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La fermentation éthanolique des sucres de la bagasse fraîche est réalisée dans un fermenteur prépilote d’un volume opératoire de 4 litres.

La souche utilisée pour la fermentation est une levure de Saccharomyces cervisiae de l’Institut de Cellulose et Papier de l’Université de Guadalajara, Jalisco, Mexique. L’inoculum est préparé sur le même milieu de culture que précédemment (IV.2), exception faite du glucose et le milieu de la fermentation est le même.

La bagasse est introduite dans le fermenteur avec 0,4 litre d’inoculum et la quantité d’eau correspondant au rapport liquide/solide choisi. Le fermenteur est maintenu à 30°C sous agitation (20 rpm) sans aération : un échantillon est prélevé toutes les 2 heures et le pH, l’oxygène dissous (OD), l’éthanol, la biomasse et les sucres réducteurs totaux sont dosés.

IV.4 Fermentation éthanolique des sucres de la bagasse fraîche en

fermenteur pilote

La fermentation éthanolique des sucres de bagasse fraîche est réalisée dans un fermenteur pilote thermostaté, d’un volume opératoire de 16 litres.

Prélèvement des échantillons

Mesure de température Manomètre Valve de sécurité Fermenteur pilote (20 l) Bagasse d’agave Eau chaude Eau Serpentin (huile) Bain thermostaté

Régulateur vitesse de rotation Prélèvement des échantillons

Mesure de température Manomètre Valve de sécurité Fermenteur pilote (20 l) Bagasse d’agave Eau chaude Eau Serpentin (huile) Bain thermostaté

Régulateur vitesse de rotation Prélèvement des échantillons

Mesure de température Manomètre Valve de sécurité Fermenteur pilote (20 l) Bagasse d’agave Eau chaude Eau Serpentin (huile) Bain thermostaté

Régulateur vitesse de rotation

La souche utilisée pour la fermentation est une levure de Saccharomyces cervisiae de l’Institut de Cellulose et Papier de l’Université de Guadalajara, Jalisco, Mexique. L’inoculum est préparé sur le même milieu de culture que précédemment (IV.2), et le milieu de la fermentation est le même, exception faite du glucose.

La bagasse est introduite dans le fermenteur avec 1,5 litres d’inoculum et la quantité d’eau correspondant au rapport liquide/solide choisi. La concentration initiale de Saccharomyces cervisiae, préparée pendant 24 heures, est de 3,48 g/l. L’ensemble est maintenu à 30°C, sous agitation (340 rpm) sans aération.

Un échantillon du milieu est prélevé toutes les 2 heures et l’éthanol et les sucres réducteurs totaux sont dosés.

V.1 Hydrolyse acide des hémicelluloses de la bagasse d’agave

sèche

L’hydrolyse acide de la bagasse d’agave est effectuée dans un réacteur autoclave Buchi.

L a bagasse broyée est introduite dans le réacteur préchauffé à 100°C, avec l’eau acidulée (H2SO4 4 %) dans le rapport liquide/solide choisi. L’ensemble est

maintenu à 130°C sous agitation (600 rpm) pendant 90 minutes. L’hydrolyse est ensuite filtrée.

V.2 Extraction des sucres de bagasse de canne à sucre par

hydrolyse acide

La bagasse d’agave est introduite avec la solution d’acide à la concentration choisie et maintenue à la température définie sous agitation. Les échantillons du milieu sont prélevés à différents temps et les sucres réducteurs totaux sont dosés.

1. Bain-marie de l’huile 2. Réacteur en verre 3. Réfrigérant

4. Fermeture de l’agitateur Quickfit ST20/4 5. Baguette d’agitation en acier inoxydable 6. Agitateur Heidolph RZR-2000

7. Régulateur de révolutions pour minute. Volume d’opération 1 l 1. Bain-marie de l’huile

2. Réacteur en verre 3. Réfrigérant

4. Fermeture de l’agitateur Quickfit ST20/4 5. Baguette d’agitation en acier inoxydable 6. Agitateur Heidolph RZR-2000

V.3 Fermentation éthanolique par Pachylosem tannophilus

Les hydrolysats de la bagasse d’agave sont ajustés à pH 4,5 avec NaOH 4N et stérilisés par filtration sur filtre millipore de 0,2 m. Les hydrolysats, ainsi préparés, sont utilisés comme milieu de culture par la fermentation éthanol-xylitol, en utilisant la levure Pachysolen tannophilus, avec les nutriments suivants : extrait de levure = 4 g/l ; peptone = 3,6 g/l ; MgSO4 7H2O = 2,5 g/l ; KH2PO4 = 2 g/l ; (NH4)2SO4 =

3 g/l.

