Les extraits micro-ondes de feuilles des cinq espèces de Fortunella

La composition chimique de chacun des extraits micro-ondes (EM) de feuilles des cinq espèces (F. margarita, F. japonica, F. hindsii, F. obovata et F. crassifolia) est décrite dans l’Annexe 14, p. 211. Dans le Tableau 28, figurent les composés qui présentent, au moins une fois, des teneurs supérieures à 1%.

Nous avons identifié de 28 à 49 composés qui représentent de 94,1 à 96,0% de la composition globale. Les 5 extraits (EM) présentent des compositions chimiques proches des huiles essentielles correspondantes. En effet, ces EM sont également caractérisés par la prédominance de la fraction sesquiterpénique, les sesquiterpènes oxygénés (55,7-75,2%) étant plus importants que les sesquiterpènes oléfiniques (17,7-38,0%), sauf dans le cas de F. crassifolia. Le germacrène D (4,1-26,1%) et le β-élémol (7,8-19,5%) sont identifiés dans tous les échantillons. Il est cependant possible de différencier les EM sur la base d’autres sesquiterpènes.

- L’EM de F. obovata est caractérisé par les plus fortes teneurs en alcools tertiaires sesquiterpéniques, α-eudesmol (13,1%), β-eudesmol (12,5%), érémophilen-11-ol Δ9-10 (6,8%) et valérianol (5,4%). De plus, le germacrène D (4,1%) ainsi que le β-eudesmol (7,8%) sont présents avec de teneurs faibles.

- L’EM de F. margarita présente une composition chimique caractérisée par la présence à des concentrations importantes de deux stéréoisomères : le cis-guai-6-èn-10β-ol (8,4%) et le trans-guai-6-èn-cis-guai-6-èn-10β-ol (5,0%).

- L’EM de F. japonica se distingue par des teneurs les plus importantes en cis-guai-6-èn-10β-ol (9,0%) et en alismol (3,5%).

- L’EM de F. hindsii se différencie des autres EM par une composition chimique possédant des teneurs remarquables en germacra-1(10),5-dièn-4α-ol (9,9%), en δ-élémène (7,8%) et en amorph-4-èn-10α-ol (3,3%).

- Enfin l’EM de F. crassifolia se singularise par la plus forte proportion en sesquiterpènes hydrocarbonés (50,8%) représentés majoritairement par le germacrène D (26,1%), le (E)-β-caryophyllene (9,9%) et le bicyclogermacrène (8,4%). Paradoxalement, nous constatons que l’huile essentielle de F. crassifolia possède la plus forte teneur en sesquiterpènes oxygénés (58,9%) et que les profils de

de F. crassifolia et F. margarita qui étainent proches pour les huiles essentielles sont beaucoup plus éloignés pour les EM.

N° ^♦ Constituants Ir_a Ir_p japonica^F. F. obovata F. crassifolia F. margarita F. hindsii Rendements (%) 0,07 0,10 0,10 0,09 0,10 7 Limonène 1021* 1201 0,1 0,3 1,1 0,1 tr 17 δ-élémène 1339 1467 2,1 1,5 0,3 2,4 7,8 22 β-élémène 1384 1588 3,3 2,0 1,0 3,6 1,9 24 (E)-β-caryophyllene 1423 1593 tr 1,2 9,9 0,6 2,1 33 α-amorphène 1475* 1686 1,0 0,1 1,1 - 1,1 34 germacrène D 1475* 1712 9,9 4,1 26,1 11,6 20,0 40 bicyclo germacrène 1496* 1728 tr 0,3 8,4 2,1 2,5 47 β-élémol 1532 2094 12,4 7,8 18,6 15,5 19,5 50 (E)-nérolidol 1541 2049 2,1 2,1 2,9 0,9 0,7 51 germacrène B 1552 1833 4,7 1,8 - 1,8 - 53 cis-guai-6-èn-10β-ol 1575 1993 9,0 5,1 0,6 8,4 - 54 amorph-4-èn-10β-ol 1577 2083 1,6 0,9 1,1 0,6 - 55 Guaiol 1580 2083 1,5 2,3 0,3 0,7 - 59 Germacra-1(10),5-dièn-4α-ol 1611 2188 7,1 6,8 1,1 6,9 9,9 60 trans-guai-6-èn-10β-ol 1612 2158 1,8 2,0 1,6 5,0 1,9 61 γ −eudesmol 1614 2178 0,8 1,9 1,5 2,6 1,5 62 alismol 1617 2270 3,5 0,1 0,2 2,1 1,0 63 érémophilen-11-ol Δ9-10 1623 2198 4,4 6,8 5,4 4,8 5,9 66 amorph-4-èn-10α-ol 1630 2173 0,1 1,8 1,2 0,5 3,3 67 β −eudesmol 1641* 2244 8,2 12,5 3,2 10,5 6,2 70 valérianol 1643 2238 1,8 5,4 2,4 1,4 2,0 71 α−eudesmol 1646 2214 6,4 13,1 2,3 6,1 2,0 Total 95,2 94,3 96,0 95,9 94,1 monoterpènes 0,1 0,3 1,9 0,1 0,0 sesquiterpènes 91,1 92,9 94,0 94,6 93,7 sesquiterpènes oxygénés 65,8 75,2 43,2 70,3 55,7 sesquiterpènes oléfiniques 25,3 17,7 50,8 24,3 38,0

