Correspondances en Onco-Théranostic - Vol. VI - n° 1 - janvier-février-mars 2017 37
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37 Correspondances en Onco-Théranostic - Vol. VI - n° 1 - janvier-février-mars 2017
Cette fiche fournit un guide pratique aux pathologistes impliqués dans la sélection des zones tumorales soumises à un examen de biologie moléculaire avec estimation du pourcentage des cellules tumorales.
L’estimation du pourcentage des cellules tumorales (CT) dans un échantillon tissulaire correspond au chif- frage des cellules (noyaux) tumorales par rapport à l’ensemble des cellules (noyaux) présentes sur la coupe au niveau de la zone sélectionnée.
Cette étape, qui fait partie de la phase préanalytique, permet de préciser le plus justement possible la quan- tité d’ADN tumoral qui sera présente dans l’ADN géno- mique soumis à l’analyse moléculaire.
Le pourcentage de CT est nécessaire à la validation du test de biologie moléculaire. En effet, en fonction de la technique utilisée (qPCR, SNaPshot, séquençage de nouvelle génération [NGS], PCR digitale, etc.), la sen- sibilité analytique sera variable. Par exemple, pour un SNaPshot, celle-ci est à 15 % : c’est-à-dire que les ano- malies moléculaires présentent dans un échantillon ne seront mises en évidence que si le seuil de 15 % de CT est atteint. En d’autres termes, si aucune mutation n’est détectée avec l’estimation d’un pourcentage de CT < 15 %, le test moléculaire sera rendu non contributif et il sera recommandé de renouveler le prélèvement histologique. En revanche, si une mutation est identifiée, quel que soit le pourcentage de CT donné, l’analyse sera contributive et validée. À titre d’exemple, la PCR digitale, qui a une sensibilité analytique très élevée, peut détecter des anomalies présentes avec 0,01 % de CT (1).
Ô
Ô Discordance de lecture
du pourcentage de cellules tumorales
Selon 2 études publiées en 2011 et 2013 respectivement dans The Oncologist (2) et Modern Pathology (3), il existait
Estimation du pourcentage de cellules
tumorales dans un échantillon histologique soumis à une analyse de biologie moléculaire
M. Alorini*, A. Lamy*, J.C. Sabourin*
* Laboratoire de génétique somatique des tumeurs, service d’anatomie et de cytologie pathologiques, CHU de Rouen.
une importante discordance entre les pathologistes lors d’une estimation du pourcentage de CT. Cette discor- dance est liée à la variabilité inter observateur, mais surtout au manque de définition précise du pourcentage de CT, d’où l’importance d’une standardisation des méthodes.
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Ô Méthodologie préanalytique
Avant la sélection
Le pathologiste doit vérifier la demande d’analyse de biologie moléculaire afin de juger de la pertinence de son indication. Si l’indication est valide, il vérifie que le bloc choisi ou reçu présente des cellules tumorales et qu’elles correspondent bien à la tumeur décrite dans la feuille de demande ou le compte-rendu anatomo- pathologique joint.
Sélection de la zone tumorale et estimation du pourcentage de cellules tumorales
Si la tumeur à analyser est présente sur plusieurs blocs, il est essentiel de favoriser les lames correspondantes qui sont les plus riches en CT, en privilégiant les zones non inflammatoires (en effet, l’ADN lymphocytaire va “diluer”
l’ADN tumoral) et en excluant les zones nécrotiques.
Sous contrôle au microscope, la zone sélectionnée (riche en CT, sans inflammation ni nécrose) est entou- rée au feutre sur la lame colorée par hémalun-éosine- safran (HES) en évitant, si possible, les cellules normales adjacentes (épithélium normal, stroma), toujours pour minimiser l’effet de dilution (figures 1-3, p. 38).
Définition du pourcentage de cellules tumorales Le pourcentage de cellules tumorales est un rap- port (%). C’est le nombre total de noyaux des CT divisé par le nombre total de noyaux de toutes les cellules confondues dans la zone tissulaire sélectionnée qui sera soumise à l’analyse de biologie moléculaire :
% CT = Nombre de cellules tumorales
Nombre total de toutes les cellules confondues dans la zone sélectionnée
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Ô Recommandations pour le rendu
de l’estimation du pourcentage de cellules tumorales
L’Association française d’assurance qualité en anatomie et cyto- logie pathologiques (AFAQAP) [4] recommande cette grille de réponse :
• Dans les cas de cellularité faible ou moyenne (< 30 %), l’AFAQAP demande de préciser le pourcentage selon les tranches successives suivantes : < 1 %, 1-4 %, 5-9 %, 10-14 %, 15-19 %, 20-24 % et 25-29 %.
• Dans les cas de forte cellularité (≥ 30 %), 4 tranches de pour- centage sont proposées : 30 %, 50 %, 80 % et 100 %.
De façon pratique, il est plus simple de rendre l’estimation du pourcentage de CT comme suit : < 5 %, 5-15 %, 15-25 %, 25-50 % et > 50 %.
Cette méthodologie simplifiée correspond davantage à la pra- tique des analyses moléculaires en routine.
■> 50 %
Figure 1. Pièce opératoire d’adénocarcinome pulmonaire : tumeur très riche en cellules tumorales, sélection aisée de la zone à analyser (HES × 2,5).
> 50 %
Figure 2. Pièce opératoire d’adénocarcinome pulmonaire : tumeur avec zone de nécrose centrale (à éviter), sélection périphérique des zones à analyser (HES × 2,5).
Figure 3. Pièce opératoire d’adénocarcinome pulmonaire : tumeur comportant un stroma très abondant avec de très nombreux lymphocytes, sélection fine de la zone à analyser (HES × 20).
R é f é r e n c e s
1. Oxnard GR, Paweletz CP, Kuang Y et al. Noninvasive detection of response and resistance in EGFR-mutant lung cancer using quantitative next-generation geno- typing of cell-free plasma DNA. Clin Cancer Res 2014;20:1698-705.
2. Bellon E, Ligtenberg MJ, Tejpar S et al. External quality assessment for KRAS testing is needed: setup of a European program and report of the first joined regional quality assessment rounds. Oncologist 2011;16:467-78.
3. Smits AJ, Kummer JA, de Bruin PC et al. The estimation of tumor cell percentage for molecular testing by pathologists is not accurate. Mod Pathol 2014;27:168-74.
4. https://www.afaqap.fr
J.C. Sabourin déclare être membre de boards scientifiques pour Amgen, AstraZeneca et Merck Serono, en relation avec cette thématique.
Les coauteurs n’ont pas précisé leurs éventuels liens d’intérêts.
