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Os parâmetros de desempenho forense, os parâmetros de paternidade e proporções genotípicas para as amostras populacionais PSI 142 e PSI 597 para os locos ISAG e os locos complementares estão listados na Tabela 5. De maneira geral não foram observadas diferenças substanciais nas estimativas para as amostras populacionais de PSI brasileiro estudadas. Conforme esperado um número médio de alelos ligeiramente maior (5,882) foi estimado a partir da amostra de 597 éguas em comparação com a amostra de 142 garanhões (5,294). Entretanto as estimativas combinadas de desempenho forense foram ligeiramente melhores para o grupo de garanhões mesmo sendo a amostra menor, provavelmente em função de algum nível de consangüinidade mais elevado no grupo das 597 éguas em comparação com os 142 garanhões. Estas ligeiras diferenças podem também ser devido a efeitos de amostragem e, do ponto de vista prático, são irrelevantes.

A heterozigosidade observada (Ho) e esperada (He) variou de 0,396 a 0,831 (média de 0,647) e 0,411 a 0,805 (média de 0,655), respectivamente, para a população PSI 142 (Tabela 5). Apenas o loco AHT29 apresentou desvios das proporções genotípicas esperadas pelo EHW em PSI 142 (p<0,003). Para a população PSI 597, a heterozigosidade observada (Ho) e esperada (He) variou de 0,419 a 0,792 (média de 0,643) e 0,424 a 0,834 (média de 0,665), respectivamente. Os locos HMS3 e AHT29 e AHT39 apresentaram desvios das proporções esperadas pelo EHW (p<0,003). O intervalo de confiança a sobre a estimativa de Fis foi de -0,013 a 0,040para PSI 142 e -0,0008 a 0,068 para PSI 597 indicando não existir redução de heterozigosidade significativa devido a cruzamentos entre parentes no plantel de PSI brasileiro.

Tabela 5. Parâmetros genéticos de desempenho dos 17 microssatélites estudados para a investigação de individualidade genética e de paternidade em duas populações de

PSI; estimativas de coeficiente de endocruzamento (Fis) e p valor do teste exato para Equilíbrio de Hardy Weinberg. (# _{Intervalo de confiança a 95% sobre a estimativa de Fis}

total).

Pop VHL20 HTG4 AHT4 HMS7 HTG6 HMS6 HTG7 HMS3 AHT5 HTG10 ASB2 AHT39 UM011 AHT29 UM010 UCDEQ425 UCDEQ405

Parâm. forenses Combinado

Probabilidade de identidade PSI 142 0,113 0,315 0,117 0,088 0,255 0,209 0,230 0,163 0,152 0,104 0,055 0,205 0,066 0,308 0,154 0,359 0,412 5,96E-14 PSI 597 0,117 0,289 0,127 0,082 0,245 0,237 0,251 0,113 0,138 0,113 0,064 0,198 0,071 0,260 0,154 0,227 0,389 2,60E-14 Expresso em 1 em .... PSI 142 8,833 3,179 8,545 11,409 3,920 4,790 4,347 6,153 6,590 9,618 18,126 4,868 15,161 3,252 6,474 2,782 2,428 -

PSI 597 8,578 3,465 7,884 12,168 4,086 4,220 3,987 8,861 7,264 8,854 15,610 5,052 14,029 3,852 6,490 4,414 2,570 - Poder de discrim. individual PSI 142 0,887 0,685 0,883 0,912 0,745 0,791 0,770 0,837 0,848 0,896 0,945 0,795 0,934 0,692 0,846 0,641 0,588 0,999999999999940

PSI 597 0,880 0,710 0,870 0,920 0,760 0,760 0,750 0,690 0,860 0,890 0,940 0,800 0,930 0,740 0,850 0,770 0,610 0,999999999999974 PIC PSI 142 0,713 0,424 0,692 0,740 0,519 0,550 0,549 0,632 0,637 0,718 0,808 0,554 0,774 0,463 0,650 0,407 0,344 -

