Caractérisation microbiologiques

On mélange 10 grammes de déchets ménagers coupés en petits morceaux avec 90 ml d’eau tamponnée, ensuite on agite l’ensemble pendant une heure. On filtre le mélange afin d’obtenir une solution représentant le mélange de microorganismes dans notre échantillon.

Des dilutions décimales ont été faites avant de passer à l’analyse sachant que ces étapes sont effectuées dans la zone d’asepsie (CEAEQ, 2011).

II.3.2. Recherche des staphylocoques pathogènes (Norme XP-T 90-412)

On effectue une filtration de l’échantillon sur une membrane cellulosique 0,45μm, cette dernière est déposée sur le milieu de culture spécifique Chapman. On incube à 37°C pendant 24 heures et si besoin 48 heures. Les souches de staphylocoques sont de taille importante et de couleur jaune. La confirmation de l’espèce est faite par l’utilisation de la galerie API (Appareillage et Procédé d'Identification).

II.3.3. Recherche des entérocoques (Norme NF ISO 7899-1)

Cette recherche se pratique en deux étapes : - test présomptif sur bouillon de Rothe, - test confirmatif sur bouillon de Litsky.

Milieu simple concentration : on introduit 1 ml de l’échantillon et ses dilutions décimales dans des tubes à essai contenant 10 ml du milieu Rothe simple concentration stérile.

Milieu double concentration : on introduit 10 ml de l’échantillon dans un tube à essai contenant 10 ml du milieu Rothe simple concentration stérile.

On incube les tubes à 37°C pendant 24 à 48 heures. Les tubes positifs présentent un trouble. Ceux- ci seront obligatoirement soumis au test confirmatif sur bouillon de Litsky.

II.3.4. Recherche des Clostridiums sulfito-réducteurs et leurs spores (Norme Afnor NF EN 26461-1, ISO6461-1)

On prépare d’abord le milieu de culture avant de passer à l’inoculation et l’incubation. Dans un bain Marie, on place quatre tubes contenant 20 ml de gélose de viande de foie.

37 Après fusion de la gélose, on laisse refroidir jusqu'à 55°C puis on ajoute 1ml de solution de sulfite de sodium et 4 goutes de la solution d’alun de fer. On mélange sans faire de bulles.

Pour la recherche des Clostridiums sulfito-réducteurs, on réparti dans quatre tubes stériles 5 ml de l’échantillon puis on fait couler dans chaque tube le contenu d’un tube de milieu. On mélange doucement et on le fait refroidir sous l’eau du robinet. On incube à 37°C. On fait une lecture après 24 heures puis une deuxième après 48 heures.

Pour la recherche des spores, après avoir détruit la forme végétale par le chauffage de 20 ml de l’échantillon en bain Marie à 80°C pendant 10 minutes, on refroidit l’échantillon rapidement sous l’eau du robinet à 55°C. Puis on suit les mêmes démarches que celle de la recherche des Clostridiums sulfito-réducteurs.

II.3.5. Recherche de Campylobacter jejuni (Norme ISO 17-995)

Après filtration de l’échantillon sur la membrane cellulosique 0,45μm, elle est déposée sur la gélose Skirrow et on incube en jarre anaérobie pendant 16 heures à 43°C. Après 16 heures, on enlève la membrane et on prolonge l’incubation pendant 3 jours. Les colonies seront identifiées par l’usage de la galerie API.

II.3.6. Recherche de salmonella spp (Norme NF EN ISO 6579)

La recherche de salmonella spp s’effectue en quatre étapes : pré-enrichissement, enrichissement, isolement et identification.

Pré-enrichissement : on mélange 10 ml de l’échantillon avec un volume 10 fois plus que le volume de l’échantillon d’eau peptonée tamponnée simple concentration. On incube le bouillon ensemencé à 37°C pendant 16 heures au moins et 20 heures au plus.

Enrichissement : on introduit 1ml du bouillon de pré-enrichissement dans 20 ml du milieu d’enrichissement (cystine-sélénite ou Rappaport-Vasiliadis et le bouillon au tétrathionate) et on incube à 37°C pendant 48 heures.

Isolement : à partir du bouillon d’enrichissement, on effectue un isolement sur des géloses spécifiques : gélose S-S (Salmonella-Shigella), gélose Hektoen, gélose au sulfite de bismuth ou gélose lactosée au vert brillant et rouge de phénol.

Identification: l’identification est réalisée par la galerie API.

II.3.7. Recherche de Yersinia enterolitica

On procède à un ensemencement de l’échantillon sur le milieu Mac Conkey. On incube en jarre anaérobie à 37°C pendant 24 heures ensuite à température ambiante pendant 24 heures. Il est préférable d’incuber à basse température pour favoriser la croissance des Yersinia enterolitica par

38 rapport aux autres genres des Enterobacteriaceae ou d’autres familles. On identifie l’espèce par l’utilisation d’une galerie d’API.

II.3.8. Recherche des coliformes totaux (Norme NF V 08-050)

La recherche des coliformes totaux consiste en un ensemencement en profondeur de l’échantillon selon la méthode de routine NF V 08-050. Après fusion du milieu spécifique : la gélose lactosée biliée au cristal violet et au rouge neutre (VRBL), on laisse refroidir et on maintient le milieu à 44- 47°C. On transfère 1ml de l’échantillon et ses dilutions dans une boite de Pétri stérile. On coule 12 ml de la gélose, on homogénéise parfaitement et on laisse refroidir sur une surface froide. Une fois solidifié, on fait couler 4ml de la gélose pour former une deuxième couche. On laisse refroidir et on incube à 30°C pendant 24 heures. L’identification est faite par la galerie API 20 E.

II.3.9. Recherche des coliformes fécaux (thermo-tolérants) (Norme NF V 08-060)

La recherche des coliformes fécaux s’effectue par un ensemencement en profondeur, le même mode opératoire que celui de la recherche des coliformes totaux sauf à la température d’incubation qui est à 44,5°C.

II.3.10. Recherche des germes fécaux (Norme NF EN ISO 4833)

La recherche des germes fécaux consiste à la recherche de l'ensemble des germes d’origine fécale contenus dans l'échantillon. 01 ml de l’échantillon et ses dilutions sont transférés dans une boite de Pétri stérile. On coule 14 ml de la gélose nutritive fondue et refroidie. On homogénéise le contenu par un mouvement rotatif vertical. On laisse refroidir sur une surface froide. On coule une deuxième couche de la gélose (4 ml) et on laisse se solidifier. On incube en position retourné pendant 72 heures à 30°C.

39

CHAPITRE III

GESTION DES DECHETS MENAGERS DANS

QUELQUES VILLES DE L’OUEST ET SUD

40

III. Gestion des déchets ménagers dans quelques villes de l’Ouest et Sud Ouest algérien