Année: 2021 Thèse N°: 35
VALIDATION ANALYTIQUE
D’une methoDe De Dosage
de l’atorvastatine
THESE
Présentée et soutenue publiquement le : / /2021
PAR
Monsieur Saad BELABDA
Né le 18 Septembre 1995 à Rabat
Pour l'Obtention du Diplôme de
Docteur en Pharmacie
Mots Clés : Validation analytique; Atorvastatine; Dosage; HPLC
Membres du Jury :
Monsieur Samir AHID Président
Professeur de Pharmacologie
Monsieur Mustapha BOUATIA Rapporteur
Professeur de Chimie Analytique et Bromatologie
Monsieur Rachid NEJJARI Juge
Professeur de Pharmacognosie
Monsieur Miloud EL KARBANE Juge
Professeur de Chimie Analytique et Bromatologie
ROYAUME DU MAROC
UNIVERSITE MOHAMMED V DE RABAT FACULTE DE MEDECINE
ET DE PHARMACIE RABAT
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31
UNIVERSITE MOHAMMED V
FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE RABAT
1. DOYENS HONORAIRES :
2. 1962 – 1969: Professeur Abdelmalek FARAJ 1969 – 1974: Professeur Abdellatif BERBICH 1974 – 1981: Professeur Bachir LAZRAK 1981 – 1989: Professeur Taieb CHKILI 1989 – 1997: Professeur Mohamed Tahar ALAOUI 1997 – 2003: Professeur Abdelmajid BELMAHI 2003 - 2013: Professeur Najia HAJJAJ – HASSOUNI
ADMINISTRATION :
Doyen Professeur Mohamed ADNAOUI
Vice-Doyen chargé des Affaires Académiques et Estudiantines
Professeur Brahim LEKEHAL
Vice-Doyen chargé de la Recherche et de la Coopération
Professeur Toufiq DAKKA
Vice-Doyen chargé des Affaires Spécifiques à la Pharmacie
Professeur Younes RAHALI
Secrétaire Général
Mr. Mohamed KARRA
1 - ENSEIGNANTS-CHERCHEURS MEDECINS ET PHARMACIENS
3. PROFESSEURS DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR :
Décembre 1984
Pr. MAAOUNI Abdelaziz Médecine Interne – Clinique Royale
Pr. MAAZOUZI Ahmed Wajdi Anesthésie -Réanimation Pr. SETTAF Abdellatif Pathologie Chirurgicale Décembre 1989
Pr. ADNAOUI Mohamed Médecine Interne –Doyen de la FMPR
Pr. OUAZZANI Taïbi Mohamed Réda Neurologie Janvier et Novembre 1990
Pr. KHARBACH Aîcha Gynécologie -Obstétrique Pr. TAZI Saoud Anas Anesthésie Réanimation Février Avril Juillet et Décembre 1991
Pr. AZZOUZI Abderrahim Anesthésie Réanimation- Doyen de FMPO
Pr. BAYAHIA Rabéa Néphrologie
Pr. BELKOUCHI Abdelkader Chirurgie Générale Pr. BENCHEKROUN Belabbes Abdellatif Chirurgie Générale Pr. BENSOUDA Yahia Pharmacie galénique
Pr. BERRAHO Amina Ophtalmologie
Pr. BEZAD Rachid Gynécologie Obstétrique Méd. Chef Maternité des Orangers
Pr. CHERRAH Yahia Pharmacologie
Pr. CHOKAIRI Omar Histologie Embryologie
Pr. KHATTAB Mohamed Pédiatrie
Pr. SOULAYMANI Rachida Pharmacologie- Dir. du Centre National PV Rabat
Pr. TAOUFIK Jamal Chimie thérapeutique
Décembre 1992
Pr. AHALLAT Mohamed Chirurgie Générale Doyen de FMPT
Pr. BENSOUDA Adil Anesthésie Réanimation Pr. CHAHED OUAZZANI Laaziza Gastro-Entérologie Pr. CHRAIBI Chafiq Gynécologie Obstétrique Pr. EL OUAHABI Abdessamad Neurochirurgie
Pr. FELLAT Rokaya Cardiologie
Pr. JIDDANE Mohamed Anatomie
Pr. TAGHY Ahmed Chirurgie Générale
Pr. ZOUHDI Mimoun Microbiologie
Mars 1994
Pr. BENJAAFAR Noureddine Radiothérapie
Pr. BEN RAIS Nozha Biophysique
Pr. CAOUI Malika Biophysique
Pr. CHRAIBI Abdelmjid Endocrinologie et Maladies Métaboliques Doyen de la FMPA
Pr. EL AMRANI Sabah Gynécologie Obstétrique
Pr. ERROUGANI Abdelkader Chirurgie Générale – Directeur du CHIS
Pr. ESSAKALI Malika Immunologie
Pr. ETTAYEBI Fouad Chirurgie Pédiatrique
Pr. IFRINE Lahssan Chirurgie Générale
Pr. RHRAB Brahim Gynécologie –Obstétrique
Pr. SENOUCI Karima Dermatologie
Mars 1994
Pr. ABBAR Mohamed* Urologie Inspecteur du SSM
Pr. BENTAHILA Abdelali Pédiatrie
Pr. BERRADA Mohamed Saleh Traumatologie – Orthopédie Pr. CHERKAOUI Lalla Ouafae Ophtalmologie
Pr. LAKHDAR Amina Gynécologie Obstétrique
Pr. MOUANE Nezha Pédiatrie
Mars 1995
Pr. ABOUQUAL Redouane Réanimation Médicale Pr. AMRAOUI Mohamed Chirurgie Générale Pr. BAIDADA Abdelaziz Gynécologie Obstétrique Pr. BARGACH Samir Gynécologie Obstétrique Pr. EL MESNAOUI Abbes Chirurgie Générale Pr. ESSAKALI HOUSSYNI Leila Oto-Rhino-Laryngologie Pr. IBEN ATTYA ANDALOUSSI Ahmed Urologie
Pr. OUAZZANI CHAHDI Bahia Ophtalmologie
Pr. SEFIANI Abdelaziz Génétique
Pr. ZEGGWAGH Amine Ali Réanimation Médicale Décembre 1996
Pr. BELKACEM Rachid Chirurgie Pédiatrie Pr. BOULANOUAR Abdelkrim Ophtalmologie Pr. EL ALAMI EL FARICHA EL Hassan Chirurgie Générale
Pr. GAOUZI Ahmed Pédiatrie
Pr. OUZEDDOUN Naima Néphrologie
Pr. ZBIR EL Mehdi* Cardiologie Directeur HMI Mohammed V * Enseignants Militaires
Novembre 1997
Pr. ALAMI Mohamed Hassan Gynécologie-Obstétrique
Pr. BIROUK Nazha Neurologie
Pr. FELLAT Nadia Cardiologie
Pr. KADDOURI Noureddine Chirurgie Pédiatrique
Pr. KOUTANI Abdellatif Urologie
Pr. LAHLOU Mohamed Khalid Chirurgie Générale
Pr. MAHRAOUI CHAFIQ Pédiatrie
