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Development of an odontoblast in vitro model to study dentin mineralization.

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Academic year: 2021

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HAL Id: inserm-00175147

https://www.hal.inserm.fr/inserm-00175147

Submitted on 27 Sep 2007

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Development of an odontoblast in vitro model to study

dentin mineralization.

David Magne, Gilles Bluteau, Serena Lopez-Cazaux, Pierre Weiss, Paul Pilet,

Helena Ritchie, Guy Daculsi, Jérôme Guicheux

To cite this version:

David Magne, Gilles Bluteau, Serena Lopez-Cazaux, Pierre Weiss, Paul Pilet, et al.. Development of an odontoblast in vitro model to study dentin mineralization.. Connective Tissue Research, Taylor & Francis, 2004, 45 (2), pp.101-8. �10.1080/03008200490464839�. �inserm-00175147�

(2)

Table 1: primers used for RT-PCR analysis (sequences, annealing temperature (T), size of

PCR products (bp), and reference, GAPDH: glyceraldehyde phosphate dehydrogenase, ALP: alkaline phosphatase, DMP-1: dentin matrix protein 1, DSPP: dentin sialophosphoprotein).

F 5’-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3’ R 5’-TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA-3’

GAPDH

F 5’-CAC ATC CAG GAA CCG CAG CAC-3’ R 5’CCT TAC TCT CCT TTG CCT C-3’

DSPP

F 5’-GAA GAC TGT TAT CCT TAC G-3’ R 5’-GTG ATC CCC TTT AGA TTC C-3’

DMP-1

F 5’-CTT CTT GCT AGT GGA AGG-3’ R 5’-CCT GGT AGT TGT TGT GAG-3’

ALP

F 5’-CCA ATC TGG TTC CCT CCC AC-3’ R 5’-TGG TAA GGT TGA ATG CAC TT-3’

COLL-1

Forward (F) and Reverse (R) sequence

Name T annealing bp reference

62°C 51°C 62°C 62°C 60°C 452 181 672 346 330 (27) (27) (28) (29) unpublished

(3)

0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 Days in culture 2 4 7 14 21 C el ls p er w el l (x 1 0 3 )

*

* *

* * *

(4)

0 1 2 3 4 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 0 0,5 1 1,5 2 0 0,5 1 1,5 COLL-1 181 pb ALP 346 pb DMP1 672 pb DSPP 330 pb GAPDH 452 pb 7 9 11 16 20 -RT Days in culture C O L L -1 /G A P D H (A U ) A L P /G A P D H (A U ) D M P -1 /G A P D H (A U ) D S P P /G A P D H (A U ) 7 9 11 16 20 Days in culture

(5)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 8 9 10 11 12 14 16 20 µ g C a /m g p ro t Days in culture

*

*

*

*

*

Pi

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

A

B

28 4000 Wavenumbers (cm-1) 1000 1500 νννν1νννν3PO4 Amide I νννν2CO3

C

D

Wavenumbers (cm-1) 1200 960 1125 1030 1020 1110

(6)

0 50 100 150 µ g C a /m g p ro t TGF-ββββ

+

+

-

-Pi

-

+

-

+

*

0 100 200 300 400 500 600 700 800 µ g C a /m g p ro t BMP-4 Pi

-

+

-

+

-

-

+

+

*

A

B

Figure

Table  1:  primers  used  for  RT-PCR  analysis  (sequences,  annealing  temperature  (T),  size  of  PCR  products  (bp),  and  reference,  GAPDH:  glyceraldehyde phosphate  dehydrogenase,  ALP:

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