L’inoculum de Pachysolen tannophilus est préparé sous 48 heures à 30°C en tubes de 100 ml de capacité avec un milieu solide incliné, composé de : extrait de levure = 3 g/l ; extrait de malte = 3 g/l ; peptone = 5 g/l ; xylose = 10 g/l ; agar-agar = 20 g/l et préparé de la façon suivante : les constituants sont dissous dans l’eau, sauf l’agar-agar qui est ajouté après ajustement du pH à 7. L’ensemble est chauffé jusqu’à ébullition pour dissoudre l’agar. Après le refroidissement de 25 ml dans chaque tube sous vide, les tubes sont bouchés avec un bouchon en coton et sont stérilisés dans une autoclave (20 lb pendant 30 minutes). Les tubes sont placés en position inclinée pour obtenir un milieu solide incliné et sont utilisés pour l’inoculation de Pachysolen tannophilus.

Les hydrolysats préparés, stérilisés et l’inoculum sont introduits dans les fermenteurs (au préalable stérilisés).

La fermentation est menée à 32°C et un prélèvement toutes les 2 heures est réalisé pour analyser la concentration de biomasse, en sucres, en éthanol et en xylitol. La concentration en biomasse est calculée par mesure de l’absorbance à 620 nm. 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 Absorbance (620 nm) Bi o m asse g /L 1. Bassins fermenteurs

2. Bain-marie. Selecta mod. Digiterm S-542

3. Equipement d’agitation Heldioph MR2000, avec une baguette de téflon 4. Contrôleur d’agitation Heldioph 2002

5. Tubes en caoutchouc silicone pour extraire les échantillons

6. Bombe Millipore modèle XX80202 30, utilisée pour la stérilisation des milieux de culture

7. Porte-filtres. Contient un filtre de nitrate de cellulose (porosité 0,2 µm), un filtre de laine en verre ; Utilisé pour la filtration des milieux de culture

8. Appareil pour mesurer le pH

9. Electrode combinée pour mesurer le pH. Volume d’opération 2 l 1. Bassins fermenteurs

2. Bain-marie. Selecta mod. Digiterm S-542

3. Equipement d’agitation Heldioph MR2000, avec une baguette de téflon 4. Contrôleur d’agitation Heldioph 2002

5. Tubes en caoutchouc silicone pour extraire les échantillons

6. Bombe Millipore modèle XX80202 30, utilisée pour la stérilisation des milieux de culture

7. Porte-filtres. Contient un filtre de nitrate de cellulose (porosité 0,2 µm), un filtre de laine en verre ; Utilisé pour la filtration des milieux de culture

8. Appareil pour mesurer le pH

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CHAPITRE I : L’AGAVE, UNE PLANTE TYPIQUEMENT MEXICAINE I-4 I.1. Description et production de l’agave ... I-5 I.1.1. Taxonomie de l’agave ... I-6

I.1.1.1 La nomenclature Otomí ... I-7 I.1.1.2 La classification botanique traditionnelle... I-8 I.1.1.3 Antécédents de la taxonomie de l’agave ... I-10 I.1.1.4 Toxonomie actuelle... I-12

I.1.2. Répartition géographique de l’agave ... I-13 I.1.3. Caractéristiques morphologiques et physiologiques

de l’agave... I-15

I.1.3.1 Description morphologique générale de l’agave.... I-15 I.1.3.2. Physiologie générale de l’agave ... I-20 I.1.3.3. L’inuline de l’agave ... I-21

I.1.4 Culture, maturité et récolte de l’agave ... I-26

I.2 La transformation des agaves... I-29 I.2.1 Le pulque... I-29 I.2.2 Le mezcal... I-31 I.2.3 La tequila ... I-33 I.2.4 La production industrielle de la tequila ... I-37

I.2.4.1 Sélection et analyses de la matière première

(agave tequilana W. cv azul)... I-37 I.2.4.2 Cuisson, broyage et découpage des têtes

d’agave... I-37 I.2.4.3. Extraction du miel et séparation de la bagasse

d’agave... I-39 I.2.4.4. Fermentation des jus sucrés... I-41 I.2.4.5. Distillation et rectification ... I-42

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