Pr. TOUFIQ Jallal Psychiatrie Directeur Hôp.Ar-razi Salé
Pr. YOUSFI MALKI Mounia Gynécologie Obstétrique Novembre 1998
Pr. BENOMAR ALI Neurologie Doyen de la FMP Abulcassis
Pr. BOUGTAB Abdesslam Chirurgie Générale
Pr. ER RIHANI Hassan Oncologie Médicale
Pr. BENKIRANE Majid* Hématologie
Janvier 2000
Pr. ABID Ahmed* Pneumo-phtisiologie
Pr. AIT OUAMAR Hassan Pédiatrie
Pr. BENJELLOUN Dakhama Badr.Sououd Pédiatrie
Pr. BOURKADI Jamal-Eddine Pneumo-phtisiologie Directeur Hôp. My Youssef
Pr. CHARIF CHEFCHAOUNI Al Montacer Chirurgie Générale Pr. ECHARRAB El Mahjoub Chirurgie Générale Pr. EL FTOUH Mustapha Pneumo-phtisiologie Pr. EL MOSTARCHID Brahim* Neurochirurgie
Pr. TACHINANTE Rajae Anesthésie-Réanimation Pr. TAZI MEZALEK Zoubida Médecine Interne Novembre 2000
Pr. AIDI Saadia Neurologie
Pr. AJANA Fatima Zohra Gastro-Entérologie
Pr. BENAMR Said Chirurgie Générale
Pr. CHERTI Mohammed Cardiologie
Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Selma Anesthésie-Réanimation
Pr. EL HASSANI Amine Pédiatrie - Directeur Hôp.Cheikh Zaid
Pr. EL KHADER Khalid Urologie
Pr. GHARBI Mohamed El Hassan Endocrinologie et Maladies Métaboliques Pr. MDAGHRI ALAOUI Asmae Pédiatrie
Décembre 2001
Pr. BALKHI Hicham* Anesthésie-Réanimation Pr. BENABDELJLIL Maria Neurologie
Pr. BENAMAR Loubna Néphrologie
Pr. BENAMOR Jouda Pneumo-phtisiologie
Pr. BENELBARHDADI Imane Gastro-Entérologie
Pr. BENNANI Rajae Cardiologie
Pr. BENOUACHANE Thami Pédiatrie
Pr. BEZZA Ahmed* Rhumatologie
Pr. BOUCHIKHI IDRISSI Med Larbi Anatomie Pr. BOUMDIN El Hassane* Radiologie
Pr. CHAT Latifa Radiologie
Pr. DAALI Mustapha* Chirurgie Générale Pr. EL HIJRI Ahmed Anesthésie-Réanimation Pr. EL MAAQILI Moulay Rachid Neuro-Chirurgie
Pr. EL MADHI Tarik Chirurgie-Pédiatrique Pr. EL OUNANI Mohamed Chirurgie Générale
Pr. ETTAIR Said Pédiatrie - Directeur Hôp. Univ. Cheikh Khalifa
Pr. GAZZAZ Miloudi* Neuro-Chirurgie
Pr. HRORA Abdelmalek Chirurgie Générale Directeur Hôpital Ibn Sina
Pr. KABIRI EL Hassane* Chirurgie Thoracique Pr. LAMRANI Moulay Omar Traumatologie Orthopédie
Pr. LEKEHAL Brahim Chirurgie Vasculaire Périphérique V-D chargé Aff Acad.
Est.
Pr. MEDARHRI Jalil Chirurgie Générale
Pr. MIKDAME Mohammed* Hématologie Clinique
Pr. MOHSINE Raouf Chirurgie Générale
Pr. NOUINI Yassine Urologie
Pr. SABBAH Farid Chirurgie Générale
Pr. SEFIANI Yasser Chirurgie Vasculaire Périphérique Pr. TAOUFIQ BENCHEKROUN Soumia Pédiatrie
Décembre 2002
Pr. AL BOUZIDI Abderrahmane* Anatomie Pathologique
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Pr. BENZEKRI Laila Dermatologie
Pr. BENZZOUBEIR Nadia Gastro-Entérologie Pr. BERNOUSSI Zakiya Anatomie Pathologique Pr. CHOHO Abdelkrim * Chirurgie Générale
Pr. CHKIRATE Bouchra Pédiatrie
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Pr. FILALI ADIB Abdelhai Gynécologie Obstétrique
Pr. HAJJI Zakia Ophtalmologie
Pr. JAAFAR Abdeloihab* Traumatologie Orthopédie
Pr. KRIOUILE Yamina Pédiatrie
Pr. MOUSSAOUI RAHALI Driss* Gynécologie Obstétrique Pr. OUJILAL Abdelilah Oto-Rhino-Laryngologie
Pr. RAISS Mohamed Chirurgie Générale
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Janvier 2004
Pr. ABDELLAH El Hassan Ophtalmologie
Pr. AMRANI Mariam Anatomie Pathologique Pr. BENBOUZID Mohammed Anas Oto-Rhino-Laryngologie Pr. BENKIRANE Ahmed* Gastro-Entérologie
Pr. BOULAADAS Malik Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale
Pr. BOURAZZA Ahmed* Neurologie
Pr. CHAGAR Belkacem* Traumatologie Orthopédie Pr. CHERRADI Nadia Anatomie Pathologique
Pr. EL FENNI Jamal* Radiologie
Pr. EL HANCHI ZAKI Gynécologie Obstétrique Pr. EL KHORASSANI Mohamed Pédiatrie
Pr. HACHI Hafid Chirurgie Générale
Pr. JABOUIRIK Fatima Pédiatrie
Pr. KHARMAZ Mohamed Traumatologie Orthopédie Pr. MOUGHIL Said Chirurgie Cardio-Vasculaire Pr. OUBAAZ Abdelbarre * Ophtalmologie
Pr. TARIB Abdelilah* Pharmacie Clinique Pr. TIJAMI Fouad Chirurgie Générale Pr. ZARZUR Jamila Cardiologie Janvier 2005
Pr. ABBASSI Abdellah Chirurgie Réparatrice et Plastique
Pr. ALLALI Fadoua Rhumatologie
Pr. AMAZOUZI Abdellah Ophtalmologie
Pr. BAHIRI Rachid Rhumatologie Directeur Hôp. Al Ayachi Salé
Pr. BARKAT Amina Pédiatrie
Pr. BENYASS Aatif Cardiologie
Pr. DOUDOUH Abderrahim* Biophysique
Pr. HAJJI Leila Cardiologie (mise en disponibilité)
Pr. HESSISSEN Leila Pédiatrie
Pr. JIDAL Mohamed* Radiologie
Pr. LAAROUSSI Mohamed Chirurgie Cardio-vasculaire Pr. LYAGOUBI Mohammed Parasitologie
Pr. SBIHI Souad Histo-Embryologie Cytogénétique Pr. ZERAIDI Najia Gynécologie Obstétrique
AVRIL 2006
Pr. ACHEMLAL Lahsen* Rhumatologie
Pr. BELMEKKI Abdelkader* Hématologie
Pr. BENCHEIKH Razika O.R.L
Pr. BIYI Abdelhamid* Biophysique
Pr. BOUHAFS Mohamed El Amine Chirurgie - Pédiatrique
Pr. BOULAHYA Abdellatif* Chirurgie Cardio – Vasculaire. Directeur Hôpital Ibn Sina Marr.
