Inhibiteur de PCSK9

Récemment, l’effet de l’inhibition de l’expression de PCSK9 (par l’utilisation d’oligonucléotides anti-sens et l’interférence ARN) (Graham et al, 2007 ; Frank-Kamenetsky et al, 2008 ; Gupta et al, 2010) ou de son activité (injection d’un anticorps monoclonal contre PCSK9) (Chan et al, 2009) sur le LDLR ont été testés dans des modèles animaux, incluant la souris et le singe, mais rien n’a été vérifié chez l’humain à ce jour.

3.3. Thérapie génique :

Les techniques de l’ADN recombinant ont été envisagées pour corriger les dyslipidémies monogéniques sévères qui restent hors de tout traitement curatif. Un nombre croissant d’expériences sont actuellement en cours d’étude pour le déficit en LPL, en MTP ou en LCAT chez l’animal. Toutefois, seule l’hypercholestérolémie familiale homozygote par déficit en récepteur des LDL a fait l’objet d’un des premiers essais de thérapie génique chez l’homme. Pour séduisantes que soient ces premières expérimentations, des questions tant éthiques que technologiques limitent encore le développement de telles stratégies. Elles sont essentiellement liées à la sécurité et à la biologie de la cellule. Le développement de méthodes peu invastives, utilisant des vecteurs non viraux permettant un ciblage tissulaire spécifique, sûr et durable, de la séquence à corriger en position « orthotopique », donnera son plein essor à ces traitements d’un genre nouveau.

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C. But du travail:

L’hypercholestérolémie à transmission autosomique dominante (ADH, OMIM#143890) est la plus fréquente et la plus sévère des hypercholestérolémies monogéniques. Elle est l’un des principaux facteurs de risque d’athérosclérose, première cause de mortalité et de morbidité dans les pays industrialisés et aussi dans notre pays. Au Maroc, en l’an 2000, 35.5% des décès étaient causés par les maladies cardiovasculaires en comparaison avec les maladies respiratoires (10.7%) et le cancer (11.7%). Le traitement médicamenteux moderne peut baisser efficacement les concentrations plasmatiques de cholestérol de nombreuses personnes ayant l’ADH. Les enquêtes effectuées par l’OMS sur les ADH ont révélé que ce problème n’est ni diagnostiqué ni traité, ou il reste insuffisamment diagnostiqué et traité dans la plupart des nations et pour la plupart des personnes concernées. Selon l’OMS, moins de 10% des membres des familles sont examinés sachant que la plupart des efforts soutenus pour identifier les ADH sont limités selon les régions.

Au Maroc, la majorité des patients hypercholestérolémiques ne sont diagnostiqués et traités qu’après l’apparition d’une maladie cardiaque et aucune étude génétique n’a été réalisée au nord du Maroc pour diagnostiquer les ADHs. Devant cette situation, nous avons mené cette étude chez la population du nord du Maroc en fixant les objectifs suivants :

 L’objectif majeur de notre étude est de déterminer, dans notre population, un diagnostique clinique et biologique de l’ADH en utilisant le programme MEDPED et les deux autres apporoches reconnus par l’OMS, le Simon Broome Register Group criteria et le Dutch Lipid Clinic Network criteria.

 Etudier les tois gènes impliqués dans l’ADH afin de déterminer le spectre des mutations du gène LDLR, du gène APOB et du gène PCSK9.

 Etudier la corrélation entre le génotype et le phénotype de l’ADH chez la population du Nord du Maroc.

 Déterminer le génotype de l’apoE et étudier la fréquence de ses allèles et leur influence sur le profil lipidique et les caractéristiques cliniques.

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A. Sujets Etudies:

La population étudiée comprend 46 probands qui ont été cliniquement diagnostiqués ADH selon les critères standards. Tous les patients sont originaires de la région du nord du Maroc : Tanger, Assilah, Tétouan, Sebta, Larache, Chefchaouen et El Hoceima. Ils ont été adressés aux laboratoires de l’Institut Pasteur de Maroc à Tanger et aux laboratoires d’analyse médicale de la ville de Tétouan pour effectuer un bilan lipidique. L’âge moyen de ces patients est de 57±10 ans. Les patients ont été sélectionnés en utilisant un questionnaire (annexe 1) comprenant les critères de diagnostique d’ADH selon les directives des trois approches de diagnostiques d’ADH reconnus par l’OMS (le programme MEDPED, le Simon Broome Register group criteria et le Dutch lipid Clinic Network criteria). Ces critères sont les taux élevés du cholestérol total (CT) et de cholestérol LDL (LDLc) dans le plasma (CT>250 mg/dl et LDLc > 190 mg/dl), concentrations normales de TG et de HDLc dans quatre visites de contrôle consécutives, antécédents familiaux en hypercholestérolémie, antécédents personnelles et/ou familiaux en maladies cardiovasculaires prématurées (MCVP), présence de xanthomes tendineux et/ou cutanés (Figure 9 et 10), présence d’arcs cornéens (Figure 11). Les causes secondaires de l’hypercholestérolémie tels que les diabètes, l’hypothyroïdie, syndromes néphrotiques, etc. ont été exclues. Lorsqu’il a été possible, des antécédents médicaux complets et des données familiaux détaillées ont été obtenus. L'indice de masse corporelle (BMI) a été calculé comme étant le poids divisé par la taille (kg/m2). La tension artérielle a été mesurée avec le Von Recklinghausen sphygmomanometer en position assise et après 5 minutes de repos. La maladie cardiovasculaire prématurée (MCVP) a été diagnostiquée d’après un historique documenté d’infarction myocardique précédente, une angioplastie, des antécédents d'angine de poitrine et des altérations dans l’électrocardiogramme (ECG).

Le groupe de témoins est formé de 89 individus, non apparentés, d’âge et de sexe identiques au groupe de patients, normocholestérolémiques et qui ne portent pas d’antécédents personnelles ou familiaux en ADH ou en maladies cardiovasculaires (MCV).

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Figure 11: Arc cornéen

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B. Analyses biochimiques:

1. Prélèvement du sang :

Les prélèvements du sang sont recueillis dans un tube sec après 12 heures de jeûne. Après centrifugation du sang à 3 500 rpm pendant 10 min, les sérums sont décantés et aliquotés. Les paramètres lipidiques suivants : CT, HDLc et TG, ont été dosés dans les 2 heures qui suivent le prélèvement. L’apolipoproteine B (apoB) a été dosée sur un sérum congelé et conservé à – 70°C.