Discussion

Les travaux antérieurs avaient pour but de démontrer l’implication de la région CA3 de l’hippocampe dorsal dans 2 types d’apprentissages hippocampo-dépendants: l’apprentissage spatial mis en évidence par le test de navigation spatiale en piscine de Morris et l’apprentissage contextuel mis en évidence par le paradigme de peur conditionnée au contexte, et ce, en bloquant l’activité des fibres moussues à l’aide de différents chélateurs de zinc, soit pendant l’acquisition soit pendant la consolidation. Nous rappelons que les processus mnésiques se déroulent en 3 principales étapes : l’acquisition, la consolidation et le rappel.

Pour bloquer le zinc de la région CA3, différents types de chélateurs ont été utilisés : le DEDTC, à action intra synaptique sur le zinc vésiculaire, et le CaEDTA, à effet extra synaptique sur le zinc libre. Nous supposons que le DEDTC agit sur les éléments vésiculaires présents au niveau des terminaisons synaptiques des fibres moussues, à savoir : le zinc et le glutamate. La chélation du zinc par le DEDTC va donc perturber la co-libération de ces deux éléments. L’injection de ces chélateurs peut se faire avant la séance d’apprentissage, de manière à perturber l’acquisition et la consolidation, compte tenu de la durée d’action des produits. De même, nous nous attendons à perturber spécifiquement la consolidation en injectant immédiatement après l’apprentissage. Enfin la phase de rappel peut être étudiée en administrant les drogues juste avant le test de rappel. Il est important de souligner que ces différents chélateurs ont une très forte affinité pour le zinc et ne chélateront pas le calcium.

Les résultats précédemment obtenus au sein de notre laboratoire et utilisant un paradigme de navigation spatiale en apprentissage distribué (une session d’apprentissage par jour pendant 4 jours) ont montré l’implication du zinc, via l’utilisation de DEDTC, dans l’acquisition d’une mémoire spatiale, mais non dans sa consolidation et son rappel (Bataille et al., 2000). Par contre, le chélateur de zinc extracellulaire (CaEDTA) ne génère aucune perturbation. Cependant, l’utilisation d’un protocole relativement massé (les 4 sessions d’apprentissage sont faites de manière consécutive sur une seule journée et en 2-3 heures environ pour 4 souris) en piscine de Morris a mis en évidence un effet du DEDTC sur l’acquisition mais également sur la consolidation d’une mémoire spatiale de référence (Florian et Roullet, 2003). L’injection de CaEDTA juste après le conditionnement ne perturbe en rien le profil de recherche de la plate-forme, permettant ainsi aux auteurs d’utiliser le

groupe injecté au CaEDTA comme contrôle. Nous pouvons souligner ici l’importance du protocole expérimental utilisé qui semble être un élément important à considérer.

Dans le paradigme de peur conditionnée au contexte, le blocage réversible du zinc par le DEDTC (Daumas et al., 2003) a permis de démontrer que la voie des FM est également nécessaire à l’acquisition et la consolidation d’une mémoire contextuelle, mais non à son rappel. Il est important de rappeler que ce type d’apprentissage présente une forte composante émotionnelle et que l’apprentissage se fait de manière massée, l’individu recevant en effet deux associations chocs électriques-son en une séance de 5 minutes. De manière inattendue, la chélation du zinc extracellulaire par le CaEDTA a résulté en une altération de l’acquisition et de la consolidation de la mémoire contextuelle, contrairement aux résultats obtenus en apprentissage spatial. Cet effet du CaEDTA est par ailleurs spécifique, car dans les mêmes conditions, l’utilisation d’un chélateur saturé en zinc, le ZnEDTA, n’entraîne aucune perturbation. Il semble donc que le zinc libéré dans la fente synaptique ait un effet propre sur l’acquisition et la consolidation de cette tâche.

