Dosage des composés phénoliques

L’étude quantitative des extraits bruts d’ASbr, ASbb et AVb, au moyen des dosages spectrophotométriques, a pour objectif la détermination de la teneur des phénols totaux, des flavonoïdes et des tanins condensés

VI.2.5.1. Dosage des phénols totaux :

Les phénols totaux ont été déterminés par la méthode Folin-Ciocalteu. L’acide gallique a été utilisé comme standard. L’absorbance a été lue à une longueur d’onde de 765 nm.

La quantité des phénols totaux a été rapportée en milligramme d’équivalent de l’acide gallique par gramme de poids sec de l’extrait (mg EAG/g Ps), et pour l’évaluer on utilise l’équation de la régression linéaire de la courbe d’étalonnage tracée de l’acide gallique.

La quantité des phénols totaux dans les différents extraits des trois échantillons varie de 4,55 mg EAG/ g Ps à 69,92 mg EAG/ g Ps (Tableau 7).

Tableau 7 : Teneur des phénols totaux des différents extraits des trois échantillons

Phénol totaux (mg EAG /g d’extrait sec)

Extrait ASbr ASbb AVb

Extrait Aqueux 11,1 ± 2,49 6,96 ± 0,22 4,55 ± 0,93

Extrait Méthanolique 14,13 ± 3,12 9,78 ± 0,86 5,16 ± 0,61

Extrait Ethanolique 17,94 ± 2,83 11,54 ± 1,69 69,92 ± 5,7

Chaque valeur est la moyenne de trois mesures ± écart type

Les résultats du dosage des phénols totaux dans l’extrait éthanolique montrent que l’AVb renferme la plus grande proportion (69,92 mg AGE/g) suivies par les variétés cultivées ASbr et ASbb (17,94 mg AGE/g et 11,54 mg AGE/g), respectivement.

Par contre, dans les extraits méthanoliques et aqueux, la concentration des phénols totaux est moins importante, comparée à celle de l’extrait éthanolique, que se soit pour l’ASbr (14,13 mg AGE/g et 11,1 mg AGE/g, respectivement) ou bien pour ASbb (9,78 mg AGE/g et 6,96 mg AGE/g, respectivement). Elle reste encore moins importante dans les extrais de l’AVb (5,16mg AGE/g et 4,55 mg AGE/g).

En déduction, nous pouvons dire que les teneurs des phénols totaux les plus intéressantes sont ceux des bulbes de l’espèce sauvage (AVb) épuisés dans l’éthanol. (Figure 30).

Figure 30 : Comparaison des teneurs des phénols totaux des différents échantillons étudiés.

En parallèle, les travaux réalisés sur Allium sativum, dans différentes régions du monde, montrent que la teneur des phénols totaux n’est pas toujours la même que celle de l’Allium sativum de notre région.

Ainsi, les études de Chekki et al., (2014) indiquent un taux de phénols totaux élevé dans les extrait éthanolique de l’ail (43,6 mg AGE/g) par apport aux extrait méthanolique de la même plante (5 mg AGE/g), tandis que Poliana et al. (2014) qui ont travaillé sur l’extrait éthanolique de l’ail originaire du Brésil, signale une teneur de (10,55 mg AGE/g) et qui est une valeur moins considérable.

D’autre par, Kallel et al. (2014) ont montré que l’extrait méthanolique renferme un taux de phénols totaux (22,83 mg AGE/g) représentant le double de celui de l’extrait éthanolique (11,8 mg AGE/g), tandis que l’extrait aqueux ne peut extraire qu’une quantité de (2,97 mg AGE/g) de phénols totaux, seulement.

Nencini et al. (2010), qui ont évalue le pouvoir antioxydant des extraits aqueux des différentes espèces sauvages et cultivées d’ail, montrent que les teneurs en phénols totaux obtenues sont inférieurs à nos résultats, à raison de 0,49 mg AGE/g, pour l’espèce sauvage Allium subhirsutum, 0,52 mg AGE/g pour la deuxième espèce sauvage Allium neapolitanum , et 0,38 mg AGE/g. pour l’espèce cultivé Allium sativum.

0 10 20 30 40 50 60 70

ASbr ASbb Avb

C onc ent rat ion ( m g E A G/ g d' ex tait s se c Les échantillons Extr Aqux Extr Meth Extr Eth

Cette différence entre les résultats trouvés peut être due à divers facteurs, notamment, les conditions environnementales, climatiques et la période de récolte, sans oublier les conditions expérimentales et le capital génétique, héréditaire.

En parallèle, des études réalisées antérieurement, ont démontré que l’extraction des composés phénoliques à partir de la matière végétale, est aussi influencée par la nature du solvant utilisé dans la technique d’extraction, le degré de solubilité de ces composés et leur polymérisation ainsi que leur interaction avec d’autres constituants de la plante (Gálvez et al., 2005). Les solvants organiques, généralement utilisés pour l’extraction des composés phénoliques, sont le méthanol, l’éthanol, l’acétate d’éthyle, le chloroforme et 1-butanol qui sont aussi utilisés pour extraire les phénols à partir des produits frais (Tan et al., 2011).

En effet, les différences dans la polarité des solvants utilisés peuvent aussi expliquer les différences de rendements d’extraction et leur activité biologique.

De ce fait, la polarité du solvant joue un rôle déterminant dans l’augmentation de la solubilité des composés phénolique (Naczk et al., 2006).

