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Détermination de la structure par RMN d'une protéine impliquée dans la biosynthèse de centres [Fe-S]: SufA

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HAL Id: tel-00200198

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impliquée dans la biosynthèse de centres [Fe-S]: SufA

Nicolas Duraffourg

To cite this version:

Nicolas Duraffourg. Détermination de la structure par RMN d’une protéine impliquée dans la

biosyn-thèse de centres [Fe-S]: SufA. Biophysique [physics.bio-ph]. Université Joseph-Fourier - Grenoble I,

2006. Français. �tel-00200198�

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THÈSE

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Détermination de la structure par RMN d’une

protéine impliquée dans la biosynthèse de

centres [Fe-S] : SufA

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Je tiens à rem ercier tous les m em bres du jury d’avoir accepté de juger ce travail.

Je rem ercie le D octeur F rançoise G uerlesquin ainsi que le D octeur F rançois P enin d’avoir accepté

d’être rapporteur de ce travail ainsi que pour leurs conseils avisés.

Je rem ercie le D octeur Jean M arc L atour d’avoir accepté d’exam iner ce travail et de présider le jury

de m a thèse.

Je rem ercie le D octeur D om inique M arion, co-directeur de cette thèse de m ’avoir accueilli au sein de

son groupe, pour sa confiance et ses encouragem ents au cours de ces années. Je reste toujours adm iratif des

explications m étaphoriques que tu m ’as quelques fois distillées m e laissant croire que certains aspects de la

R M N pouvaient être sim ples… (en général, ça ne durait pas longtem ps).

Je rem ercie le P rofesseur M arc F ontecave et lui exprim e ici toute m on estim e de m ’avoir accueilli au

sein du laboratoire C B C R B ainsi que de la confiance qu’il m ’a accordée dès m on arrivée. C ette aventure

n’aurait jam ais eu lieu sans ton soutien et ton écoute dans les m om ents délicats.

L e présent travail a été réalisé entre le laboratoire C B C R B du C E A G renoble auquel je suis rattaché

et le laboratoire L R M N de l’institut de B iologie structurale. Je voudrais tout d’abord rem ercier Jean-P ierre

Sim orre, D irecteur du laboratoire L R M N , d’avoir accepté m a présence durant ces dernières années ainsi que

tes conseils avisés.

Je voudrais m aintenant rem ercier deux personnes pour qui j’ai une très grande estim e. T out d’abord

L e D octeur L aurence B lanchard, sans laquelle je n’aura is jam ais fait ce travail de thèse. M erci pour ta

gentillesse durant toutes ces années, ta patience et ta gra nde pédagogie. M erci pour tes encouragem ents et

les discussions scientifiques... ou non. Je te souhaite un e belle réussite professionnelle dans tes nouvelles

fonctions. T u es quelqu’un de bien ! soit « cool… »

L a deuxièm e personne que je ne veux pas oublier est le D octeur K laartje H ouben. T u es celle qui m ’a

le plus aidée durant ces années et je t’en suis extrêm ent reconnaissant. M erci de m ’avoir initié au calcul de

structure avec notre am i « A R IA » ainsi que pour ta gra nde patience et ton aide perm anente. J’adm ire ta

grande connaissance scientifique et reste surtout adm iratif de tes capacités linguistiques, m oi qui ne suis pas

vraim ent doué dans ce dom aine. E t surtout, m erci pour ton am itié quotidienne ainsi que tous les bons

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réussite scientifique et personnelle.

U n grand m erci à P aul Schanda, brillant D octorant A utrichien, qui com m e K laartje est un expert

linguistique m ais surtout un grand sportif avec qui j’ai partagé d’excellents m om ents que ce soit a u

laboratoire ou en m ontagne. M erci pour ta gentillesse et ton aide durant cette thèse. V ivem ent qu’o n

retourne se faire une « petite » balade…

M erci à toi, A drien, de m ’avoir supporté dans ton bureau et d’avoir supporté les sollicitations

fréquentes à propos de petits problèm es inform atiques… ainsi que pour tes conseils avisés à propos des

calculs de structures. M erci pour les pauses café.