Pr. CHENGUETI ANSARI Anas Gynécologie Obstétrique
Pr. DOGHMI Nawal Cardiologie
Pr. FELLAT Ibtissam Cardiologie
Pr. FAROUDY Mamoun Anesthésie Réanimation Pr. HARMOUCHE Hicham Médecine Interne Pr. IDRISS LAHLOU Amine* Microbiologie
Pr. JROUNDI Laila Radiologie
Pr. KARMOUNI Tariq Urologie
Pr. KILI Amina Pédiatrie
Pr. KISRA Hassan Psychiatrie
Pr. KISRA Mounir Chirurgie – Pédiatrique Pr. LAATIRIS Abdelkader* Pharmacie Galénique Pr. LMIMOUNI Badreddine* Parasitologie
Pr. MANSOURI Hamid* Radiothérapie
Pr. OUANASS Abderrazzak Psychiatrie
Pr. SAFI Soumaya* Endocrinologie
Pr. SOUALHI Mouna Pneumo – Phtisiologie
Pr. TELLAL Saida* Biochimie
Pr. ZAHRAOUI Rachida Pneumo – Phtisiologie Octobre 2007
Pr. ABIDI Khalid Réanimation médicale
Pr. ACHACHI Leila Pneumo phtisiologie
Pr. ACHOUR Abdessamad* Chirurgie générale Pr. AIT HOUSSA Mahdi * Chirurgie cardio vasculaire Pr. AMHAJJI Larbi * Traumatologie orthopédie
Pr. AOUFI Sarra Parasitologie
Pr. BAITE Abdelouahed * Anesthésie réanimation Pr. BALOUCH Lhousaine * Biochimie-chimie
Pr. BENZIANE Hamid * Pharmacie clinique
Pr. BOUTIMZINE Nourdine Ophtalmologie Pr. CHERKAOUI Naoual * Pharmacie galénique Pr. EHIRCHIOU Abdelkader * Chirurgie générale
Pr. EL BEKKALI Youssef * Chirurgie cardio-vasculaire Pr. EL ABSI Mohamed Chirurgie générale
Pr. EL MOUSSAOUI Rachid Anesthésie réanimation
Pr. EL OMARI Fatima Psychiatrie
Pr. GHARIB Noureddine Chirurgie plastique et réparatrice
Pr. HADADI Khalid * Radiothérapie
Pr. ICHOU Mohamed * Oncologie médicale
Pr. ISMAILI Nadia Dermatologie
Pr. KEBDANI Tayeb Radiothérapie
Pr. LOUZI Lhoussain * Microbiologie
Pr. MADANI Naoufel Réanimation médicale
Pr. MAHI Mohamed * Radiologie
Pr. MARC Karima Pneumo phtisiologie
Pr. MASRAR Azlarab Hématologie biologique
Pr. MRANI Saad * Virologie
Pr. OUZZIF Ez zohra * Biochimie-chimie
Pr. RABHI Monsef * Médecine interne
Pr. RADOUANE Bouchaib* Radiologie
Pr. SEFFAR Myriame Microbiologie
Pr. SEKHSOKH Yessine * Microbiologie
Pr. SIFAT Hassan * Radiothérapie
Pr. TABERKANET Mustafa * Chirurgie vasculaire périphérique
Pr. TACHFOUTI Samira Ophtalmologie
Pr. TAJDINE Mohammed Tariq* Chirurgie générale
Pr. TANANE Mansour * Traumatologie-orthopédie
Pr. TLIGUI Houssain Parasitologie
Pr. TOUATI Zakia Cardiologie
Mars 2009
Pr. ABOUZAHIR Ali * Médecine interne
Pr. AGADR Aomar * Pédiatrie
Pr. AIT ALI Abdelmounaim * Chirurgie Générale
Pr. AKHADDAR Ali * Neuro-chirurgie
Pr. ALLALI Nazik Radiologie
Pr. AMINE Bouchra Rhumatologie
Pr. ARKHA Yassir Neuro-chirurgie Directeur Hôp.des Spécialités
Pr. BELYAMANI Lahcen * Anesthésie Réanimation
Pr. BJIJOU Younes Anatomie
Pr. BOUHSAIN Sanae * Biochimie-chimie
Pr. BOUI Mohammed * Dermatologie
Pr. BOUNAIM Ahmed * Chirurgie Générale Pr. BOUSSOUGA Mostapha * Traumatologie-orthopédie
Pr. CHTATA Hassan Toufik * Chirurgie Vasculaire Périphérique Pr. DOGHMI Kamal * Hématologie clinique
Pr. EL MALKI Hadj Omar Chirurgie Générale Pr. EL OUENNASS Mostapha* Microbiologie
Pr. ENNIBI Khalid * Médecine interne
Pr. FATHI Khalid Gynécologie obstétrique
Pr. HASSIKOU Hasna * Rhumatologie
Pr. KABBAJ Nawal Gastro-entérologie
Pr. KABIRI Meryem Pédiatrie
Pr. KARBOUBI Lamya Pédiatrie
Pr. LAMSAOURI Jamal * Chimie Thérapeutique Pr. MARMADE Lahcen Chirurgie Cardio-vasculaire
Pr. MESKINI Toufik Pédiatrie
Pr. MESSAOUDI Nezha * Hématologie biologique Pr. MSSROURI Rahal Chirurgie Générale
Pr. NASSAR Ittimade Radiologie
Pr. OUKERRAJ Latifa Cardiologie
Pr. RHORFI Ismail Abderrahmani * Pneumo-Phtisiologie Octobre 2010
Pr. ALILOU Mustapha Anesthésie réanimation
Pr. AMEZIANE Taoufiq* Médecine Interne Directeur ERSSM
Pr. BELAGUID Abdelaziz Physiologie
Pr. CHADLI Mariama* Microbiologie
Pr. CHEMSI Mohamed* Médecine Aéronautique
Pr. DAMI Abdellah* Biochimie- Chimie
Pr. DARBI Abdellatif* Radiologie
Pr. DENDANE Mohammed Anouar Chirurgie Pédiatrique
Pr. EL HAFIDI Naima Pédiatrie
Pr. EL KHARRAS Abdennasser* Radiologie
Pr. EL MAZOUZ Samir Chirurgie Plastique et Réparatrice
Pr. EL SAYEGH Hachem Urologie
Pr. ERRABIH Ikram Gastro-Entérologie
Pr. LAMALMI Najat Anatomie Pathologique
Pr. MOSADIK Ahlam Anesthésie Réanimation
Pr. MOUJAHID Mountassir* Chirurgie Générale
Pr. NAZIH Mouna* Hématologie
Pr. ZOUAIDIA Fouad Anatomie Pathologique Decembre 2010
Pr. ZNATI Kaoutar Anatomie Pathologique
Mai 2012
Pr. AMRANI Abdelouahed Chirurgie pédiatrique Pr. ABOUELALAA Khalil * Anesthésie Réanimation Pr. BENCHEBBA Driss * Traumatologie-orthopédie Pr. DRISSI Mohamed * Anesthésie Réanimation Pr. EL ALAOUI MHAMDI Mouna Chirurgie Générale Pr. EL OUAZZANI Hanane * Pneumophtisiologie Pr. ER-RAJI Mounir Chirurgie Pédiatrique