L’ordre d’élution est donné sur colonne apolaire. Ir a et Ir p : indices de rétention mesurés respectivement sur

colonne apolaire (BP1) et polaire (BP20). % a : pourcentages mesurés sur colonne apolaire. ^♦ : numérotation

associé à chaque constituant faisant référence au Tableau 22.

Tableau 28 : Composés identifiés dans les extraits micro-ondes de feuilles des 5 espèces

du genre Fortunella et présents, au moins une fois, à des teneurs supérieures à 1%.

La comparaison entre les modes d’extraction (hydrodistillation et micro-ondes) s’avère aussi délicate car les rendements obtenus par l’extraction assistée par micro-ondes (0,07-0,09%) sont très inférieurs à ceux de l’hydrodistillation classique (0,17-0,39%). Des variations importantes sont observées entre les cinq espèces. Malgré plusieurs essais et l’étude de divers paramètres pouvant avoir une influence sur le rendement (temps de chauffage, puissance de chauffage, taux d’humidité), nous n’avons jamais pu obtenir, par extraction micro-ondes, les rendements obtenus par hydrodistillation classique, mesurés à partir du

concurrencer les huiles essentielles mais qu’il s’agit plutôt d’une technique complémentaire permettant d’obtenir de manière rapide et économique et en accord avec les lois de l’industrie agro-alimentaire, un extrait dont la composition demeure assez proche de celle obtenue par hydrodistillation. Pour notre échantillonnage, nous avons effectivement des profils chromatographiques comparables par les deux méthodes. Cependant, il peut exister pour certains composés des différences quantitatives importantes.

Pour les 5 espèces du genre Fortunella, nous pouvons observer une augmentation du pourcentage des sesquiterpènes qui étaient déjà majoritaires dans l’huile essentielle par rapport aux monoterpènes. De plus, les sesquiterpènes oxygénés majoritaires dans les huiles essentielles sont présents à des teneurs plus importantes dans les extraits micr-ondes à l’exception de F. crassifolia qui présente un comportement atypique. L’augmentation de la teneur des composés oxygénés est souvent reliée à la présence de groupements hydroxyles qui rendent les molécules plus sensibles à l’activation par micro-ondes.

VII.4 Conclusion

L’étude de la composition chimique des huiles essentielles de feuilles et de fruits et extraits micro-ondes de feuilles des cinq espèces du genre Fortunella confirme bien la spécificité des huiles essentielles de feuilles qui sont caractérisées par de nombreux sesquiterpènes oxygénés. Ce type de composition chimique n’a jamais été décrit dans le genre Citrus qui comprend de très nombreuses familles (cédrat, lime, mandarine, clémentine, orange, citron, pomelo, pamplemousse,…).

Dans le genre Fortunella, la variabilité chimique est quasiment absente pour les huiles essentielles de fruits mais ce résultat n’est pas surprenant car cette situation est assez fréquente pour de nombreuses familles du genre Citrus. Seule l’huile essentielle de fruits de F. crassifolia se distingue par sa teneur en myrcène. De plus, il existe pour les huiles essentielles de feuilles une variabilité chimique faible plus quantitative que qualitative. Il est cependant possible de distinguer trois sous groupes en se basant sur les pourcentages de quelques constituants : δ-élémène, β-élémène, β-élémol, germacrène D, cis-guai-6-èn-10β-ol, érémophilen-11-ol Δ9-10 et alismol. Le premier sous groupe réunit les espèces japonica et obovata, le second crassifolia et margarita et le dernier Hindsii.

L’utilisation des micro-ondes permet d’obtenir rapidement un extrait qui présente un profil chromatographique assez voisin de l’huile essentielle mais les différences quantitatives existent. L’extraction assistée par micro-ondes semble plus adaptée à un suivi ou à un contrôle de la qualité d’un échantillon et ne constitue pas une technique comparable à l’hydrodistillation mais plutôt une technique complémentaire. De plus, les comparaisons effectuées avec l’hydrodistillation, même si elles sont délicates, montrent que le procédé d’extraction par micro-ondes apparait plus complexe et ne peut se résumer à une simple activation de molécules qui présentent un moment dipolaire. Si la présence des moments dipolaires générés par les groupements hydroxyles rend les molécules plus sensibles, cette sensibilité à l’activation par micro-ondes apparait très variable en fonction des molécules.

VIII. IDENTIFICATION DE CONSTITUANTS ABSENTS DE NOS