CRTAM

Dans ce travail de thèse, nous nous intéressons à la molécule CRTAM et les conséquences de son interaction avec son ligand Necl-2 sur les lymphocytes T Vγ9Vδ2.

I.4.3.1. Structure

CRTAM est un récepteur appartenant à la super famille des immunoglobulines constitué d'un domaine extracellulaire contenant deux boucles d'immunoglobulines et un domaine intracellulaire contenant un motif PDZ (Figure 21) (188). L’étude des homologies de séquences au sein de la super-famille des immunoglobulines indique que CRTAM est plus proche des necls que des nectines (Figure 22). Le gène codant CRTAM est situé sur le bras long du chromosome 11 (11q23.3) près de la localisation du gène de Nectine-1 et de Necl-2. Cette proximité chromosomique suggère que CRTAM résulterait d’une duplication d’un gène ancestral commun à ces deux molécules.

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Figure 21 : Structure de CRTAM. D’après Fuchs and Colonna (188)

Le gène qui code pour CRTAM est régulé positivement par le facteur de transcription AP-1 connu pour être activé après engagement du TCR (189). Il a été découvert et cloné à l’occasion d’une étude qui consistait à identifier les gènes surexprimés par les cellules NKT. Dans cette étude, la molécule CRTAM était spécifiquement induite dans les lymphocytes T CD8+ et les cellules NKT de souris après activation (190). Ces résultats ont été observés également chez l'homme dans les lymphocytes T CD8+, les cellules NK et une sous- population de lymphocytes CD4+ (1 à 2% des CD4+ vraisemblablement des cellules NKT) (132, 191). L'expression de CRTAM par les lymphocytes T et les cellules NK activés a été rapportée comme précoce et transitoire. En effet, chez la souris, CRTAM est détectée après deux heures d'activation de ces cellules et son niveau d'expression est maximal entre 6 et 12h pour les cellules NK et 12 à 24h pour les lymphocytes T CD8+ avant de diminuer quarante- huit heures après stimulation (132, 192, 193). Ces données suggèrent que l’expression de CRTAM joue un rôle dans les premières étapes de l’activation de ces cellules. CRTAM est également exprimée par d‘autres cellules que celles du système immunitaire. En effet, un haut niveau d'expression a été détecté dans le cerveau et en particulier dans les neurones de Purkinje (190) mais le rôle de CRTAM dans ces cellules n’est pas encore très documenté.

Bien que la molécule CRTAM soit classiquement associée à la famille des nectines et des necls, elle ne possède que deux boucles d’immunoglobuline alors que les nectines et les necls en possèdent trois. De même, CRTAM ne partage que 20 % d’identité et 55% de similarité avec ces molécules (132, 190). Pour ces raisons, une nouvelle hypothèse pourrait être formulée et rapprocherait CRTAM de la famille des JAM (junctional adhesion molecule) qui possèdent également deux boucles d’immunoglobuline. Elles sont présentes dans les jonctions intercellulaires et la région latérale des membranes des cellules épithéliales et

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endothéliales. Pour l’instant, 3 membres de cette famille sont décrits : JAM A, JAM B et JAM C (194). CRTAM est également présente le long de la membrane latérale des cellules épithéliales, comme les molécules JAM, et joue un rôle dans l’adhérence via son interaction avec Necl-2 (194). Néanmoins, l’alignement de séquence des acides-aminés va à l’encontre de cette hypothèse (Figure 22).

Figure 22 : Classification par homologie de séquence en acides aminés de protéines appartenant à la super-famille des immunoglobulines. D’après Patino-Lopez, Hevezi et al. (190)

I.4.3.2. Interaction de CRTAM avec son ligand Necl-2

CRTAM interagit avec Necl-2 à la fois chez l'homme et la souris. De plus, CRTAM et Necl-2 sont relativement bien conservées entre la souris et l'homme puisque les homologues humains et murins partagent 72 % d'identité. L'interaction CRTAM avec son ligand Necl-2 a principalement été étudiée dans le cas des cellules du système immunitaire.

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Necl-2 est impliquée dans l’interaction entre cellules NK et cellules tumorales ainsi qu’entre les cellules dendritiques (CD8α+ chez la souris et BDCA3+ chez l’humain) et les lymphocytes T CD8+ (132, 192). C’est la boucle la plus externe de Necl-2 qui interagit avec la boucle la plus externe de CRTAM (193). L’interaction CRTAM-Necl-2 a pour conséquence l’augmentation de la cytotoxicité des cellules NK et de la sécrétion d’IFN-γ par les lymphocytes T CD8+ vis-à-vis des cellules tumorales Necl-2+ (195). L’équipe de Colonna a également montré que les cellules NK éliminent plus facilement les cellules tumorales exprimant Necl-2 in vivo. Pour ce faire, ils ont transfecté des cellules tumorales EL-4 Necl-2- pour qu’elles expriment Necl-2 ; puis ils ont injecté ces cellules dans la cavité péritonéale de souris nude. Après 48h, ils ont observé que les cellules Necl-2+ étaient plus massivement rejetées que les cellules témoins (132). De plus, la déplétion des cellules NK réduisait l'élimination des cellules tumorales exprimant Necl-2 (132). Il existe des différences entre les résultats obtenus par l’équipe de Colonna et d’autres équipes. D’autres études menées sur la souris ne démontrent pas que l’interaction CRTAM-Necl-2 impacte l’activité cytotoxique des cellules NK (193).

Le rôle de CRTAM n’a pas été étudié uniquement dans un contexte non-tumoral. Une étude portant sur des souris CRTAM-/- a montré que cette molécule était essentielle dans la rétention des lymphocytes T CD8+ dans les ganglions lymphatiques par liaison avec des cellules dendritiques CD8α+ exprimant Necl-2 (196).

De plus, la molécule CRTAM est exprimée par les thymocytes et joue un rôle dans l'ontogénie des lymphocytes T. Les thymocytes expriment CRTAM tout au long des étapes de maturation. Le blocage de l'interaction CRTAM avec son ligand Necl-2 altère la croissance des thymocytes dans le thymus ce qui suggère un rôle de CRTAM dans la régulation des thymocytes (197).

Necl-2 est exprimée dans le cerveau tout comme son ligand CRTAM (190) au niveau des neurones de purkinje. Ces données suggèrent que l’interaction CRTAM avec son ligand Necl-

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2 joue un rôle dans les connexions cellulaires bien que des études soient nécessaires pour confirmer cette hypothèse.

Malgré une meilleure compréhension du rôle de CRTAM, la voie de signalisation mise en œuvre par l'interaction CRTAM avec son ligand Necl-2 n'est pas encore connue. La région cytoplasmique de CRTAM est constituée de trois sites de phosphorylation putatifs et d'un domaine PDZ pouvant interagir avec la molécule Scrib. Chez la souris, il a seulement été décrit que la molécule scrib génère des signaux qui contribuent à réguler la polarité des lymphocytes T CD4+ (198). D’une façon générale, les connaissances sur la signalisation intracellulaire médiée par CRTAM restent à approfondir.

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