Controverse sur la potentialité T des CLP

Depuis la découverte du CLP, deux hypothèses sont confrontées sur le fait que ce progéniteur peut donner naissance ou non au lignage T (en effet sa capacité à donner des cellules B n!est pas remise en question). Je vais ainsi développer ci-dessous quelques exemples de cette controverse.

Lors de sa découverte par l!équipe d!I.L. Weissman en 1997, le CLP a été décrit comme le progéniteur lymphoïde commun (à l!origine des lignées B et T) (Kondo et al., 1997).

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En 2003, l!équipe d!A. Bhandoola a comparé phénotypiquement et fonctionnellement le progéniteur T précoce (ETP, early T lineage progenitor) du thymus avec le CLP de la MO.

Ü La réponse à l!IL7 (facteur de survie) des ETP et CLP est différente in vitro : les ETP ne répondent pas, suggérant que fonctionnellement ces derniers sont différents des CLP.

Ü Les ETP ont des niveaux d!expression de marqueurs de surface identique aux LSK, comparativement aux CLP.

Figure 7 : Comparaison de l!expression de marqueurs de surface sur les LSK, CLP et ETP (Allman et al., 2003).

Histogrammes représentant l!expression de Sca1, c-Kit, IL7Rg et CD27 sur les ETP (histogramme plein gris clair), les LSK (trait noir à gauche) et les CLP (trait noir à droite) de la MO.

Ü Les ETP génèrent peu de cellules B par rapport aux CLP (100 fois moins de cellules CD19+) à J21 post-greffe alors que les CLP donnent des lymphocytes B dés J13. Ces résultats ont été confirmés en culture sur le stroma S17.

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Ü Les ETP, 3 semaines post-injection intra-thymique, génèrent 100 fois plus de thymocytes DP (double positifs, CD4+CD8+) que les CLP. 4 semaines post- greffe, les ETP sont toujours la source de DP contrairement aux CLP. Les ETP permettent le développement des DP sur une plus grande période de temps et en plus grande quantité que les CLP.

Ü Pour finir les auteurs, en utilisant des souris déficientes pour Ikaros (arrêt précoce du développement B), ont remarqué que ces dernières n!avaient pas de CLP mais possédaient une fréquence normale d!ETP.

Figure 8 : Nombre absolu d!ETP dans les thymus de souris sauvages et Ikaros-/-

(Allman et al., 2003).

Le nombre absolu d!ETP entre les souris Ikaros+/+ et Ikaros-/- n!est pas statistiquement différent.

La conclusion de ce travail est que les ETP peuvent se développer via une voie indépendante du CLP et qu!ils proviennent d!un progéniteur hématopoïétique plus précoce que les CLP (Allman et al., 2003). Cette étude permet ainsi de démontrer que le précurseur le plus précoce du thymus (ETP) est différent du CLP en termes de potentialité et phénotype. Il aurait alors été plus intéressant de comparer les ETP aux MPP plutôt qu!aux LSK totaux car la controverse de l!origine de la lignée T se porte entre le CLP et le MPP.

Par la suite, la comparaison du potentiel myéloïde et B des thymocytes a permis de démontrer que les DN1 en culture généraient des cellules Mac1+ mais pas de cellules B, les DN2 ont eux perdu aussi le potentiel de donner des macrophages. Par contre, in vivo, ces cellules (DN1 et DN2) sont capables de donner les CD et les macrophages thymiques (Wada et al., 2008). Le CLP, quant à lui, génère très peu de cellules Mac1+

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et beaucoup de lymphocytes B (Karsunky et al., 2008; Kondo et al., 1997). Ces données consolident ainsi l!hypothèse que le CLP ne serait pas à l!origine de la population DN1.

De plus, suite à l!analyse du sang de souris sauvage, les CLP ne sont pas détectés alors que le sang est une voie de passage obligatoire pour coloniser le thymus (Schwarz and Bhandoola, 2004).

Quelques années après, l!équipe d!I.L. Weissman a repositionné le CLP comme étant la source majeur du lignage T.

Ü Après avoir isolé et greffé différentes populations (en testant plusieurs marqueurs), une population Lin-Flt3+CD27+ a été identifiée comme contenant le plus d!activité T et, est majoritairement constituée de CLP et MPP (Serwold et al., 2009).

Ü Suite à des expériences de transplantations des CLP et MPP dans des souris sub-létalement irradiées, l!analyse des thymus démontre que les CLP, à J7 post- greffe, donnent des thymocytes mais pas de DP alors que les MPP ne génère pas de cellules ; à J14 les CLP donnent beaucoup plus de DP que les MPP. A J21 les deux types de progéniteurs donnent autant de DP et à J28 la tendance s!inverse. En effet, il y a une diminution du pourcentage de DP obtenues suite à l!injection des CLP alors que les MPP en donnent toujours autant.

Figure 9 : Pourcentage de thymocytes DP provenant des progéniteurs donneurs (Serwold et al., 2009).

Le graphe montre le pourcentage de DP provenant de l!injection de MPP (rond) ou de CLP (triangle) à différents temps de cinétique post-injection (7, 14, 21 et 28 jours). A J14 et J28, les différences sont significatives.

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Ces expériences permettent ainsi de constater que les CLP donnent des DP plus rapidement que les MPP mais que ces derniers persistent plus longtemps : les MPP se différencieraient en progéniteurs (certainement des CLP) qui eux coloniseraient le thymus (d!où le délai de colonisation et la persistance de DP J28 post greffe car les MPP sont encore un peu douée d!auto-renouvellement). Après greffe de MPP, des CLP sont détectés confortant l!hypothèse que les MPP doivent se différencier en CLP avant colonisation du thymus (Serwold et al., 2009). Le problème ici est que les auteurs se sont intéressés uniquement aux MPP en général et non aux diverses sous- populations qui comme je l!ai démontré auparavant ont des potentialités très différentes (cf. figure 4). Ceci expliquerait facilement le délai de colonisation du thymus car les MPP3 (biaisé lymphoïde) sont minoritaires dans la MO et il est donc nécessaire suite à une greffe de MPP totale d!attendre un délai pour les obtenir. De la même façon, ils auraient du étudier, suite à la greffe des MPP, la présence des différentes sous-populations de MPP en plus de celle des CLP.

Parmi le large éventail d!articles concernant le sujet controversé qu!est la potentialité T du CLP, je vous en ai présenté quelques uns qui me semblent les plus représentatifs.