L’extraction par des solvants à polarité croissante a permis d'obtenir trois extraits bruts : extrait éther de pétrole (EP), acétate d’éthyle (AcOEt) et n-butanolique (n-BuOH) ayant un aspect pâteux de couleur allant de brun au vert foncé (Tableau 12).
Tableau12 - Couleur et rendement de différents extraits obtenus à partir de Scabiosastellata
Extraits Couleur Rendement en (%)
n-BuOH Brune 6,076
AcOEt Verte 1,304
EP Verte foncée 0,206
Le rendement d’extraction a été déterminé par rapport au poids du matériel végétal sec sous forme de poudre et les résultats ont été exprimés en pourcentage. Le rendement le plus élevé a été observé avec l’extrait n-butanolique (6,07%) suivi par l’extrait acétate d’éthyle (1,30%) et enfin l’extrait éther de pétrole (0,20%) possédant le plus faible rendement. Cette différence observée peut être expliquée du fait que la méthode utilisée, le choix des solvants ainsi que les conditions dans lesquelles l’extraction a été effectuée (à chaud ou à froid), la méthode d’extraction (macération, décoction, infusion) et les propriétés chimiques des molécules à extraire affectent le rendement des extraits ainsi que leur composition chimique et par conséquent affecte les activités biologiques médiées par ces métabolites (Michel et al., 2012).
Il est important de souligner qu’il est difficile de comparer ces résultats avec ceux de la bibliographie car l’utilisation de différentes méthodes et des solvants de polarités variables dans les processus d’extraction du même matériel végétal réduisent les possibilités de comparaison entre les études réalisées sur la même espèce (Scabiosa stellata) (Lehbilia et al., 2018 ; Lehbilib et al., 2018 ; Rahmounia et al., 2018 ; Rahmounib et al., 2018).
II- Analyse qualitative
Le screening phytochimique a permis de mettre en évidence la présence des métabolites secondaires dans le matériel végétal étudié. La détection de ces composés chimiques est basée sur des essais de solubilité des constituants, des réactions de précipitation et de turbidité et des changements spécifiques de couleur. Les tests de caractérisation phytochimique, réalisés sur les différents extraits, sont représentés dans le Tableau ci-dessous (Tableau13).
Partie expérimentale Chapitre II : Résultat et discussion
67 Tableau 13 : Résultats du criblage phytochimique des extraits de S. stellata.
Métabolites recherchés Extraits
EP AcOEt n-BuOH Tanins - + + Stéroïdes + - - Flavonoïdes - + + Coumarines - - - Saponines - - + Caroténoïdes + - + Quinones - + - Glycosides cyanogènes - - - Alcaloïdes - - +
(+) présence desmétabolites, (-) absence des métabolites.
Figure 29 : Résultats du screening phytochimique de l’espèce Scabiosa stellata L. Le criblage phytochimique des extraits (EP, AcOEt et n-BuOH) issus de l'espèce S. stellata a montré la présence de divers métabolites (de flavonoïdes, de saponines, de caroténoïdes, de quinones, de stéroïdes, d'alcaloïdes et de tanins) qui possèdent de multiples propriétés biologiques et pharmacologiques. Les familles chimiques détectées dans cette étude viennent de confirmer les travaux de plusieurs recherches phytochimiques réalisées sur la plante Scabiosa stellata, en effet les polyphénols, les flavonoïdes, les irridoid glucosides, les saponosides et les lipoides ont été isolés précédemment de cette espèce. (Rahmounia et al., 2018 ; Rahmounib et al., 2018 ; Lehbilia et al., 2018 ; Lehbilib et al., 2018) et le reste des métabolites détectés ont été isolés des espèces du même genre (Kuril'chenko et al., 1971; Christopoulou et al., 2008 ; JI et al., 2014).
De cet effet, les extraits testés pourraient être une source importante de composés bioactifs ayant des effets antioxydants, antimicrobiens, anti-inflammatoires et cytotoxiques potentiels.
III- Analyse quantitative
Afin de caractériser quantitativement les extraits préparés à partir de la plante étudiée, un dosage des polyphénols totaux, des flavonoïdes et des tanins condensés a été effectué.
La raison principale pour le choix de ces substances réside dans le fait que la majorité des propriétés biologiques et pharmacologiques des plantes leur sont attribuées.
Plusieurs études ont noté que les composés phénoliques possèdent des propriétés biologiques intéressantes telles que les activités antioxydantes (De Beer et al., 2017), antiprolifératives (Chen et al., 2018), anticancéreuses (Roleira et al.,2015), antimicrobiennes, antivirales (Zorofchianet al., 2014) et anti-inflammatoires (Zhang et al.,2016).
III-1-Teneur totale en phénols, flavonoïdes et tanins condensés
Les résultats des teneurs totales en polyphénols, flavonoïdes et en tanins condensés des extraits obtenus de l’espèceS. stellata sont représentés dans le Tableau14.
Tableau 14: Teneurs totales en polyphénols, flavonoïdes et tanins des extraits obtenus de l’espèce S. stellata.