Pr. JAHID Ahmed Anatomie Pathologique
Pr. RAISSOUNI Maha * Cardiologie
Février 2013
Pr. AHID Samir Pharmacologie
Pr. AIT EL CADI Mina Toxicologie
Pr. AMRANI HANCHI Laila Gastro-Entérologie
Pr. AMOR Mourad Anesthésie Réanimation
Pr. AWAB Almahdi Anesthésie Réanimation
Pr. BELAYACHI Jihane Réanimation Médicale Pr. BELKHADIR Zakaria Houssain Anesthésie Réanimation Pr. BENCHEKROUN Laila Biochimie-Chimie
Pr. BENKIRANE Souad Hématologie
Pr. BENNANA Ahmed* Informatique Pharmaceutique Pr. BENSGHIR Mustapha * Anesthésie Réanimation Pr. BENYAHIA Mohammed * Néphrologie
Pr. BOUATIA Mustapha Chimie Analytique et Bromatologie Pr. BOUABID Ahmed Salim* Traumatologie orthopédie
Pr. BOUTARBOUCH Mahjouba Anatomie
Pr. CHAIB Ali * Cardiologie
Pr. DENDANE Tarek Réanimation Médicale
Pr. DINI Nouzha * Pédiatrie
Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Mohamed Ali Anesthésie Réanimation Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Najwa Radiologie
Pr. ELFATEMI Nizare Neuro-chirurgie
Pr. EL GUERROUJ Hasnae Médecine Nucléaire Pr. EL HARTI Jaouad Chimie Thérapeutique Pr. EL JAOUDI Rachid * Toxicologie
Pr. EL KABABRI Maria Pédiatrie
Pr. EL KHANNOUSSI Basma Anatomie Pathologique
Pr. EL KHLOUFI Samir Anatomie
Pr. EL KORAICHI Alae Anesthésie Réanimation Pr. EN-NOUALI Hassane * Radiologie
Pr. ERRGUIG Laila Physiologie
Pr. FIKRI Meryem Radiologie
Pr. GHFIR Imade Médecine Nucléaire
Pr. IMANE Zineb Pédiatrie
Pr. IRAQI Hind Endocrinologie et maladies métaboliques
Pr. KABBAJ Hakima Microbiologie
Pr. KADIRI Mohamed * Psychiatrie
Pr. LATIB Rachida Radiologie
Pr. MAAMAR Mouna Fatima Zahra Médecine Interne
Pr. MEDDAH Bouchra Pharmacologie
Pr. MELHAOUI Adyl Neuro-chirurgie
Pr. MRABTI Hind Oncologie Médicale
Pr. NEJJARI Rachid Pharmacognosie
Pr. OUBEJJA Houda Chirugie Pédiatrique
Pr. OUKABLI Mohamed * Anatomie Pathologique
Pr. RAHALI Younes Pharmacie Galénique Vice-Doyen à la Pharmacie
Pr. RATBI Ilham Génétique
Pr. RAHMANI Mounia Neurologie
Pr. REDA Karim * Ophtalmologie
Pr. REGRAGUI Wafa Neurologie
Pr. RKAIN Hanan Physiologie
Pr. ROSTOM Samira Rhumatologie
Pr. ROUAS Lamiaa Anatomie Pathologique
Pr. ROUIBAA Fedoua * Gastro-Entérologie
Pr SALIHOUN Mouna Gastro-Entérologie
Pr. SAYAH Rochde Chirurgie Cardio-Vasculaire Pr. SEDDIK Hassan * Gastro-Entérologie
Pr. ZERHOUNI Hicham Chirurgie Pédiatrique
Pr. ZINE Ali * Traumatologie Orthopédie
AVRIL 2013
Pr. EL KHATIB MOHAMED KARIM * Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale MARS 2014
Pr. ACHIR Abdellah Chirurgie Thoracique Pr. BENCHAKROUN Mohammed * Traumatologie- Orthopédie Pr. BOUCHIKH Mohammed Chirurgie Thoracique
Pr. EL KABBAJ Driss * Néphrologie
Pr. EL MACHTANI IDRISSI Samira * Biochimie-Chimie
Pr. HARDIZI Houyam Histologie- Embryologie-Cytogénétique
Pr. HASSANI Amale * Pédiatrie
Pr. HERRAK Laila Pneumologie
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Pr. JEAIDI Anass * Hématologie Biologique * Enseignants Militaires
Pr. KOUACH Jaouad* Génycologie-Obstétrique Pr. LEMNOUER Abdelhay* Microbiologie
Pr. MAKRAM Sanaa * Pharmacologie
Pr. OULAHYANE Rachid* Chirurgie Pédiatrique Pr. RHISSASSI Mohamed Jaafar CCV
Pr. SEKKACH Youssef* Médecine Interne
Pr. TAZI MOUKHA Zakia Génécologie-Obstétrique DECEMBRE 2014
Pr. ABILKACEM Rachid* Pédiatrie
Pr. AIT BOUGHIMA Fadila Médecine Légale
Pr. BEKKALI Hicham * Anesthésie-Réanimation Pr. BENAZZOU Salma Chirurgie Maxillo-Faciale Pr. BOUABDELLAH Mounya Biochimie-Chimie
Pr. BOUCHRIK Mourad* Parasitologie
Pr. DERRAJI Soufiane* Pharmacie Clinique
Pr. DOBLALI Taoufik Microbiologie
Pr. EL AYOUBI EL IDRISSI Ali Anatomie
Pr. EL GHADBANE Abdedaim Hatim* Anesthésie-Réanimation Pr. EL MARJANY Mohammed* Radiothérapie
Pr. FEJJAL Nawfal Chirurgie Réparatrice et Plastique
Pr. JAHIDI Mohamed* O.R.L
Pr. LAKHAL Zouhair* Cardiologie
Pr. OUDGHIRI NEZHA Anesthésie-Réanimation Pr. RAMI Mohamed Chirurgie Pédiatrique
Pr. SABIR Maria Psychiatrie
Pr. SBAI IDRISSI Karim* Médecine préventive, santé publique et Hyg. AOUT 2015
Pr. MEZIANE Meryem Dermatologie
Pr. TAHIRI Latifa Rhumatologie
PROFESSEURS AGREGES :
JANVIER 2016
Pr. BENKABBOU Amine Chirurgie Générale
Pr. EL ASRI Fouad* Ophtalmologie
Pr. ERRAMI Noureddine* O.R.L
Pr. NITASSI Sophia O.R.L
JUIN 2017
Pr. ABBI Rachid* Microbiologie
Pr. ASFALOU Ilyasse* Cardiologie
Pr. BOUAYTI El Arbi* Médecine préventive, santé publique et Hyg.