La question soulevée ici est de savoir pour quelles raisons on observe une telle différence d’effet du CaEDTA entre ces deux tâches pourtant hippocampo-dépendantes. Elles sollicitent en effet les mêmes réseaux hippocampiques et nécessitent toutes deux la constitution d’une représentation mnésique spatiale (pour le Morris) ou configurale (pour les test de peur au contexte). Nous pouvons supposer que cette dépendance hippocampique est plus forte pour le test de navigation spatiale, car les souris injectées au DEDTC avant ou après l’apprentissage ne sont pas capables de retrouver la localisation correcte de la plate-forme (Florian et Roullet, 2003 ; Bataille et al., 2000). On peut considérer que cette dépendance est plus modérée pour un apprentissage contextuel, car le taux de freezing n’est jamais ramené à zéro, quel que soit le traitement (DEDTC, CaEDTA). On observe en effet toujours un apprentissage résiduel (Daumas et al., 2003).

S’il est fort délicat d’envisager une implication différentielle du zinc dans ces deux types d’apprentissages, on peut cependant remarquer que ces trois tâches (spatial distribué, spatial « relativement »massé et massé en une seule séance pour le contextuel) présentent un protocole d’apprentissage différent, ce qui semble être une composante essentielle à prendre en compte. On a en effet un gradient entre une forme distribuée de l’apprentissage faite sur quatre jours (Bataille et al., 2000), un apprentissage « relativement » massé sur une demi- journée (environ 2 heures) et un apprentissage qui peut être réalisé en une seule fois (2 essais en 5 minutes). Or Kogan et al. (1997) ont souligné l’importance du protocole expérimental

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utilisé, car ils ont montré que des souris KO partiel pour la protéine CREB exprimaient une mémoire à long terme (contextuelle et spatiale) presque normale quand le protocole utilisé était distribué, alors que celle-ci se trouvait fortement perturbée après un conditionnement massé (Kogan et al., 1997). Ainsi par analogie, nous pouvons supposer que les différences de résultats en ce qui concerne la phase de consolidation mnésique pourraient s’expliquer par la différence de procédure utilisée. La consolidation semble rendue possible par un apprentissage distribué en Morris, en raison du conditionnement se déroulant sur plusieurs jours. Par ce biais, la consolidation pourrait se faire malgré l’utilisation de DEDTC, ce qui est impossible lors d’un protocole massé en Morris, ainsi qu’en contextuel où même le CaEDTA altère fortement la consolidation.

Pour expliquer ces résultats expérimentaux, nous pouvons également nous intéresser aux effets propres à chacun des chélateurs. Comme nous l’avons vu précédemment, le DEDTC agit au niveau de l’élément présynaptique et va empêcher la libération du zinc et du glutamate. Les travaux de Li et al. (2001, voir supra) ont montré qu’in vitro le zinc est nécessaire à l’induction de la PLT des FM, car une chélation du zinc génère un blocage de celle-ci. De même, nous savons que le glutamate est nécessaire à l’induction de la PLT post- synaptique au niveau FM-CA3.

Le CaEDTA, quand à lui, agit seulement au niveau de la fente synaptique en chélatant le zinc après sa libération lors de la transmission synaptique. Cette chélation va donc empêcher la PLT induite par le zinc au niveau des fibres moussues, mais ne perturbera en rien la PLT postsynaptique induite par le glutamate seul.

Ainsi ces résultats suggèrent une implication du zinc et du glutamate dans l’acquisition et la consolidation. Le zinc est nécessaire à l’induction de la PLT des FM (Li et al., 2003) qui est impliquée dans les processus d’acquisition et de consolidation, il peut également jouer le rôle de neurotransmetteur atypique en pénétrant dans l’élément postsynaptique et en interagissant avec de nombreuses cascades enzymatiques (Takeda, 2000), et enfin il intervient dans une forme particulière de PLT, la PLT présynaptique des FM, et qui est indépendante des récepteurs NMDA (Nicoll et Malenka, 1995). Elle peut donc se faire en l’absence de glutamate. Le zinc semble également favoriser la consolidation.

Notre étude reprend les protocoles de Morris avec apprentissage massé (Florian et al., 2003) et d’apprentissage contextuel (Daumas et al., 2003). On s’intéresse cette fois à

dissocier les rôles respectifs du zinc et du glutamate après leur libération, ce que l’utilisation de DEDTC ne peut pas faire, puisqu’il empêche la libération de ces deux éléments à la fois.

