Analogues linéaires

Tableau 1.2 – Analogues contraints. Adaptée de Bittermann et al. (2004) avec permission. Copyright (2004) American Chemical Society.

Contrôle structural. Dans l’optique de contrôler la conformation de NT (8-13), Bit- termann et al. (2004) ont produit les composés présentés dans le tableau 1.2. Ceux-ci comportent un cycle à cinq membres entre l’amine α de la tyrosine 11 et le carbone α de la proline 10, ce qui permet de contraindre l’angle Ψ de la proline 10. Le composé 1 comporte une prolineL, tandis que le composé 2 comporte une prolineD. Les composés 3 et 4 sont équivalents aux composés 1 et 2 (respectivement) mais avec une tyrosineD. Les auteurs ont aussi synthétisé [NMeTyr11_{]NT (8-13) comme contrôle.}

Une représentation en trois dimensions de ces composés (figure 1.18) leur a permis de supposer que 1 (et 3) avait des valeurs d’angles correspondant à une conformation linéaire du peptide, tandis que 2 (et 4) adoptait une conformation en coude.

FIGURE 1.18 – Structures 3D des analogues contraints. Adaptée de (Bittermann et al., 2004) avec permission. Copyright (2004) American Chemical Society.

Les valeurs de Ki(obtenues sur des membranes de cellules porcines) sont rapportées dans

le tableau 1.2. Le seul composé à posséder une forte affinité est le 1 (12 nM). Il semble donc bien que la conformation linéaire soit privilégiée (composé 1) par rapport à la confor- mation en coude (composé 2, Ki = 17 µM). L’inversion de la configuration de la tyrosine

est quant à elle fortement défavorable, comme le montrent les valeurs de Kides composés

3 et 4 (> 100 et 14 µM, respectivement).

Il est primordial de noter ici que l’analogue de contrôle (non contraint, donc plus flexible) [NMeTyr11_{]NT (8-13) a une affinité bien plus faible que le composé 1 (1 400 nM contre}

12 nM, respectivement, cf. tableau 1.2). Ceci montre que la perte d’un donneur de pont hydrogène à cette position a une forte influence négative sur l’affinité (pour comparaison, les auteurs rapportent un Kide 1.3 nM pour la NT avec cet essai). Pourtant, le composé 1

possède une très forte affinité malgré l’absence de ce donneur de pont hydrogène.

Les auteurs attribuent donc ce gain à la perte d’entropie causée par la contrainte du ligand et suggèrent que le peptide endogène adopte une conformation linéaire au sein de la poche de liaison.

Amélioration des propriétés pharmacocinétiques. Afin d’améliorer les propriétés de NT (8-13) telles que la résistance aux protéases ou la biodisponibilité, diverses stratégies ont été appliquées. Les liens amides de la chaîne peptidique ont par exemple pu être pro- tégés de la dégradation grâce à la N-méthylation (Tyler et al., 1999; Härterich et al., 2008; Fanelli et al., 2015) ou bien par leur remplacement par un lien amine (lien amide réduit) (Wustrow et al., 1995; Petrie et al., 2004; Härterich et al., 2008).

La figure 1.19 montre deux exemples du succès de ces stratégies, les composés NT69L (NMeArg-Lys-Pro-NeoTrp-tLeu-Leu-OH) (Tyler-McMahon et al., 2000) et PD149163 (H-Lys-[ΨCH2NH]-Lys-Pro-Trp-tLeu-Leu-OEt) (Petrie et al., 2004).

NT69L comporte une arginine N-méthylée en N-terminal, et deux des acides aminés de la séquence de NT (8-13) sont remplacés par des acides aminés non-naturels : la tyrosine 11 par un analogue non-naturel du tryptophane, le neo-tryptophane, et l’isoleucine 12 par une tert-leucine.