Pr. BOUTAYEB Saber Oncologie Médicale
Pr. EL GHISSASSI Ibrahim Oncologie Médicale
Pr. HAFIDI Jawad Anatomie
Pr. OURAINI Saloua* O.R.L
Pr. RAZINE Rachid Médecine préventive, santé publique et Hyg.
Pr. ZRARA Abdelhamid* Immunologie
NOVEMBRE 2018
Pr. AMELLAL Mina Anatomie
Pr. SOULY Karim Microbiologie
Pr. TAHRI Rajae Histologie-Embryologie-Cytogénétique NOVEMBRE 2019
Pr. AATIF Taoufiq * Néphrologie
Pr. ACHBOUK Abdelhafid * Chirurgie Réparatrice et Plastique Pr. ANDALOUSSI SAGHIR Khalid * Radiothérapie
Pr. BABA HABIB Moulay Abdellah * Gynécologie-obstétrique
Pr. BASSIR RIDA ALLAH Anatomie
Pr. BOUATTAR TARIK Néphrologie
Pr. BOUFETTAL MONSEF Anatomie
Pr. BOUCHENTOUF Sidi Mohammed * Chirurgie Générale Pr. BOUZELMAT Hicham * Cardiologie
Pr. BOUKHRIS Jalal * Traumatologie-orthopédie Pr. CHAFRY Bouchaib * Traumatologie-orthopédie Pr. CHAHDI Hafsa * Anatolmie Pathologique Pr. CHERIF EL ASRI Abad * Neurochirugie
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Pr. DOGHMI Nawfal * Anesthésie-réanimation Pr. ELALAOUI Sidi-Yassir Pharmacie Galénique Pr. EL ANNAZ Hicham * Virologie
Pr. EL HASSANI Moulay EL Mehdi * Gynécologie-obstétrique Pr. EL HJOUJI Aabderrahman * Chirurgie Générale Pr. EL KAOUI Hakim * Chirurgie Générale Pr. EL WALI Abderrahman * Anesthésie-réanimation
Pr. EN-NAFAA Issam * Radiologie
Pr. HAMAMA Jalal * Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale
Pr. HEMMAOUI Bouchaib * O.R.L
Pr. HJIRA Naoufal * Dermatologie
Pr. JIRA Mohamed * Médecine Interne
Pr. JNIENE Asmaa Physiologie
Pr. LARAQUI Hicham * Chirurgie Générale Pr. MAHFOUD Tarik * Oncologie Médicale
Pr. MEZIANE Mohammed * Anesthésie-réanimation Pr. MOUTAKI ALLAH Younes * Chirurgie Cardio-vasculaire
Pr. MOUZARI Yassine * Ophtalmologie
Pr. NAOUI Hafida * Parasitologie-Mycologie
Pr. OBTEL Majdouline Médecine préventive, santé publique et Hyg. Pr. OURRAI Abdelhakim * Pédiatrie
Pr. SAOUAB Rachida * Radiologie
Pr. SBITTI Yassir * Oncologie Médicale Pr. ZADDOUG Omar * Traumatologie Orthopédie Pr. ZIDOUH Saad * Anesthésie-réanimation
2 - ENSEIGNANTS-CHERCHEURS SCIENTIFIQUES 4. PROFESSEURS/Prs. HABILITES
Pr. ABOUDRAR Saadia Physiologie
Pr. ALAMI OUHABI Naima Biochimie-chimie
Pr. ALAOUI KATIM Pharmacologie
Pr. ALAOUI SLIMANI Lalla Naïma Histologie-Embryologie
Pr. ANSAR M’hammed Chimie Organique et Pharmacie Chimique Pr .BARKIYOU Malika Histologie-Embryologie
Pr. BOUHOUCHE Ahmed Génétique Humaine
Pr. BOUKLOUZE Abdelaziz Applications Pharmaceutiques Pr. CHAHED OUAZZANI Lalla Chadia Biochimie-chimie
Pr. DAKKA Taoufiq Physiologie
Pr. FAOUZI Moulay El Abbes Pharmacologie
Pr. IBRAHIMI Azeddine Biologie moléculaire/Biotechnologie Pr. KHANFRI Jamal Eddine Biologie
Pr. OULAD BOUYAHYA IDRISSI Med Chimie Organique
Pr. REDHA Ahlam Chimie
Pr. TOUATI Driss Pharmacognosie
Pr. YAGOUBI Maamar Environnement,Eau et Hygiène
Pr. ZAHIDI Ahmed Pharmacologie
Mise à jour le 11/06/2020 KHALED Abdellah
Chef du Service des Ressources Humaines FMPR
Je dédie cette thèse à…
Allah Le Tout Puissant
Louange à Dieu, qui m’a permis de réaliser ce travail, et de voir ce jour tant
attendu
A mes très chers parents,
Mes remerciements les plus sincères à mes parents BERAHAL Essadia et
BELABDA M’barek
pour avoir toujours été à mes côtés.
Aucune dédicace, aucune phrase ne saurait être assez éloquente pour exprimer le
grand amour et le respect que je vous porte.
C’est grâce à vos sacrifices que je suis là aujourd’hui, sans vos prières, vos
conseils, et votre dévouement, je n'aurais pu surmonter le stress de ces années
d'études.
Puisse Dieu, vous préserver santé, bonheur, et longue vie.
Merci, pour tout, Je vous dois tout.
Je t'aime PAPA
Je t'aime Maman
A toute la famille,
Veuillez retrouver en ce modeste travail l’expression de ma gratitude et mon
amour.
Que Dieu vous garde
A mes très chers amis
En souvenirs de notre forte et sincère amitié et des moments de joie inoubliables
que nous avons passés ensemble.
En témoignage de profond attachement qui nous unit,
À tous ceux qui ont contribué de près ou de loin à
l'élaboration de ce travail :
Dr ATTJIOUI Houda, Dr BELABDA Tarik, Dr BOUAZZAOUI Karim,
Dr GUEIT Anouar, M.HAMRAOUI Hicham, M.KHAYA Mostafa
Mes plus vifs remerciements pour vos encouragements et votre soutien,
Vos conseils m'ont toujours aidé à parcourir ce chemin.
En témoignage de toute ma reconnaissance, et ma gratitude
Je vous dédie ce modeste travail.
À Notre maître et président de jury
Monsieur AHID Samir
Professeur de Pharmacologie
En présidant ce jury, Nous vous remercions pour l’honneur que vous nous
faites
Vos qualités humaines et professionnelles sont d’une grande admiration.
Nous voudrions vous transmettre, à travers ce modeste travail,
À Notre maître et Rapporteur de thèse
Monsieur BOUATIA Mustapha
Professeur de Chimie Analytique et Bromatologie
Merci pour avoir accepté d'encadrer ce modeste travail.
Votre modestie, votre disponibilité complète, votre altruisme, vos
encouragements représentent le meilleur modèle que nous serons heureux
de suivre.
Veuillez accepter ici, Cher Professeur l'expression de notre grande
reconnaissance et de notre gratitude.
À Notre Maître et Juge de Thèse
Monsieur NEJJARI Rachid
Professeur de Pharmacognosie
Je vous remercie chaleureusement de l’honneur que vous me faites en
acceptant de siéger parmi les jurys de thèse.