Je rem ercie C atherine, B éate, Isabelle, B ernhard, M artin, Jérom e, P ierre, du laboratoire L R M N

pour leur sym phatie et disponibilité.

M erci aussi à tous les étudiant(e)s et post-doc de ce laboratoire pour leur gentillesse et leur aide :

H élène, R odolpho ,E w en, T hom as , G uillaum e , R ém y, Julien ainsi que D enis.

D u côté du laboratoire C B C R B je voudrais particulièrem ent rem ercier le D octeur Sandrin e

O llagnier de C houdens de m ’avoir perm is de travailler sur cette protéine et de m ’avoir toujours fourni

efficacem ent les échantillons nécessaires. Je voudrais aussi te rem ercier pour ta grande rigueur au cours de la

lecture de ce docum ent et pour tes précieux conseils. T u es donc la troisièm e fée qui s’est penchée sur m oi et

sans laquelle ce travail ne serait pas ce qu’il est.

Je voudrais aussi rem ercier le D octeur V incent N ivière avec qui j’ai débuté ce travail de thèse.

M erci pour ta pédagogie et de m ’avoir initié à la purification de protéine.

Je voudrais, ici, associé le D octeur Jacques G aillard, pour qui j’ai le plus profond respect. M erci à

toi Jacques d’avoir accepté de m e diriger au début de cette thèse. M erci pour ton hum anité et tout ce que tu

m ’as appris. Je te souhaite de bien profiter de ta nouvelle vie.

Je rem ercie le D octeur Stéphane M énage, avec qui j’ai com m encé cette aventure dans le laboratoire

de chim ie et avec lequel je partage un certain gôut de la répartie… j’avoue que tu es un peu m eilleur que m oi

m ais je progresse. B ref, j’espère que l’on retravaillera ensem ble.

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pour les franches rigolades et les bonnes eng… … .. B ref, m erci pour cette bonne tranche de vie au

laboratoire. Je ne regrette pas d’être là et com pte bien y rester encore un peu.

M erci à tous les T hèsards et post-D oct du laboratoire passé et présent pour leur bonne hum eur, leur

sym pathie et les bonnes discussions pas toujours très sérieuses. V u le nom bre, si je dois en citer une, c’est toi

M aïté de m ’avoir fourni des échantillons et pour les discussions intéressantes que nous avons pu avoir sur le

sujet.

M erci à toi O livier, pour ton am itié et ton soutien perm a nent. P our ta présence dans les m om ents

forts, voir difficiles de ces dernières années, aussi bien professionnels que personnels.

P our term iner, je voudrais rem ercier le C E A pour son acco m pagnem ent perm anent au cours de cette

longue aventure de form ation, pour la confiance qui m ’a été tém oigné aussi bien sur les centres C E A de

V alduc et de G renoble. P our les m êm es raisons je rem ercie l’université de B ourgogne et l’université Joseph

F ourier de G renoble.

Je ne pourrais pas être digne si j’oubliais de rem ercier m a fam ille, parents et frères, qui m ’on t

toujours encouragé et soutenu au cours de toutes ces an nées. B ien entendu, si il y une personne que je ne

peux oublier c’est toi, A lexandre, m on garçon qui ne m ’a pas beaucoup vu ces derniers tem ps. Je te dédie

cette thèse et suis fier de toi. M erci à toi, E m m anuelle po ur ton soutien, ton aide et tes encouragem ents au

cours de cette rédaction, d’avoir supporté quelques nuits blanches et bien entendu pour tout ce que nous