Nos résultats en Morris montrent que le blocage de la fixation du glutamate sur les récepteurs NMA par l’AP5 empêche la consolidation dans une procédure d’apprentissage partiellement massé (l’apprentissage complet de 4 sessions consécutives se déroule sur environ 3-4 heures pour un groupe de 5 souris). On observe en effet pour les individus traités au : CaEDTA+AP5, ZnEDTA+AP5 et à l’AP5 une forte perturbation du profil de recherche de la plate-forme, lors du test de biais spatial. De même, on confirme que le CaEDTA n’a pas d’effet propre car les individus ayant reçu du CaEDTA+AP5 ou du ZnEDTA+AP5 sont pareillement perturbés.

La figure ci-dessous (Figure 3.4) regroupe l’ensemble des résultats obtenus en contextuel par Daumas et al (2003) et ceux obtenus dans le cadre de cette étude.

Figure 3.4 : Comparaison des taux de freezing moyens obtenus lors du test au contexte et induits par les différents traitements réalisés dans le présent travail : ZnEDTA, AP5, CaEDTA+AP5, ZnEDTA+AP5 et ceux réalisés précédemment (Daumas et al., 2003) : CaEDTA, DEDTC et NaCl.

On voit ici que la consolidation est maximale pour les groupes NaCl et ZnEDTA, c'est-à-dire lorsque le glutamate et le zinc sont présents. La consolidation est diminuée (taux de freezing de l’ordre de 40%) pour le groupe injecté au CaEDTA seul, c'est-à-dire lorsque le glutamate seul est présent. On observe une consolidation encore plus faible induite par un injection

** **

TAUX DE FREEZING MOYEN AU CONTEXTE

AP5 CAED TA CAED TAAP 5 DEDT C NACL ZNED TA ZNED TAAP 5 TRAITEMENT 10 20 30 40 50 60 F re e z in g ( M o y e nn e + /- S E M ) * * *

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d’AP5 ou de ZnEDTA+AP5 (28% de freezing), enfin on a une consolidation très dégradée en l’absence de zinc et de glutamate (lot CaEDTA+AP5). Il est intéressant de remarquer que la réaction au contexte induite par le DEDTC ou le CaEDTA+AP5 est équivalente et très basse. On confirme bien que le DEDTC, en plus de chélater le zinc intravésiculaire, empêche également la libération de glutamate, puisque son effet équivaut à une chélation du zinc libre associée à un blocage des récepteurs NMDA au glutamate.

Ainsi les procédures en piscine de Morris, que ce soit avec un apprentissage distribué ou dans des conditions d’apprentissage relativement massé, permettent tout de même la consolidation, même en l’absence de zinc (CaEDTA), du moment que le glutamate est libéré. Par contre lors d’un apprentissage à forte composante émotionnelle effectué en une seule séance (apprentissage contextuel), l’absence de zinc perturbe fortement la consolidation.

En comparant les résultats obtenus en fonction de la procédure d’apprentissage, nous pouvons résumer ainsi l’action des différents traitements sur la consolidation mnésique :

• Pour un apprentissage spatial en piscine de Morris nous obtenons :

Figure 3.5. : Tableaux comparatifs schématiques des résultats obtenus dans le présent travail pour un apprentissage massé (A) versus distribué (B) en piscine de Morris. Comparaison du degré de consolidation mnésique en fonction de la présence ou l’absence de zinc et/ou de glutamate.

Avec glutamate

Sans glutamate avec zinc Consolidation

mnésique normale Consolidation mnésique défectueuse

sans zinc Consolidation mnésique normale Consolidation mnésique défectueuse Avec glutamate Sans glutamate

avec zinc Consolidation

mnésique normale

Non réalisé

sans zinc Non réalisé Consolidation

mnésique normale

• Pour un apprentissage de type contextuel dans le paradigme de la peur conditionnée au contexte, nous avons :

Avec glutamate Sans

glutamate

avec zinc Consolidation

mnésique normale

Consolidation mnésique défectueuse

sans zinc Consolidation mnésique défectueuse

Consolidation mnésique défectueuse

Figure 3.6 : Tableau représentant les résultats obtenus lors d’un apprentissage massé dans le paradigme de la peur conditionnée au contexte.