Nous tenons à vous rendre hommage pour vos compétences
professionnelles et la qualité de votre enseignement.
Que cette thèse soit le témoignage de notre sincère respect.
À Notre Maître et Juge de Thèse
Monsieur EL KARBANE Miloud
Professeur de Chimie Analytique et Bromatologie
C’est pour nous un grand honneur et un grand privilège de vous avoir
dans ce jury de thèse.
Votre clairvoyance, votre compétence, et votre rigueur sont autant de
valeurs qui nous inspirent toujours.
Je vous prie de trouver, Cher Professeur, dans ce modeste travail
l’assurance de ma profonde reconnaissance et l’expression de mes
ALAT : Alanine aminotransférase
AMM : Autorisation de mise sur le marché
ASAT : Aspartate aminotransférase
AT : Atorvastatine
BPL : Bonnes Pratiques du laboratoire
CG-SM : Chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse
CL : Chromatographie liquide
Cmax : Concentration maximale
Cp : Comprimé
CT : Cholestérol total
CTD : Common Technical Document
CV : Coefficient de variance
C-VLDL : Cholestérol des lipoprotéines de très faible densité
DMF : Drug master file
DMP : Direction du Médicament et de la Pharmacie
FDA : Food and Drug Administration
FI : Fidélité intermédiaire
Grade AR : Grade analytical reagent
HDL-C : Cholestérol des lipoprotéines de haute densité
HMG-CoA : 3-hydroxy-3-méthylglutaryl-coenzyme A
HPLC : Chromatographie en phase liquide à haute performance
IC : Intervalle de confiance
ICH : International Conference on Harmonisation
IDL : Lipoprotéines de densité intermédiaire
ISO : International Organization for Standardization
LDL : Low density lipoprotein
Mg : Milligramme
Milli-Q : Millipore corporation
mL : Millilitre
PA : Principe actif.
Ppm : Partie par million
RP-HPLC : Chromatographie liquide de haute performance en phase inverse
SA : Substance active
SCR : Standard chimique de référence
SFSTP : Société française des sciences et techniques pharmaceutiques
SM : Spectrométrie de masse
STD : Standard
TG : Triglycéride
THF : Tétrahydrofurane
Tmax : Temps maximal
TR : Temps de rétention.
USP : Pharmacopée américaine
Liste des figures
Figure 1 : Structure du cholestérol ...6 Figure 2 : Structure de la compactine ...7 Figure 3 : Compactine et autres statines commercialisées (analogues de compactine) ...10 Figure 4 : Structure développée de la molécule de l’Atorvastatine calcique trihydratée. ...15 Figure 5 : Biosynthèse du cholestérol et mécanisme d’action des statines ...17 Figure 6 : Cycle de vie d’une méthode d’analyse ...25 Figure 7 : Les critères de la validation analytique d’une méthode d’analyse ...26 Figure 8 : Résultats du test de spécificité ...41 Figure 9 : Courbe de régression linéaire ...45 Figure 10 : Graphique des résidus ...46
Liste des tableaux
Tableau I : Spécialités pharmaceutiques (Cps) des statines disponibles au Maroc ...11 Tableau II : Solubilité en fonction de différentes gammes de pH ...14 Tableau III : Conditions chromatographiques ...34 Tableau IV : Les paramètres de validation de la méthode analytique de dosage ...35 Tableau V : Protocole de validation et critères d’acceptation par paramètre ...35 Tableau VI : Critères de conformité du système ...38 Tableau VII : Résultats de la linéarité du standard d’atorvastatine ...43 Tableau VIII : Résultats de l’analyse des résidus ...45 Tableau IX : Récapitulatif des résultats ...46 Tableau X : Résultats du test de l’exactitude du dosage de l’atorvastatine...48 Tableau XI : Résultats du test de répétabilité du dosage de l’atorvastatine ...50 Tableau XII : Résultats du test de Fidélité 2 du dosage de l’atorvastatine ...51 Tableau XIII : Résultats du test de Fidélité intermédiaire ...52 Tableau XIV : Paramètres modifiés pour le test de robustesse ...54 Tableau XV : Résultats du test de robustesse de la méthode de dosage de l’atorvastatine...54 Tableau XVI : Conformité de système de chaque analyse...55 Tableau XVII : Méthodes de dosage de l’Atorvastatine trouvées dans la littérature ...57 Tableau XVIII : Comparaison des réactifs et solutions des différentes méthodes d’analyse trouvées dans la littérature avec notre étude ...58 Tableau XIX : Étude comparative des conditions chromatographiques de dosage de l’Atorvastatine par HPLC ...59
Tableau XX : Comparaison des paramètres de spécificité et linéarité de notre étude avec ceux de la littérature...62 Tableau XXI : Comparaison des paramètres d’exactitude, de précision et robustesse de notre étude avec ceux de la littérature ...63
Introduction ...1 Partie bibliographique ...5 I. Les statines : ...6 1. Synthèse du cholestérol ...6 2. Historique des statines : ...7 II. Propriétés de l’ATORVASTATINE : ... 14 1. Propriétés physico-chimiques ... 14 1.1. Aspect ... 14 1.2. Solubilité ... 14 1.3. Structure isomérie et stabilité... 15 2. Propriétés pharmacologiques ... 16 2.1. Propriétés pharmacodynamiques : ... 16 2.2. Propriétés pharmacocinétiques: ... 18 2.2.1. Absorption :... 18 2.2.2. Distribution : ... 18 2.2.3. Biotransformation : ... 18 2.2.4. Elimination : ... 18 2.3. Indications :... 19 2.4. Interactions médicamenteuses : ... 19 2.5. Interactions avec les aliments : ... 21 2.6. Effets indésirables : ... 21 2.7. Contre-indications : ... 22 III. Validation d’une méthode d’analyse ... 23 1. Définition : ... 23 2. Objectifs : ... 23 3. Domaines d’application de la validation analytique : ... 23 4. Contexte réglementaire : ... 23 5. Cycle de vie d’une méthode analytique : ... 24 6. Les critères de validation d’une procédure analytique : ... 26
6.1. Spécificité ... 27 6.2. Linéarité ... 27 6.3. Exactitude (Justesse) ... 27 6.4. Fidélité (Précision) : ICH-SFSTP ... 27 6.4.1. Répétabilité ... 28 6.4.2. Précision intermédiaire ... 28 6.4.3. Reproductibilité ... 28 6.4.4. Robustesse : ICH-SFSTP ... 28 6.5. Limite de détection : ... 29 6.6. Limite de quantification :... 29 IV. Chromatographie en phase liquide à haute performance... 30 1. Principe ... 30 2. Appareillage ... 30 Partie pratique... 32 I. Introduction et objectifs ... 33 II. Matériels et méthodes ... 34 1. Description de la méthode d’analyse ... 34 1.1. Equipement ... 34 1.2. Réactifs et solutions... 34 1.3. Conditions Chromatographiques ... 34 1.4. Les paramètres de validation ... 35 1.5. Protocole de validation par caractéristiques ... 35 2. Solution standard et préparation d’échantillons : ... 37 3. Système de suitabilité : ... 38 4. Formule de calcul : ... 39 III. Résultats ... 40 1. Spécificité ... 40 2. Linéarité ... 42 3. Exactitude ... 47 4. Fidélité ... 49
4.1. Répétabilité ... 49 4.2. Fidélité intermédiaire ... 51 5. Robustesse ... 53 6. Système de suitabilité ... 55 IV. Discussion ... 56 V. Conclusion ... 65 Conclusion ... 66 Résumés ... 68 Références ... 72
1
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Depuis 1985, la validation analytique a toujours été un sujet qui intéresse les industries pharmaceutiques, aux Etats-Unis d'abord, puis en Europe à partir de 1990. En terme de qualité, les revendications de l'industrie pharmaceutique sont de plus en plus élevées, et la validation des méthodes analytiques est devenue un concept de base dans les laboratoires de contrôle qualité de l'industrie pharmaceutique.