avons partagé…

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Þ✑Þ ✓✻ ✗ Ö ➯✞ó❅➨✺➯✞➳✧➵❇➼✆➯ðîsó✞➧✾➲✵➭❃➩✔➻✞➳✧➲ð➭✣➯ðî✱î❃➭❃➩❭➨✺ó✹➭✏➨✆➩✔➻✬➵❛➯ðî✧✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓ ③ ⑩ Þ✑Þ ✓✻✞✓ ☎ ✗ Ý ➯ðî✛ó✞➧✆➲ð➭õ➩✔➻✬➳✧➲ð➭✣➯ðî✛ëÚ➯ðî❃➨➜➩✔➻✬➫➜➵❉➯✵î✛ó✞➵❉➻❩î✠î✔➳❉ïð➨✺➯❩î ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓ ③ ⑩ Þ✑Þ ✓✻✞✓✂✞✗ Ý ➯ðî✛ó✞➧✆➲ð➭õ➩✔➻✬➳✧➲ð➭✣➯ðîs➧✾➩✑➳❘➯÷➲✵➭✣➻❅➭❃➳✧➧✆➲✆➲✆➯✞➵❉➵❛➯❩î✆✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ☎ Þ✑Þ ✓✻✞✓✂ ✓✩☎ ✗ Þ ➲✞➭✣➯✬➩✔➻✞ó❅➭❃➳❘➧✾➲❵➼✆➳✰ö➜➧✫➵❘➻÷➳✶➩✹➯✍✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ✂ Þ✑Þ ✓✻✞✓✂ ✓✩☎ ✓ ☎ ✗ ✙ î✑ö➜➯✞ó✥➭➐➭❃ê❫ò✞➧❩➩✑➳✧ïð➨✻➯ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ✂ Þ✑Þ ✓✻✞✓✂ ✓✩☎ ✓✂✞✗ Ý ➯ðî✕➫➜➻✙ó❅➭✣ò✬➩✔➳✧➧✆ö✆ê✆➻✬➸➜➯ðî ✫❃➳❉➵❛➻✞ëÚ➯÷➲✵➭✣➯❅➨✏✛ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ⑧ ❱✻❱P❱★❢ ✣ ❪✤❫✺♥✴❣❂❱ ❥ ✜ ❨❝❱❷❪✕❲ ✣ ❪ ❣▼♥❉❛✹❵❜❣★✜ ❱❤❬✤✐✢❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞ ⑧ ✠ Þ✑Þ✑Þ ✓✩☎ ✗ Þ ➲✵➭✏➩✣➧✫➼ð➨✺ó✹➭❃➳✧➧✆➲ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ✠ Þ✑Þ✑Þ ✓✂✞✗ Ý ➯➥ó✞➻✞➵✧ó❅➨✺➵➜➼✆➯➝î❭➭❃➩❃➨✺ó❅➭✏➨➜➩✔➯ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ➄ Þ✑Þ✑Þ ✓✂ ✓✩☎ ✗ Ý ➯➥ó✬ê✆➻✞ë❲öÚ➼✆➯✰✫❃➧✾➩✳ó✞➯✭✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❤⑧ ⑩ Þ✑Þ✑Þ ✓✂ ✓✂✞✗☛ñ❦ò✹➭❃ê✆➧➜➼✆➯➥➼✆➯➺ó✞➻✞➵✧ó✥➨❇➵ ✁ ✙➺Ö➺Þ✬✙ ☎ ✓✂ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓ ✠✟✝ ❱ ✩✿❢❤✐❉❨❭❵✺❫✷✐✸❫✺✐✸❫ ❿✕❲ ✜ ✣ ❱✄✂❴❵✷✐✫❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞ ✠ ✂ ❃❅❄✗❆✦❇❉❈✒❊✤❋✷● ❍ ❍➀❍ ◗ ☎ ❋✎✍ ☎✎✂✝✆ ❊✕❈ ✍ ✌ ●✰❊ ❆❩❊✤❊❴❋✷❈✟✞✄✂❩❊✕❈ ✍ ✌ ☎✷● ✓✤❆ ❇✹❋✎✍✫❊✕●✰❈ ✌✦●✲❘✤✂✡✠☞☛ ✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔✖✔✗✔✖✔✖✔✗✔ ✠ ➄ ❱✯❢❳❺♦❬✤♥▼❺✢✜ ❬✄✜❜❨❝❱★❪✕❲ ❫✺✐✼❣✤✥❡♥❉❛ ➁ ✜❴❲✢❨❹❱✻❣▼❣❉❪❸❲ ❫✿✐ ❣★✜❑❺♦❬✰❪✿❨❻♥❂❱❼❲❩✐ ❥✍✌✏✎ ✜✮❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞ ✠ ➄ Þ✑Þ ✓✩☎ ✗ Ö òðî❭➨✺➵✜➭✣➻❅➭✔î✛➼✆➯➺ö✆➩✣➧➜➼ð➨✺ó ➭❃➳✧➧✆➲❵➼✆➯➥➵✧➻➺ö✆➩✔➧ð➭✣ò✬➳✧➲❫➯❲ô❫➨ ✫ ✙ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓ ✠✈⑩ ❱✻❱❷❢✻❛ ✜✰❬✄✜✷❛✤❨❭♥▼❬✰❱ ❥ ✜ ❨❝❱★❪✕❲ ❺♦❬❸♥✴❣❂❱ ✣ ❱❳❲ ✜✺❱ ❬✤✐✸❫✺✐ ❥✍✌✑✎ ✜ ❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞ ✠✈⑩ Þ✑Þ✑Þ ✓✩☎ ✗✑é✸➻✬➩✔➻✞ó✥➭✣ò❅➩✑➳✏î❃➭❃➳✧ïð➨✌➯✵î✛➼✆➯❲ô❩➨ ✫ ✙ ➼❇❆✓✒✕✔✗✖✙✘✛✚✢✜✣✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✤✔✥✔✥✔✥✔✥✔✔✠✖✣ Þ✑Þ✑Þ ✓✂✞✗☛➦✲➩✔ò✞➼❩➳✧ó✥➭✑➳✧➧✆➲❵➼✆➯➝î❃➭❃➩❭➨✺ó ➭✏➨❫➩✔➯ðî✱î✳➯✞ó✞➧✆➲✆➼✆➻✞➳✰➩✔➯❩î✛➼✆➯❲ô❩➨✞✫✙ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❳➄✟✝ Þ✑Þ✑Þ ✓✻✟✗ × ó✬ê✆➻✬➲✵➭✑➳✧➵❛➵✧➧✫➲ Ö ñ Ø ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❳➄☞☎ ❱✻❱P❱★❢ ✜✷❨❂❨❭❬✤❱✻❾q❵❩❨❝❱★❪✕❲ ❫✿✐❸❥❜❬✤♥❸❥➀❪✕❲ ✜❦❲✢❛ ✐❸❥❜❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞❡❞ ➄ ✂ Þ✑Þ✑Þ ✓✩☎ ✗✹ôð➭õ➩✔➻❅➭✣ò✬➸✆➳✧➯➥➼❇❆❛➻❅➭✏➭❃➩✑➳✩➫❩➨✆➭✣➳✧➧✾➲ ➼✆➯ðî❆➩✔òðî✳➧✾➲❫➻✞➲✆ó✵➯ðî✛➼✆➯➥➵✧➻➥ó✞ê➜➻✡✥☛➲❫➯➺ö✆➩✔➳❍➲❫ó✞➳❍ö✺➻✞➵❛➯ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❳➄✖✻ Þ✑Þ✑Þ ✓✂✞✗ ✙ ➭❉➭❃➳✰➫❱➨✆➭✑➳✧➧✆➲♥î✳ò✞ïð➨✺➯✞➲ð➭✣➳✧➯✞➵❉➵❛➯➥➯❅➭✮é➥ô Þ ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❳➄ ③ Þ✑Þ✑Þ ✓✻✟✗ ✙ ➲✆➻✞➵✧í❇î✠➯➥➼✆➯➥ë➝➨✆➭✣➻✬➲ð➭✔î ✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓❳➄✟✠

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