PSI 597 0,700 0,450 0,670 0,750 0,520 0,530 0,520 0,690 0,670 0,710 0,800 0,570 0,770 0,530 0,620 0,530 0,370 -

Parâm. de paternidade Combinado

Poder de exclusão PSI 142 0,567 0,153 0,482 0,565 0,333 0,306 0,349 0,473 0,424 0,422 0,659 0,234 0,548 0,194 0,479 0,132 0,116 0,99983 PSI 597 0,540 0,190 0,460 0,590 0,320 0,280 0,310 0,390 0,540 0,420 0,560 0,200 0,570 0,160 0,360 0,250 0,130 0,99976 Índice de Paternidade típico PSI 142 2,300 0,921 1,878 2,286 1,365 1,291 1,410 1,839 1,650 1,643 2,967 1,109 2,194 1,015 1,864 0,875 0,839 1129,509

PSI 597 2,140 1,010 1,790 2,410 1,330 1,220 1,300 1,520 2,170 1,650 2,270 1,030 2,340 0,940 1,450 1,150 0,860 789,439

Proporções genotípicas Média

Ho PSI 142 0,783 0,460 0,734 0,787 0,634 0,613 0,645 0,734 0,697 0,696 0,831 0,543 0,772 0,508 0,729 0,429 0,396 0,647 PSI 597 0,766 0,503 0,720 0,792 0,625 0,589 0,617 0,672 0,769 0,697 0,780 0,515 0,787 0,467 0,654 0,565 0,419 0,643 He PSI 142 0,759 0,506 0,742 0,779 0,597 0,619 0,629 0,681 0,689 0,774 0,834 0,601 0,805 0,559 0,705 0,446 0,411 0,655 PSI 597 0,744 0,545 0,722 0,785 0,589 0,600 0,599 0,729 0,718 0,760 0,834 0,607 0,796 0,609 0,681 0,564 0,424 0,665 N° de alelos PSI 142 5 5 4 6 5 5 4 6 5 5 9 6 7 3 6 5 4 5,294 PSI 597 6 5 6 6 6 5 4 6 6 5 8 7 8 3 5 8 6 5,882 Fis PSI 142 -0,031 0,091 0,011 -0,010 -0,062 0,010 0,026 -0,079 -0,011 0,103 0,004 0,097 0,041 0,093 -0,035 0,040 0,036 0,013 PSI 597 -0,030 0,076 0,003 -0,009 -0,061 0,018 -0,030 0,078 -0,072 0,084 0,066 0,152 0,012 0,233 0,040 -0,003 0,012 0,033

Pvalor Teste de EHW PSI 142 0,419 0,071 0,920 0,872 0,067 0,931 0,853 0,525 0,904 0,689 0,894 0,103 0,943 0,0001 0,605 0,482 0,595 -0,013 a 0,040 #

Um teste exato de Fisher para equilíbrio de ligação de locos dois a dois da bateria de 17 locos (ISAG + complementação) revelou vinte e oito pares de locos em desequilíbrio ( = 0,000367 com correção de Bonferroni) (Tabela 6). Todos os pares em desequilíbrio de ligação envolveram os locos que apresentaram desvios no EHW (HMS3, AHT39 e AHT29).

As estimativas de probabilidade de identidade (matching probability) baseadas na utilização dos 17 locos, ou seja, a probabilidade de dois animais apresentarem o mesmo perfil genético nesta bateria de microssatélites variou do loco mais informativo 5,5% (ASB2) até o loco menos informativo 41,2% (UCDEQ405) na população PSI 142 e de 6% (ASB2) a 39% (UCDEQ405) na população PSI 597. O poder de discriminação alcançado variou de 58,8% (UCDEQ405) a 94,5% (ASB2) para população PSI 142 e de 61% (UCDEQ405) a 94% (ASB2) para PSI 597. O loco mais polimórfico em ambas populações foi ASB2 e o menos polimórfico foi UCDEQ405. Consistente com o seu maior conteúdo informativo, um elevado poder de exclusão de paternidade foi também observado no loco ASB2 (65,9%) e HMS7 (59%) nas populações PSI 142 e PSI 597, respectivamente. A probabilidade de exclusão de paternidade combinada para os 17 locos para PSI 142 e PSI 597 foi de 99,983 % e 99,976%, respectivamente (Tabela 5).

