemple 1 mois à 45°C). Une stabilité en temps réel sera aussi initiée. Des tests de variations de la température seront également effectués afin de mimer le transport des trousses sous différentes atmosphères et anticiper les chocs de température.
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MeningoSpeed : Test de diagnostic rapide de la
méningite à méningocoques dans le LCR
Nous avons repris les anciens travaux des équipes de l’Institut Pasteur de Paris (Chanteau et al. 2006 ; Agnememel et al. 2015) afin de développer nos bandelettes. Nous avons utilisé les mêmes anticorps monoclonaux NmA, NmC, NmY, NmW que ces équipes (anticorps déposés à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes). Pour NmX, nous avons produit cet anticorps polyclonal selon une méthode proche de celle utilisée précédemment.
Par rapport à la version précédente développée par l’Institut Pasteur, nous avons amélioré la sensibilité, le cut-off et la stabilité du test (conservation jusqu’à 2 ans à 30°C) par une amélioration de la conjugaison à l’or. Nous avons également réduit le volume nécessaire à la réalisation du test puisque 30 µl suffisent pour faire le TDR pour une cassette. Plusieurs versions du TDR ont été testées et un prototype final a été approuvé pour devenir le produit commercialisable (Figure 32). Pour des raisons de propriété industrielle et de confidentialité, il ne sera dévoilé ici ni les méthodes de conception ni les composants de la bandelette.
Figure 32. Différents prototypes testés pour le TDR MeningoSpeed.
La version commerciale est présentée à droite.
La version actuelle du test permet de détecter les sérogroupes principaux d’infection par N. meningitidis : NmA, NmC, NmW, NmX et NmY. Une cassette détecte les sérogroupes A et W, une autre détecte les sérogroupes C et Y et enfin une dernière cassette détecte le sérogroupe X. L’autre sérogroupe important en termes de santé publique, le sérogroupe B, n’est pour le moment pas inclus dans le panel de détection.
95 L’étape majeure faisant suite à la phase de mise au point était la validation du prototype choisi pour entrer en phase de commercialisation. Cette validation a pu avoir lieu grâce à l’interaction de BioSpeedia avec l’unité « Infections Bactériennes Invasives » de l’Institut Pasteur que dirige le Pr. Mohamed K. Taha et qui est aussi Centre national de référence des Méningocoques et Haemophilus influenzae et centre collaborateur de l'OMS pour les méningites bactériennes.
Nous décrivons dans ce premier article l’évaluation des performances du prototype choisi. Celui-ci a été envoyé et testé dans 7 centres différents (5 centres en Afrique : Côte d’Ivoire, Maroc, Niger, République Centrafricaine, Togo et 2 en France : CNR des méningocoques et CHU de Saint-Etienne). Au total, MeningoSpeed a été évalué sur 560 échantillons de LCS. Nous avons pu montrer, par rapport à un test PCR multiplex « maison » développé par l’Institut Pasteur utilisé comme « gold standard », que MeningoSpeed avait une sensibilité de 92,7% (IC 95% 0,89-0,95), une spécificité de 93.8% (IC 95% 0,90-0,96), une valeur prédictive positive de 95.6% (IC 95% 0,93-0,97) et une valeur prédictive négative de 89.83% (IC 95% 0,85-0,93) avec une concordance globale de 93.2%.
Ce TDR permet également de typer les sérogroupes A/C/W/X/Y. Sur les 319 échantillons positifs par PCR, les résultats étaient concordants avec le TDR pour 299 d’entre eux. La sensibilité était de 93.0%, 74.4%, 98.1%, 100% et 83.3% pour les sérogroupes A, C, W, X et Y, respectivement. La spécificité et la valeur prédictive négative étaient excellentes pour les 5 sérogroupes. En conclusion, le test MeningoSpeed a montré de très bonnes performances pour la détection rapides des antigènes de N. meningitidis dans le LCR.
L’article complet en version originale figure ci-après tel qu’il a été soumis à la revue
Journal of Clinical Microbiology. Les trois rapporteurs ont émis des avis plutôt très positifs
et l’article est en révision favorable.