Le clonage d’un gène
Clonage d’une séquence connue par PCR
-‐ à par'r d’ADN génomique à un gène mais les introns consitutent une par'e “inu'le” plus grande que les exons
Le génome humain
Mbp = millions de paires de bases
Le génome des eucaryotes comprend une grande par;e de séquences non codantes
La majeure par'e du génome des eucaryotes n’est pas codante.
Seul 1,5 % du génome code pour les ARNm qui serviront à traduire les protéines, pour les ARNr et les ARNt. Les séquences régulatrices (promoteurs) et les introns représentent 24 % du génome.
Presque toutes les séquences inter-‐géniques sont formées d’ADN répé''f dont 44 % sont cons'tués d’éléments transposables.
Clonage d’une séquence connue par PCR
-‐ à par'r d’ADN génomique à un gène mais les introns consitutent une par'e “inu'le” plus grande que les exons
-‐ à par'r d’ARNm rétrotranscrit à <ADNc (ADN complémentaire)
Les banques d’ADN
La procédure de clonage à par'r d’un mélange de fragments issus de l’ensemble du génome d’un organisme produit des milliers de plasmides recombinés différents insérés dans des bactéries différentes = une banque génomique. Des phages sont parfois u'lisés comme vecteurs à la place des plasmides car ils peuvent contenir de plus grands fragments d’ADN étranger.
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Le projet génome humain
La séquence complète d’un génome humain a été obtenue en 2003, par un consor'um interna'onal.
Il a pu être finalisé en trois étapes : -‐ la cartographie de liaison géné'que -‐ la cartographie physique
-‐ le séquençage de l’ADN
D’autres génomes ont également été séquencés complètement (2009) :
la souris (Mus musculus) la levure de la bière
(Saccharomyces cerevisiae)
la drosophile (Drosophila melanogaster)
le nématode
Caenorhab8dis elegans plusieurs bactéries dont E.
coli
le riz (Oryza sa8va)
…
Séquençage : première technique
Séquençage
La séquence complète d’un génome humain a été obtenue en 2003, par un consor'um interna'onal
En 2014, cela coute 2000-‐4000 dollars, prend 1 jour d’expérience mais de nombreux jours d’analyses bioinforma'ques et plusieurs milliers de génomes humaines différents ont déjà été séquencés.
à nouvelle technique = high throughput sequencing/next genera'on sequencing