Extraits Teneur totale en polyphénols
Teneur totale en flavonoïdes
Teneur totale en tannins condensés (µg EAG/mg d'extrait végétal) (µg EQ/mg d'extrait végétal) (μg EC/ mg d'extrait végétal) EP 30.33 ± 0.15 13.83 ± 0.45 0.07 ± 0.02 AcOEt 117.66 ± 0.52 72.90 ± 0.76 32.05 ± 0.15 n-BuOH 77.12 ± 0.29 57.83 ± 0.25 0.95 ± 0.015
Les valeurs ont été calculées à partir des gammes d’étalonnages établis par l’acide gallique, la quercétine et la catéchine (Annexe 02) et elles sont exprimées en microgrammes d'équivalent de standards par milligramme d’extrait respectivement.
Partie expérimentale Chapitre II : Résultat et discussion
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Les extraits ont montré des différences dans leurs teneurs totales en fonction des polarités des solvants utilisés pour les procédures d'extraction. Les teneurs les plus élevées en polyphénols, flavonoïdes et tanins ont été observées dans l'extrait acétate d'éthyle (117,66 ± 0,52 μg EAG/ mg, 72,90 ± 0,76 μg EQ/mg et 32,05 ± 0,15 μg EC/mg d'extrait végétal), suivis par l’extrait n-butanolique (77,12 ± 0,29 μg EAG / mg, 57,83 ± 0,25 μg EQ/mg et 0,95 ± 0,015 μg EC/mg d'extrait végétal) respectivement tandis que l'extrait éther de pétrole a donné des teneurs les plus faibles (30,33 ± 0,15 μg EAG/mg, 13,83 ± 0,45 μg EQ/mg et 0,07 ± 0,02 μg EC/ mg d'extrait végétal).
L’étude menées par Rahmouni et ses collaborateurs (2018) sur les extraits organiques (dichlorométhane, acétate d’éthyle et n-butanolique) de la même espèce étudiée (Scabiosa stellata) a montré des niveaux plus faibles en polyphénols par rapport aux nos résultats.
Ainsi, de nombreuses études réalisées sur des espèces du genre Scabiosa (Wang et al., 2013 ; Hlilab et al., 2015) ont montré des niveaux plus faibles en polyphénols et en flavonoïdes par rapport aux résultats obtenus dans la présente étude.
L’évaluation du taux des polyphénols et des flavonoïdes de l’espèce Scabiosa tschiliensis au cours de différents stades de maturation a montré une variation significative entre les teneurs totales en polyphénols et en flavonoïdes des plantes collectées après et au cours de la floraison et pendant les périodes de formation des fruits. Ces fluctuations sont liées principalement à la saison, le site de collecte et le climat des régions (Wang et al., 2017).
Cependant l’analyse quantitatif des extraits de l’espèce S. arenaria a montré la richesse de cette dernière en tannins condensés surtout les extraits préparés à partir des tiges et des feuilles possédant des teneurs de l’ordre de 489.75 et 470.25mg μg EC/mg d'extrait végétal respectivement (Hlila et al., 2013).
La variation des teneurs totales en phénols, flavonoïdes et tanins entre les espèces du même genre pourrait être due aux divers facteurs intrinsèques (potentiel génétique des espèces individuelles pour la biosynthèse des polyphénols) et extrinsèques (environnement, stade de maturation et période de stockage) (Nicoletti et al., 2015).
En effet, les conditions expérimentales des dosages peuvent affecter les teneurs ainsi que la composition du milieu réactionnel, c’est l’exemple du réactif du Folin qui peut réagir
avec des protéines, des sucres, l’acide ascorbique et des composés soufrés, ce qui peut influencer les résultats obtenus (Singleton et Rossi, 1965 ; Musci et Yao, 2017).
Les résultats du dosage montrent aussi que la proportion en polyphénols est nettement supérieure à celle des flavonoïdes, ceci suggère que les polyphénols présents ne sont pas tous des flavonoïdes, il peut y avoir aussi la présence d’autres polyphénols tels que les tanins catéchiques ainsi que les coumarines qui ont été mises en évidence.
Selon Zhang et al., (2011), l’acétate d’éthyle est utilisé pour l’extraction des flavonoïdes aglycones ou flavonoïdes mono O-glycosides tandis que le n-butanol est utilisé pour l’extraction des flavonoïdes di-O-glycosides et tri-O-glycosides et C-glycosides. À partir de ces données, on peut conclure que les différents extraits contiennent des flavonoïdes, mono, di, tri et C-glycosides.
Les faibles teneurs en tanins condensés observés dans tous les extraits peuvent être expliquées par le fait que les plantes peuvent produire des substances polyphénoliques (tannoïdes) seulement en réponse à un stress environnemental, suscité par différents facteurs tels que la déficience en éléments nutritifs, la sécheresse, le sur chauffage (températures élevées) et l'intensité lumineuse (Leinmüller et al., 1991 ; Josuttis et al., 2013). Alors que la région de la récole de notre plante d’intérêt n’obéit pas à ces conditions environnementales (Boudy 1950).