Tabela 6. Resultados do teste exato de Fisher para equilíbrio de ligação de locos microssatélites dois a

dois. Todos os pares de locos na tabela apresentaram p valores significativos após a correção de Bonferroni (α = 0,00036).

Combinação de locos P valor

VHL20/AHT39 0.000001 VHL20/AHT29 0.000001 HTG4/HMS3 0.000001 HTG4/AHT39 0.000001 HTG4/AHT29 0.000001 AHT4/HMS3 0.000001 AHT4/AHT39 0.000001 AHT4/AHT29 0.000001 HMS7/AHT39 0.000001 HMS7/AHT29 0.000001

Tabela 6 (Continuação)

Combinação de locos P valor

HTG6/HMS3 0.000001 HTG6/AHT39 0.000001 HTG6/AHT29 0.000001 HMS6/AHT39 0.000001 HMS6/AHT29 0.000001 HTG7/AHT39 0.000001 HTG7/AHT29 0.000001 HMS3/AHT39 0.000001 HMS3/AHT29 0.000001 AHT39/UM011 0.000001 AHT39/AHT29 0.000001 AHT39/UM010 0.000001 AHT39/UCDEQ425 0.000001 AHT39/UCDEQ405 0.000001 UM011/AHT29 0.000001 AHT29/UM010 0.000001 AHT29/UCDEQ425 0.000001 AHT29/UCDEQ405 0.000001

Estimativas de freqüências alélicas a partir da amostra de 142 garanhões PSI brasileiros foram utilizadas para calcular os diversos parâmetros de desempenho forense dos locos TKY. Estas estimativas foram comparadas com aquelas obtidas a partir de uma amostra de 250 indivíduos PSI não relacionados do plantel PSI do Japão, dados extraídos de Tozaki et al. (2001a) (Tabela 7). O número de alelos na população PSI 142 variou de um mínimo de quatro para o loco TKY337, até um máximo de nove para os locos TKY321 e TKY325. Uma média de 6,385 alelos/loco foi observada. A heterozigosidade média observada foi de 0,722 e a heterozigosidade média esperada foi de 0,752. Apenas o loco TKY287 apresentou desvio das proporções esperadas pelo EHW e todos os pares de locos estavam em equilíbrio de ligação. O coeficiente de endocruzamento (Fis) dos 13 locos combinados foi estimado em 0,039 com um intervalo de confiança de 0,007 a 0,072 sugerindo a existência de uma pequena mas significativa redução de heterozigosidade devido a cruzamentos aparentados. No plantel de cavalos PSI do Japão, o número de alelos por loco variou de cinco a nove

para os locos TKY337 e TKY325, respectivamente. A heterozigosidade média observada foi de 0,745 e a heterozigosidade média esperada foi de 0,755. Uma vez que não é possível o acesso aos dados genotípicos do estudo de Tozaki et al. (2001a) não foi possível o teste de EHW com esta população.

A variação do poder de exclusão (PE) individual de 24,8% a 67,5% (PSI 142) e 43,7% a 62,1% (PSI JP 250) para TKY374 e 333, TKY287 e 321, respectivamente. O PE combinado para 13 locos comparados no plantel de PSI do Brasil e do Japão foi de 99,983% e 99,996%, respectivamente. De maneira geral não foram observadas diferenças substanciais nas estimativas de PE seja de locos individuais bem como dos locos combinados para a população de PSI brasileiro e PSI japonês.

Tabela 7. Parâmetros genéticos de desempenho forense dos 13 microssatélites TKY estimados na amostra de 142 garanhões PSI brasileiros e comparação com uma

amostra populacional de 250 PSI japonês; estimativas de coeficiente de endocruzamento e teste para Equilíbrio de Hardy Weinberg (# _{Intervalo de confiança a 95% sobre a}

estimativa de Fis total).