Ce composé possède une très bonne affinité pour les deux récepteurs humains NTS1 et NTS2 (1.55 et 2.1 nM, respectivement). Bien qu’il n’ait pas été rapporté de valeurs de demi-vie in vitro ou in vivo, ses effets hypothermiants et analgésiques sont persistants pendants plusieurs heures après une seule injection ; 7 heures pour l’hypothermie et 5 heures pour l’analgésie après injection intrapéritonéale à des rats dans les deux cas (Tyler-

FIGURE 1.19 – Les analogues traversant la BHE NT69L et PD 149163. (a) Tyler- Mcmahon et al. (2000) ; (b) Petrie et al. (2004)

Mcmahon et al., 2000). Cet analogue apparaît donc bien plus stable in vivo que NT, mais aussi capable d’atteindre le SNC après administration périphérique.

Le deuxième peptide montré dans la figure 1.19 est le PD149163 (H-Lys-[ΨCH2NH]-Lys-

Pro-Trp-tLeu-Leu-OEt). Celui-ci comporte deux lysines avec un lien peptidique réduit entre les deux, un tryptophane en position 11 et une tert-leucine en position 12. C’est aussi le seul analogue de NT (8-13) rapporté avec un ester éthylique en C-terminal. Son affinité pour NTS1 est plus modérée que celle du même peptide avec l’acide carboxylique libre (Ki 159 nM et 1.13 nM, respectivement (Wustrow et al., 1995)) L’ester est sélectif pour

le récepteur NTS1 (aucune affinité pour NTS2) et est capable d’induire de l’hypothermie et de l’hypotension chez le rat (Petrie et al., 2004). Son action analgésique a aussi été démontrée (Fanelli et al., 2015), ainsi que sa capacité à traverser la BHE (Feifel et al., 1999, 2003).

Acides aminés silylés. Une stratégie possible pour augmenter la biodisponibilité des peptides est d’augmenter leur lipophilicité. Dans ce but, plusieurs analogues de NT (8-13) comportant un ou des acides aminés silylés ont été produits (figure 1.20).

Cavelier et al. (2002) ont par exemple produit l’analogue H-Lys-Lys-Sip-Tyr-Ile-Leu-OH, où la proline 10 de NT (8-13) a été remplacée par une γ-(dimethylsila)-proline (silapro- line, abrégée Sip), conserve une bonne affinité pour NTS1 et NTS2 (17 et 5 nM, respec- tivement). Les auteurs ont utilisé diverses techniques d’analyse structurales (telles que la

diffraction des rayons X, l’absorption infra-rouge et la RMN) pour prouver que le résidu et le peptide adoptaient une conformation similaire à la proline, et mentionnent que leur peptide est plus lipophile et plus résistant aux protéases que la NT (8-13).

Dans la même optique, une série d’analogues contenant l’acide aminé triméthylsilyl- alanine (TMS-Ala) en remplacement de l’un des deux acides aminés C-terminal a été produit par Fanelli et al. (2015) (figure 1.20). Ceux ayant un résidu TMS-Ala en posi- tion 12 (H-Lys-Lys-Sip-Tyr-TMS-Ala-Leu-OH et H-Lys-Lys-Pro-Tyr-TMS-Ala-Leu-OH) avaient une affinité réduite pour les deux récepteurs (par rapport à NT (8-13)), avec une préférence sensible pour NTS1.

En revanche, celui comportant un résidu TMS-Ala en position 13 (H-Lys-Lys-Pro-Tyr-Ile- TMS-Ala-OH) possède une meilleure affinité que NT (8-13) sur les deux récepteurs (IC50

pour NTS1 = 0.02 nM ; IC50 pour NTS2 = 0.26 nM). Ce composé a montré sa capacité

à induire un puissant effet analgésique après injection intrathécale (i.t.), mais un essai de stabilité in vitro a révélé une demi-vie dans le plasma très proche de celle de la NT (8-13) (autour de 1.5 minutes pour les deux composés) (Fanelli et al., 2015).

FIGURE1.20 – Analogues comportant un ou des résidus silylés. (a) Cavelier et al. (2002) ; (b) Fanelli et al. (2015)