La validation analytique accompagne la méthode d'analyse, dès la phase de développement analytique jusqu’à la revalidation si nécessaire, au cours de sa mise en œuvre, et pendant son évolution. L'efficacité et les limites d'une méthode d'analyse seront redéfinies et réévaluées d'une façon continue.
Dans le contexte réglementaire, elle appartient au module 3 du dossier CTD d'autorisation de mise sur le marché d'un produit pharmaceutique [1]. En effet, en 16 juillet 2003, une validation complète est devenue obligatoire avec la méthode analytique décrite dans le dossier d'AMM au Maroc, selon la circulaire du ministère de la Santé N°49DMP/00 [2].
De nombreux guides réglementaires internationaux ont défini la validation comme l'ICH, FDA, ISO, et les BPL [4]. À l'échelle nationale, les deux guides les plus adoptés sont ceux de la Société Française des Sciences Techniques et Pharmaceutiques (SFSTP), et celui du Conseil International d'Harmonisation (ICH) [3].
La validation analytique doit faire partie du processus de validation des moyens et outils d'analyse, en considérant la qualification de l'appareillage, les circonstances d'utilisation de la méthode, le contrôle de ses performances tout au long de son utilisation que l'on doit engendrer une validation [1]. La validation donc s'applique aux différentes méthodes de contrôle, y compris le développement galénique, le contrôle de la matière première, le contrôle en cours de fabrication, les essais de stabilité, le contrôle des produits intermédiaires et finis [3].
3
La validation analytique repose sur une analyse statistique basée sur des critères aboutissant à des méthodes analytiques qui permettent de fournir des résultats crédibles, pour cela, plusieurs documents ont été publiés sous forme de textes réglementaires, de guides, ou de normes pour essayer de caractériser des procédures de validation et de calcul de l’incertitude [1].
Un taux élevé de cholestérol, associé ou non à un taux élevé de triglycérides, donne l’hyperlipidémie qui est largement répandue dans la population mondiale [5]. Elle est classée deuxième dans la liste des dix maladies chroniques les plus courantes dans la planète. Et présente un important facteur de risque cardiovasculaire [6]. Le cholestérol a fait l'objet de plusieurs recherches par les médecins et les scientifiques depuis qu'il a été isolé pour la première fois en 1784 dans les calculs biliaires. Treize prix Nobel ont été attribués à des scientifiques qui ont fait des études sur le cholestérol durant leur carrière.
Découverts à la fin des années 70, les inhibiteurs de la 3-hydroxy-methylglytaryl coenzyme A réductase, ou statines, se sont révélées être de meilleurs hypocholestérolémiants [5].
Le but de notre étude est de valider une méthode de dosage d'un produit fini contenant l'Atorvastatine Calcique 80 mg. Au Maroc, une dizaine de génériques de statines sont commercialisés aujourd’hui notamment à base de l’Atorvastatine [7].
Ce travail met au point une nouvelle méthode analytique qui permet le dosage d'Atorvastatine dans une forme pharmaceutique solide, par chromatographie en phase liquide à haute performance, pour l’adapter à l’utilisation en routine. Il a été réalisé dans le laboratoire de contrôle qualité au sein de l’industrie pharmaceutique Pharmaceutical Institute désigné sous l’abréviation PHI, Situé à route OUED AKREUCH , région d’OUM AZZA-AIN EL AOUDA à proximité de RABAT– MAROC.
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PHI a été créée en 1988, et devenue une industrie performante grâce à ses infrastructures et équipements qui respectent les normes de l’industrie pharmaceutique internationale. 60 % de leur activité principale concerne le développement d’une gamme générique fabriquée localement [8].
Notre travail est réparti en deux grandes parties :
Une partie bibliographique qui comprend des généralités sur le cholestérol, les statines et la validation analytique.
Une partie pratique qui traite le cas de la validation d’une méthode de dosage de l’atorvastatine dans les comprimés d’atorvastatine calcique 80 mg.
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I. Les statines :
1. Synthèse du cholestérol
Le cholestérol est l'un des lipides les plus intéressants dans la nature et qui se trouve à des fortes concentrations dans les membranes des cellules des animaux.
Le cholestérol joue des rôles biologiques capitaux, en tant que constituant des membranes cellulaires et précurseur des hormones stéroïdes et des vitamines [9].
Figure 1 : Structure du cholestérol [10]
L’apport exogène provient de l’alimentation, et l’apport endogène est assuré par la biosynthèse de novo, majoritairement par le foie et l’intestin.
Le cholestérol contient une chaîne hydrocarbonée fixée sur le C-17 (en 17b), un groupe hydroxyle dans le C-3 (en 3b) et une double liaison Δ5, donc c'est une molécule amphiphile, avec un core hydrocarboné non-polaire, une tête polaire, le noyau stéroïde, le groupe hydroxyle, et la queue hydrocarbonée [11].
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2. Historique des statines :
Découverte de la compactine :
En 1972, le biochimiste japonais Akira Endo, chercheur au sein de la compagnie pharmaceutique Sankyo à Tokyo a découvert la première statine. Il s’agit de la compactine (figure 2).
Lors d’un séjour de deux ans à New York, il a remarqué une augmentation d’hypercholestérolémie et de cardiopathie coronaire au sein de la population américaine. Puis il a décidé d'orienter ses recherches sur les molécules à activité hypolipidémiante.
Akira Endo a souligné que la culture fongique peut produire de la pénicilline et également des substances qui inhibent la synthèse du cholestérol. Cette hypothèse est basée sur l’idée que certains microorganismes devaient produire de tels composés comme moyen de défense contre d’autres microbes nécessitants, pour leur développement des stérols [12].
Figure 2 : Structure de la compactine [13].
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En 1972, dans la culture de milliers de champignons, il isola la Citrinine, qui représente une première substance fortement inhibitrice de la HMG-CoA réductase, mais la recherche est arrêtée en raison de sa néphrotoxicité. Quelques mois plus tard, les mêmes activités ont été mises en œuvre dans un milieu de culture de la moisissure
Penicillium citrinum. Trois métabolites actifs ont été isolés par extraction par solvant,
chromatographie sur gel de silice, et cristallisation. ML-336B ou compactine ou mévastatine. Les recherches vont concerner le plus actif des trois.