População TKY344 TKY343 TKY321 TKY287 TKY312 TKY301 TKY337 TKY374 TKY333 TKY341 TKY325 TKY294 TKY394 Parâmetros forenses

PIC (Cont. de Inf. Polimór.) PSI 142 0,735 0,645 0,745 0,668 0,719 0,742 0,688 0,643 0,767 0,615 0,708 0,705 0,766 - PSI JP 250 0,732 0,663 0,745 0,668 0,719 0,71 0,685 0,729 0,743 0,672 0,698 0,694 0,764 -

Parâmetros de paternidade Combinado

Poder de exclusão PSI 142 0,610 0,403 0,551 0,408 0,617 0,510 0,412 0,248 0,675 0,401 0,477 0,438 0,417 0,99983 PSI JP 250 0,577 0,428 0,599 0,513 0,460 0,541 0,473 0,513 0,486 0,369 0,527 0,434 0,621 0,99996 Índice de Paternidade típico PSI 142 2,574 1,580 2,210 1,598 2,65 2,000 1,609 1,143 3,119 1,573 1,857 1,703 1,629 3502,167

PSI JP 250 2,358 1,667 2,500 2,016 1,786 2,155 1,838 2,016 1,894 1,471 2,083 1,689 2,66 7366,497

Proporções genotípicas Média

Ho PSI 142 0,806 0,683 0,773 0,656 0,728 0,759 0,689 0,643 0,840 0,682 0,731 0,706 0,693 0,722 PSI JP 250 0,788 0,700 0,800 0,752 0,720 0,768 0,728 0,752 0,736 0,66 0,76 0,704 0,812 0,745 He PSI 142 0,771 0,701 0,778 0,718 0,761 0,776 0,741 0,758 0,799 0,667 0,748 0,753 0,799 0,752 PSI JP 250 0,773 0,712 0,806 0,767 0,745 0,752 0,735 0,763 0,775 0,712 0,739 0,739 0,795 0,755 N° de alelos PSI 142 6 6 9 6 7 7 4 6 7 7 7 5 6 6,385 PSI JP 250 6 8 7 8 7 7 5 7 7 8 9 6 6 7 Fis PSI 142 -0,046 0,025 0,006 0,086 0,044 0,022 0,069 0,155 -0,051 -0,023 0,024 0,062 0,133 0,039 PSI JP 250 -0,019 0,017 0,007 0,02 0,034 -0,021 0,01 0,014 0,05 0,073 -0,028 0,047 -0,021 0,014

A comparação do poder de exclusão combinado para três diferentes baterias de marcadores microssatélites (nove locos ISAG; 17 locos incluindo os nove recomendados pela ISAG; 13 locos TKY) na amostra populacional de 142 garanhões PSI brasileiros estão apresentados na Tabela 8. Conforme esperado, o menor PE combinado foi observado no conjunto de nove locos ISAG (99,66%), seguido de TKY (99,98%) e os locos ISAG+complementação (99,98%). Os índices de paternidade típicos estimados também seguem esta tendência embora os locos TKY forneçam um índice de paternidade médio maior.

Tabela 8. Parâmetros de desempenho forense e paternidade de três diferentes baterias de marcadores

microssatélites na população PSI 142.

9 locos ISAG 17 locos (9 ISAG + 8 locos complementares) 13 locos TKY Parâmetros forenses Probabilidade de

identidade 1,079E-08 6,030E-14 2,408E-13

Poder de discrim. individual 0,99999998921165 0,99999999999994 0,99999999999976 Parâmetros de paternidade Poder de exclusão 0,9966 0,9998 0,9998 Índice de Paternidade típico 173,611 1129,509 3502,167

ISAG – Locos recomendados pela ISAG (VHL20, HTG4, AHT4, HMS7, HMS6, HMS3, AHT5, HTG10, ASB2).

ISAG + Compl. – Nove locos recomendados pela ISAG mais oito locos adicionais (HTG6, HTG7, AHT39, UM011, AHT29, UM010, UCDEQ425, UCDEQ405).

TKY – 13 locos TKY (TKY344, TKY343, TKY321, TKY287, TKY312, TKY301, TKY337, TKY374, TKY333, TKY341, TKY325, TKY294, TKY394).

5.4 Comparações de PSI brasileiros com PSI de outros países e outras raças criadas no Brasil.