Amostra recente Amostra ECCD Amostra recente Amostra ECCD
Conc. média (ng/ml) (n=6) 33,22 32,63 15497,54 15108,54
DPR (%) 13,32 6,77 2,28 14,59
Exatidão (%) 110,73 108,76 103,32 100,72
Variação (%) -1,78 -2,51
2.1.3.7.5 Estabilidade de solução padrão (ESP)
Para avaliação da estabilidade de solução padrão, soluções estoque dos fármacos em metanol:água (1:1) foram preparadas e armazenadas em geladeira por 6 horas, sendo em seguida feita a adição dos fármacos em plasma com estas soluções. As concentrações obtidas foram comparadas com aquelas de amostras nas quais as soluções padrão foram preparadas e imediatamente adicionadas em plasma (Tabela 50). Os resultados indicaram que não houve diferença significativa entre estas amostras, de forma que o armazenamento das soluções padrão em geladeira por até 6 horas não altera a estabilidade de artemeter e lumefantrina.
Tabela 50 – Resultados obtidos na avaliação da estabilidade de solução padrão do método bioanalítico para quantificação simultânea de artemeter e lumefantrina.
Artemeter 30 ng/ml Artemeter 800 ng/ml Parâmetros
Amostra recente Amostra ESP Amostra recente Amostra ESP
Conc. média (ng/ml) (n=6) 30,12 30,20 832,56 821,23 DPR (%) 3,81 2,67 4,05 2,72 Exatidão (%) 100,41 100,67 104,07 102,65 Variação (%) 0,26 -1,36 Lumefantrina 30 ng/ml Lumefantrina 15000 ng/ml Parâmetros
Amostra recente Amostra ESP Amostra recente Amostra ESP
Conc. média (ng/ml) (n=6) 28,24 32,29 15714,82 14857,09
DPR (%) 7,31 8,35 4,45 6,12
Exatidão (%) 94,14 107,62 104,77 99,05
Variação (%) 14,32 -5,46
Além disso, a estabilidade de artesunato em plasma também foi avaliada, por meio da adição de 50 µl da solução de padrão interno a 250 µl do plasma contendo os fármacos e permanência destas amostras a temperatura ambiente por 6 horas. Após
extração e análise, as concentrações plasmáticas de artemeter e lumefantrina obtidas foram comparadas com aquelas de amostras plasmáticas recém-preparadas (Tabela 51). Não foi verificada redução na área do padrão interno nas amostras de estabilidade. Para ambos os fármacos, as variações foram inferiores a 15%, demonstrando que não houve degradação do padrão interno no plasma, por até 6 horas, em temperatura ambiente.
Tabela 51 – Resultados obtidos na avaliação da estabilidade do padrão interno em plasma no método bioanalítico para quantificação simultânea de artemeter e lumefantrina.
Artemeter 30 ng/ml Artemeter 800 ng/ml Parâmetros
Amostra recente Amostra ESP Amostra recente Amostra ESP
Conc. média (ng/ml) (n=6) 30,12 32,87 832,56 795,57 DPR (%) 3,81 10,80 4,05 6,81 Exatidão (%) 100,41 109,57 104,07 99,45 Variação (%) 9,12 -4,44 Lumefantrina 30 ng/ml Lumefantrina 15000 ng/ml Parâmetros
Amostra recente Amostra ESP Amostra recente Amostra ESP
Conc. média (ng/ml) (n=6) 28,24 30,27 15714,82 16062,08
DPR (%) 7,31 7,76 4,45 5,89
Exatidão (%) 94,14 100,89 104,77 107,08
Variação (%) 7,17 2,21
Após avaliação de todos os tipos de estabilidade preconizados empregando-se o método desenvolvido, verificou-se que as amostras de plasma contendo os fármacos são estáveis por até 6 horas a temperatura ambiente, por 3 meses em freezer a -70 °C, por 10 horas no injetor automático após extração, e após três ciclos de congelamento/descongelamento. As soluções padrão estoque são estáveis por até 6 horas em geladeira e o padrão interno é estável no plasma por 6 horas a temperatura ambiente. A análise geral dos resultados obtidos demonstra estabilidade considerável de artemeter, lumefantrina e artesunato nas amostras plasmáticas e garantem um período de tempo adequado à realização da análise das amostras pelo método desenvolvido, na rotina do laboratório.
Resultados e discussão - 145 -
2.1.4 Avaliação da farmacocinética de artemeter e lumefantrina administrados em comprimidos de dose fixa combinada
2.1.4.1 Análise físico-química dos comprimidos utilizados no estudo
Os comprimidos de Coartem® utilizados no estudo, contendo 20 mg de artemeter e 120 mg de lumefantrina, foram previamente submetidos às análises físico-químicas para o controle de qualidade do medicamento. Os resultados destas análises estão demonstrados na Tabela 52.
Tabela 52 - Resultados das análises físico-químicas dos comprimidos de Coartem® utilizados no estudo de farmacocinética.