On note la présence ou la diminution de la consolidation mnésique en fonction de la présence ou l’absence de zinc et/ou de glutamate.

Aucun apprentissage de type distribué n’a été pour l’instant décrit dans le cadre de l’utilisation du paradigme de peur au contexte.

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CONCLUSION

Le but de ce travail était d’essayer de comprendre quelle était l’implication particulière du zinc contenu dans les fibres moussues de la région CA3 hippocampique, lors

d’apprentissage spatial et contextuel aux vues des résultats expérimentaux précédemment obtenus dans notre laboratoire.

A l’issue de ce travail, nous pouvons conclure que le zinc et le glutamate sont indispensables à la consolidation pour un apprentissage en une seule séance, comme c’est le cas dans un apprentissage de type contextuel. Lorsque la procédure d’apprentissage est partiellement massée, la consolidation peut se réaliser en l’absence de zinc (groupe CaEDTA). Lorsque la procédure est très distribuée (intervalles de 24 h entre les séances), la consolidation peut se faire en l’absence de zinc et de glutamate (groupe DEDTC). Il y a donc compensation d’une perturbation du système fibres moussues - cellules pyramidales par le protocole utilisé.

De manière à vérifier ces hypothèses, il serait intéressant de comparer des cas extrêmes de protocole en utilisant le test de peur conditionnée au contexte avec :

- un apprentissage en un seul essai suivi de l’injection d’un des chélateurs. On peut également augmenter l’intensité du choc électrique afin d’assurer un taux de freezing équivalent à celui de la procédure à 2 essais. On devrait alors avoir un effet maximal du DEDTC et du CaEDTA+AP5 et qui devrait réduire le taux de freezing à une valeur proche de zéro.

- un apprentissage en 5 essais ou bien un protocole constitué de 2 essais par jour à 2 heures d’intervalle. Cela devrait permettre d’observer une tendance vers une effet moyen induit par les injections d’AP5, de CaEDTA+AP5 et de DEDTC.

Ainsi, contrairement à notre hypothèse de départ, dans laquelle nous avions suggéré une éventuelle implication différentielle de l’hippocampe en fonction du type d’apprentissage à effectuer (spatial versus contextuel), il semblerait que les modalités de consolidation puissent varier en fonction de la procédure d’apprentissage utilisée. En effet, les apprentissages spatial et contextuel sont bien hippocampo-dépendants et nécessitent tous deux la présence du zinc et du glutamate pour une consolidation optimale. Cependant il apparaît ici que le choix de la procédure massée ou distribuée est une composante essentielle lorsque le fonctionnement de l’hippocampe est dégradé, et il semble qu’un protocole distribué permette de pallier un blocage du réseau FM-CA3.

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Toulouse, 2007

NOM : BOUHSIRA Prénom : Emilie

TITRE : Interaction Zinc-Glutamate dans l’hippocampe dorsal de la souris.

RESUME: Cette étude a pour but de mieux comprendre les effets du zinc et du glutamate dans l’hippocampe dorsal de la souris, ainsi que leurs rôles respectifs dans la consolidation mnésique. Pour cela, des souris ont été soumises à un apprentissage de type contextuel grâce au paradigme de la peur conditionnée au contexte et à un apprentissage spatial en piscine de Morris, avec une procédure massée. Après l’apprentissage, elles ont reçu des injections dans la région hippocampique CA3 de différents chélateurs du zinc et d’un antagoniste des récepteurs NMDA, ou bien d’un mélange des 2.

La comparaison des résultats obtenus suite à une seule ou plusieurs sessions d’acquisition dans le cadre d’une procédure massée ou distribuée, suggèrent que le Zinc et le Glutamate sont nécessaires pour la consolidation