Activités biologiques liées aux NETs

3.3.1 Rôle des NETs dans les activités pro-inflammatoires

Le roulement et l’adhésion des neutrophiles sont les étapes initiales de leurs implications dans les activités pro-inflammatoires. Leur activation nécessite cependant un contact avec des cytokines pro-inflammatoires particulières (TNFα, IL-1β, etc.) ou par des interactions cellules-cellules avec des CE activées [284]. Auparavant, nous avions déjà démontré que les angiopoïétines peuvent promouvoir directement l’activation du complexe β2-intégrine (CD11b/CD18), le recrutement des leucocytes et l’adhésion des

neutrophiles sur la matrice extracellulaire humaine (hECM) et des CE de veines ombilicales humaines (HUVEC) [70]. Quant au pouvoir adhésif des NETs, des études montrent que les NETs augmentent les risques de thrombose en stimulant l’adhésion et l’agrégation des plaquettes et des érythrocytes [285].

Dans cet ouvrage, nous démontrons que les NETs, indépendamment du stimulus utilisé pour les produire (angiopoïétines ou PMA), ont la capacité d’induire l’adhésion des neutrophiles à la hECM et aux HUVEC de manière concentration-dépendante. Sachant que les NETs servent de transporteurs pour certaines protéines pro- inflammatoires telles que la MPO, la NE et l’IL-17 [209, 286], nous avons effectué les tests de nouveaux, mais en utilisant des concentrations égales de NETs (200 ng/mL) produits par PBS, Ang1, Ang2, Ang1+2 et PMA, afin de vérifier si certains stimuli induisaient des NETs plus ou moins inflammatoires que d’autres. Le fait que les NETs en concentrations égales apportent la même adhérence aux neutrophiles peu importe l’agoniste utilisé suggère que même si les profils protéiques synthétisés sont différents pour le PMA versus l’Ang1, et que ces profils se reflètent sur les NETs produits, cela n’a pas influencé la capacité des NETs à induire l’adhésion des neutrophiles. L’effet adhérant des NETs semble plutôt être dû à leur intégrité, puisque l’ajout de la désoxyribunocléase I (DNAse I; une enzyme ayant la capacité de cliver l’ADN des NETs en hydrolysant les liens phosphodiesters adjacents aux nucléotides de type pyrimidines [287]) inhibe complètement l’effet adhésif des NETs, tout comme on peut le constater dans des études similaires [257, 288]. De plus, la combinaison DNAse I et PMA (sans

aucun NETs) n’ayant pas influencé l’adhésion des neutrophiles, nous pouvons affirmer que la DNAse I ne fait que dégrader l’ADN et n’interfère pas dans l’activation des neutrophiles ou des CE.

Sachant que la charge électrostatique négative de l’ADN confère aux NETs des propriétés adhérentes pour les protéines [212], il est possible que cette charge permette d’agripper les neutrophiles et les CE afin de créer un point d’attache pour leur adhésion. Par contre, l’utilisation d’un anticorps bloquant CD18 (α-CD18) a complètement empêché l’adhésion des neutrophiles à la hECM, et partiellement aux HUVEC. Ces observations indiquent que les NETs activent le complexe β2-intégrine des neutrophiles.

L’utilisation d’un antagoniste de la P-sélectine (rPSGL-Ig) a aussi réduit partiellement l’adhésion des neutrophiles aux HUVEC, mais lorsque combiné avec l’α-CD18, l’inhibition devenait alors complète. Ainsi, les NETs ont la capacité d’induire la translocation de la P-sélectine endothéliale et l’activation du complexe β2-intégrine, et

ce sont ces deux voies qui permettent aux NETs d’induire l’adhésion des neutrophiles aux CE.

3.3.2 Rôle des NETs dans les activités pro-angiogéniques

L’angiogenèse a été décrite comme un processus in vivo complexe et finement régulée de manière à ce que les CE migrent et prolifèrent dans les tissus avoisinants pour former de nouveaux capillaires à partir des vaisseaux existants. Bien que l’angiogenèse soit un phénomène assez rare chez l’adulte en condition physiologique, plusieurs pathologies à caractère inflammatoire possèdent un lien étroit avec l’angiogenèse, permettant bien souvent d’intensifier la réponse inflammatoire [289]. Discutées à maintes reprises dans cet ouvrage, les angiopoïétines possèdent un rôle primordial dans l’angiogenèse. Nos recherches démontrent maintenant que l’Ang1 et l’Ang2 peuvent aussi promouvoir la formation in vitro de tubules de type capillaire par les CE via la NETose des neutrophiles. Une étude récente par Aldabbous et coll. utilisant des NETs produits sous PMA a aussi révélé des conclusions similaires aux nôtres [290]. Pour expliquer les mécanismes permettant aux NETs d’avoir un tel effet, les auteurs ajoutent que ce phénomène est dépendant de l’activation du récepteur TLR4 endothélial et de l’activation subséquente

de NF-κB. Tout comme nos résultats obtenus dans nos études d’adhésion, la dégradation des NETs par la DNAse I a aussi inhibé l’effet pro-angiogénique des NETs.

De plus, notre laboratoire a récemment démontré la capacité des deux angiopoïétines à recruter des CE, des CML et des leucocytes. En effet, à l’aide d’un modèle d’éponges imbibées de Matrigel placées sous la peau de souris pendant 4 à 21 jours, nous observons que ce recrutement de cellules induit par les angiopoïétines cause la formation et la stabilisation de nouveaux vaisseaux fonctionnels [291]. À partir de ces observations et de celles effectuées dans la présente étude, nous avons effectué de nouvelles analyses immunohistochimiques sur certains de ces échantillons qui révèlent la colocalisation des NETs avec les neutrophiles dans les éponges imbibées avec Ang1 et Ang2 (Figure supplémentaire en annexe). Bien évidemment, ces données n’étant que préliminaires, nous devrons vérifier plus en détail que l’implication angiogénique in

vitro des NETs induits par les angiopoïétines soit aussi le cas en condition in vivo.

Les angiopoïétines seraient donc non seulement en mesure de recruter les neutrophiles au site inflammatoire, mais pourraient les activer et les amener à la NETose, de sorte que ces NETs complètent une boucle de rétroaction positive amplifiant l’effet angiogénique des angiopoïétines. Ces NETs peuvent aussi augmenter l’adhésion des neutrophiles afin de favoriser leur migration au site inflammatoire et former une nouvelle génération de NETs, engendrant une seconde boucle de rétroaction positive.