Teste Especificação Resultado Forma farmacêutica Comprimido De acordo
Cor - Amarela Peso médio - 240,72 mg
Dureza No mínimo 3 kgf 7,80 kgf
Friabilidade No máximo 1,5% 0,15% Desintegração No máximo 30 min 5 min
Determinação de peso ± 7,5% -0,88% a +2,16% Uniformidade de conteúdo 85 a 115%; DPR ≤ 6,0% Artemeter: 95,14% a 100,07%; DPR = 1,93% Lumefantrina: 96,54% a 101,05%; DPR = 1,39%
Identificação (CLAE) Artemeter/Lumefantrina Positivo
Teor (CLAE) Artemeter: 20 mg/comp ou 90,0 a 110,0% VR Lumefantrina: 120 mg/comp ou 90,0 a 110,0% VR Artemeter: 19,67 mg/comp ou 98,33% VR Lumefantrina: 119,96 mg/comp ou 99,96% VR Resultado APROVADO
As especificações utilizadas para os testes foram aquelas preconizadas na Farmacopéia Brasileira 4ª edição e o método por CLAE para identificação e doseamento foi desenvolvido anteriormente no presente trabalho. O medicamento cumpriu com as
especificações de todos os testes e os teores médios de artemeter e lumefantrina nos comprimidos foram 98,33% e 99,96% do valor rotulado, respectivamente.
A realização das análises físico-químicas anteriormente ao estudo farmacocinético, assim como a realização do estudo de equivalência farmacêutica antes do estudo de bioequivalência, é de extrema importância para garantir a qualidade do medicamento que será administrado aos voluntários. Por razões de caráter ético, não é apropriado submeter voluntários sadios que não necessitam de tratamento ou pacientes que já se encontram debilitados à administração de medicamentos que não apresentam qualidade comprovada.
2.1.4.2 Determinação dos parâmetros farmacocinéticos de artemeter e lumefantrina
Os seis voluntários participantes do estudo cumpriram com todos os critérios recomendados pela Resolução n° 1170 da ANVISA (BRASIL, 2006a) e passaram por todos os exames médico-laboratoriais exigidos, comprovando bom estado geral de saúde. Os dados sobre sexo, idade e índice de massa corporal (IMC) dos voluntários estão demonstrados na Tabela 53.
Tabela 53 - Dados sobre sexo, idade e índice de massa corporal (IMC) dos voluntários participantes do estudo de farmacocinética de artemeter e lumefantrina.
Voluntário Sexo Idade Peso (kg) Altura (m) IMC
1 Feminino 21 60 1,67 21,5 2 Feminino 40 52 1,58 20,8 3 Feminino 27 60 1,59 23,7 4 Masculino 28 72 1,67 25,8 5 Masculino 25 73 1,80 22,5 6 Masculino 31 56 1,65 20,6
Os voluntários foram internados na noite anterior ao início do estudo. Às 7:00 horas da manhã seguinte, receberam quatro comprimidos de Coartem® com 200 ml de leite integral. As coletas de sangue foram realizadas nos tempos previamente estabelecidos no protocolo. Uma voluntária se queixou de cefaléia associada a náusea cerca de uma hora e dez minutos após a administração do medicamento. Ela foi examinada e orientada pela enfermeira plantonista. Não houve necessidade de administrar qualquer medicamento para conter os efeitos adversos relatados e a ocorrência foi registrada na ficha de
Resultados e discussão - 147 -
acompanhamento da voluntária. Não foram verificadas alterações na pressão arterial, frequência cardíaca e temperatura corporal de nenhum voluntário durante o tempo em que permaneceram internados.
Durante o estudo, foram realizadas 22 coletas de sangue por voluntário, em 11 dias. As amostras de sangue foram centrifugadas, o plasma obtido foi fracionado em duas alíquotas e congelado a -70 °C. A primeira alíquota foi enviada acondicionada em gelo seco ao Laboratório de Bioequivalência do CEDAFAR em Belo Horizonte, enquanto a segunda foi mantida na Unidade Clínica do ICF em Aparecida de Goiânia.
A quantificação simultânea de artemeter e lumefantrina nas amostras de plasma dos voluntários foi realizada pelo método bioanalítico previamente desenvolvido e validado. Em cada sequência analítica, uma curva de calibração com os padrões de referência foi construída e amostras de controle de qualidade nas três concentrações (CQB, CQM e CQA) foram analisadas em triplicata, intercaladas com as amostras dos voluntários. De acordo com a Resolução RE n°899 da ANVISA (BRASIL, 2003), no mínimo 67% (quatro de seis) das amostras de controle de qualidade devem estar dentro de ±15% dos seus valores nominais para que a corrida analítica seja aceita. Este critério foi atendido em todos os dias de análise.
Cromatogramas obtidos para o voluntário 1, após 1, 3 e 6 horas de administração do medicamento, estão representados na Figura 25. É importante ressaltar que as escalas dos cromatogramas não estão uniformizadas. Observa-se que uma hora após a administração do medicamento, a absorção de lumefantrina ainda não foi iniciada, de forma que apenas o ruído de linha de base é visualizado no cromatograma. Em três horas, o pico deste fármaco já é bastante intenso e atinge áreas mais elevadas em 6 horas. A absorção de artemeter inicia-se rapidamente, de forma que uma hora após a administração já é possível visualizar pico do fármaco no cromatograma. Em três horas, o pico de artemeter é intenso, começando a decair em seguida, e sua área em seis horas já é consideravelmente baixa. A intensidade do pico do padrão interno (artesunato) é constante ao longo do tempo.
As concentrações plasmáticas de lumefantrina e artemeter determinadas em cada tempo de coleta, para os seis voluntários, estão representadas nas Tabelas 54 e 55.
Vol 05 - Coleta 05