En revanche, il est difficile de définir une procédure standard pour l’extraction des phénols des végétaux, néanmoins, nous pouvons avancer que les solvants les moins polaires sont généralement considérés comme étant convenable pour l’extraction des phénols lipophiles et les solvants polaires sont utilisés pour des phénols hydrophiles (Bouzid, 2014). VI.2.5.2. Dosage des flavonoïdes :

Le dosage des flavonoïdes a été réalisé selon la méthode de trichlorure d’aluminium (ALCL3), La quantification des flavonoïdes a été déterminée en fonction d’une courbe d’étalonnage linéaire réalisée à partir d’une solution étalon de catéchine à différentes concentrations, le calcul de la teneur en flavonoïdes dans les différents échantillons est donc exprimé en mg équivalent de catéchine par gramme de résidu sec d’extrait (mg EC/g) .

Les teneurs des flavonoïdes varie entre 1,05 mg EC/ g qui représente la valeur minimale, décelée dans l’extraits éthanolique d’ASbb et 62,11 mg EC/ g détectée dans l’extraits éthanolique d’ASbr et qui représente la valeur la plus élevée. (Tableau 8)

Tableau 8 : Teneur des flavonoïdes dans les différents extraits des trois échantillons Les flavonoïdes (mg EC/ g d’extrait sec

Les extraits ASbr ASbb AVb

Extrait Aqueux 23,97 ± 1,5 14,38 ± 2,4 16,06 ± 4

Extrait Méthanolique 15,21 ± 0,93 10,22 ± 0,85 33,05 ± 5,64

Extrait Ethanolique 62,11 ± 5,33 1,05 ± 0,8 17,5 ± 3,35

Chaque valeur est la moyenne de trois mesures ± écart type

Le tableau ci- dessus indique que l’extrait éthanolique renferme la quantité la plus élevé des flavonoïdes, avec une valeur de 62,11 mg EC/g Ps pour l’ASbr, suivie par l’AVb avec une valeur de 17,5 mg EC/ g Ps et que l’ASbb ne renferme que 1,05 mg EC/g Ps seulement.

Pour l’extrait méthanolique, c’est l’échantillon d’AVb qui révèle la teneur la plus élevée (33,05 mg EC/ g Ps), suivie par l’ASbr et l’ASbb à raison de 15,21 mg EC/ g Ps et 10,22 mg EC/ g Ps, respectivement.

D’autre part, il est à noter que les extraits aqueux de l’ASbr, ASbb et AVb renferment aussi des valeurs plus ou moins importantes, avec des taux de 23,97 mg EC/ g Ps, 14,38 mg EC/ g Ps et 16,06 mg EC/ g Ps, respectivement. (Figure 31).

En comparant nos résultats avec les valeurs trouvées par Chekki et al. (2014) et celle de Kallel et al. (2014) qui ont travaillé sur l’ail cultivé, nous constatons que les teneurs en flavonoïdes sont moins remarquables. Pour le premier auteur, il annonce des teneurs de 13,2 mg EC/ g Ps dans l’extrait éthanolique et 0,42 mg EC/ g Ps dans l’extraits méthanolique. Pour le deuxième auteur, il déclare une teneur de 0,48 mg EC/ g Ps dans l’extraits éthanolique, et 0,6mg EC/ g Ps dans l’extraits méthanolique, avec une valeur plus inférieurs de 0,04 mg EC/ g Ps dans l’extrait aqueux.

Figure 31 : Comparaison des teneurs des flavonoïdes entre les différents échantillons En fin, les résultats obtenus illustrés dans la figure ci-dessus montrent clairement, la richesse des extraits de l’ASbr en flavonoïdes, suivi par ceux de l’AVb, puis ceux de l’ASbb avec des teneurs moins remarquables

VI.2.5.3. Dosage des tanins condensés

La quantification des tanins condensés a été effectuée par la méthode de la vanilline. La teneur des tanins condensés a été obtenue à partir d’une courbe d’étalonnage établie avec des concentrations croissantes de catéchine. Les résultats sont exprimés en mg équivalent de catéchine par gramme d’extrait (mg EC/g).

Les résultats indiquent que la teneur des tanins condensés des différents extraits des trois échantillons représente des valeurs moins importantes qui varient entre 0,69 mg EC/g à 5,69 mg EC/g (Tableau 9). 0 10 20 30 40 50 60 70

ASbr ASbb Avb

Conce n tr at ion ( m g E C/ g P s) Les échantillons Extr Aqux Extr Meth Extr Eth

Tableau 9 : Teneurs des tanins condensés des extraits des trois échantillons Les tanins en mg EC/ g d’extrait sec

Les extraits ASbr ASbb AVb

Extrait Aqueux 1,35 ± 0,5 0,89 ± 0,21 1,28 ± 0,1

Extrait Méthanolique 3,01 ± 0,39 2,88 ± 0,12 4,14 ± 0,26

Extrait Ethanolique 0,69 ± 0,2 0,81 ± 1 5,69 ± 0,87

Chaque valeur est la moyenne de trois mesures ± écart type

Dans l’extrait éthanolique, la teneur en tanins condensés de l’AVb (5,69 mg EC/g) représente le double de celle de l’ASbr (0,69 mg EC/g) et ASbb (0,81 mg EC/g), alors que l’extrait méthanolique renferment des doses en tanins plus ou moins identiques dans les trois échantillons, avec un taux de 3,01 mg EC/g pour ASbr; 2,88 mg EC/g pour ASbb et l’AVb avec le taux le plus élevé 4,14 mg EC/g. (Figure 32)

Les quantités des tanins condensés les plus faibles ont été relevées dans l’extrait aqueux des trois échantillons avec des taux variant entre 0,89 mg EC/g (au sein de l’ASbb) et 1,35 mg EC/g (au sein de l’ASbr) ; une valeur moyenne est enregistrée au sein d’AVb et qui est de 1,28 mg EC/g.

Figure 32 : Comparaison des teneurs en tanins entre les différents échantillons

VI.3. Résultats des activités biologiques des huiles essentielles et des extraits phénoliques