L’analyse moléculaire de la compactine révèle ses analogies structurales avec le HMG-CoA, substrat de la HMG-CoA réductase, nous permet de dire que la compactine est la première statine, d’origine microbienne et spécifique de l’HMG-CoA réductase.
En 1974, les études chez l'animal commencèrent, avec une efficacité démontrée chez le singe, le chien et le poulet [5].
Dès 1978, les premières études cliniques ont commencé, une efficacité de traitement remarquable avec une diminution du taux de cholestérol plasmatique d'environ 30 %, sans effets secondaires notables chez six patients atteints d’hypercholestérolémie familiale et trois patients atteints d’hyperlipidémie mixte. Alors, vers la fin de l'année 1978, la compagnie Sankyo adopte un développement clinique de la compactine, conduit à un bon profil de tolérance avec une efficacité remarquable dans le traitement de l’hypercholestérolémie sévère, mais au milieu de l’année 1980, la plupart de ces essais cliniques ont été suspendus, à cause des effets toxiques chez certains chiens à des doses plus élevées dans une étude de toxicité à long terme, avec une posologie jusqu’à 200 fois supérieure à celle utilisée chez l’homme [14].
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Découverte de la lovastatine :
À la fin de l’année 1970, de nombreuses sociétés pharmaceutiques ont commencé à rechercher une autre statine. Le laboratoire Merck en 1976 a signé un accord de confidentialité avec la compagnie Sankyo pour obtenir des échantillons de compactine et des données expérimentales confidentielles sous la direction d'Alfred Albert. En 1979, ils ont isolé une statine très similaire à la compactine dans sa structure chimique nommée la mévinoline isolée du fungus Aspergillus terreus. Pendant ce temps, une autre statine a été isolée à partir des cultures de Monascus ruber, la monacoline K. Il s'avère que ces deux composés sont la même molécule qui a été renommée lovastatine.
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En avril 1980, Merck a commencé les études cliniques préliminaires de la lovastatine, proche structuralement de la compactine. 5 mois plus tard, et à cause des rumeurs concernant le potentiel carcinogène de la molécule chez les chiens, le projet a été stoppé. Mais ce risque n’a jamais été confirmé chez l’homme. L'efficacité démontrée de la compactine dans le traitement d’hypercholestérolémie sévère, à très haut risque cardio-vasculaire, va conduire Merck à faire des essais cliniques à grande échelle et études de toxicité à long terme pour la lovalostatine, les résultats montrent toujours la grande efficacité de la molécule alors qu’elle va devenir la première statine commercialisée dans le monde en 1987, après l’obtention de l’autorisation de mise sur le marché donnée par la FDA (Food and Drug Administration) [5].
Le tableau I ci-dessous présente les spécialités contenant les statines commercialisées au Maroc :
Tableau I : Spécialités pharmaceutiques (Cps) des statines disponibles au Maroc [7]
DCI Noms
commerciaux Dosage
Prix public de vente (PPV) en dhs (boite de 28-30) Atorvastatine COSTAL 10 mg 20mg 40mg 57.80 99.00 155.90 GENSTAT 10 mg 20mg 40mg 55.20 119.00 148.90 LD-NOR 10 mg 20mg 40mg 57.80 99.00 155.90 LIPITORVA 80 mg 74.80 (boite de 14) LIPTORVA 10 mg 20 mg 55.20 101.80
12 40 mg 80 mg 133.60 219.00 (boite de 56) STANORM 10 mg 20 mg 40 mg 80 mg 57.80 106.70 155.90 206.00 TAHOR 10 mg 20 mg 40 mg 80 mg 79.00 103.40 159.90 208.00 TORVA 10 mg 20 mg 57.80 106.70 Rosuvastatine CRESTOR 5 mg 10 mg 20 mg 196.20 185.70 261.00 DECRESTIN 5 mg 10 mg 20 mg 114.50 157.10 255.00 NOLIP 10 mg 20 mg 157.10 254.00 ROSUCAL 5 mg 10 mg 20 mg 106.50 147.40 237.00 ROSUSTAR 10mg 20 mg 157.70 244.00 ROSUVAS® SUN 10 mg 20 mg 157.80 255.00 ROZAT 10 mg 20 mg 147.40 244.00 Fluvastatine LESCOL 20 mg 225.30
13 40 mg 289.30 LESCOL LP 80 mg 208.00 Pravastatine COLENOR 20 mg 40 mg 99.00 159.00 PERLO 20 mg 157.70 ELISOR 20 mg 414.90 PRAVATOR 20 mg 99.10 Simvastatine CHOLESTIN 10 mg 20 mg 40 mg 85.00 91.00 159.60 CIVASTINE 10 mg 20 mg 40 mg 70.00 130.00 217.00 LIPISTAT 10 mg 20 mg 40 mg 75.00 91.00 159.60 NOCOL 20 mg 40 mg 97.60 171.00 ZOCOR 20 mg 40 mg 116.70 135.60
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II. Propriétés de l’ATORVASTATINE :
1. Propriétés physico-chimiques
Actuellement, l’Atorvastatine est décrite dans deux monographies en vigueur qui sont la pharmacopée américaine USP 41 et la pharmacopée européenne 10édition [15-16]. Dans notre étude, on rapporte les spécifications et les protocoles analytiques recommandés par ces monographies et le DMF du fabricant..
1.1. Aspect
Poudre cristalline de couleur blanche à blanc cassé, exempte de matières étrangères visibles.
1.2. Solubilité
L’Atorvastatine est facilement soluble dans le méthanol et insoluble dans les solutions aqueuses de pH 4 et moins.
Les données de solubilité à différentes gammes de pH à température ambiante sont présentées dans le tableau ci-dessous.
Tableau II : Solubilité en fonction de différentes gammes de pH
Série N° pH diluant Concentration en mg/mL
1 1,0 0,0001 2 4,0 0,0004 3 5,5 0,0534 4 6,5 0,1141 5 7,5 0,1514 6 10,0 0,1755
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1.3. Structure isomérie et stabilité
Structure isomérie :
La structure développée de cette molécule est présentée par la figure 4. La fraction chimique de l'Atorvastatine calcique a deux carbones asymétriques. Le procédé de fabrication de l'Atorvastatine calcique 80 mg utilise l'isomère RR.
Figure 4 : Structure développée de la molécule de l’Atorvastatine calcique trihydratée [15].
Sa formule chimique est C66H68CaF2N4O10Ca.3H2O avec un poids moléculaire de
1209,4 g/mol. L’Atorvastatine calcique est connue par son nom chimique qui est :
[R-(R*,R*)]-2-(4-Fluorophenyl)-β,δ-dihydroxy-5-(1-methyethyl)-3-phenyl-4-
[(phenylamino)carbonyl]-111-pyrrole-1-heptanoic acid-Calcium salt (2:1)
Stabilité :
L'Atorvastatine doit être conservée à une température ambiante contrôlée (entre 15 °C et 30 ºC) et protégée de l’humidité, de la chaleur et de la lumière, donc stockée dans un contenant fermé hermétiquement.
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2. Propriétés pharmacologiques
L’Atorvastatine représente un inhibiteur compétitif de l'HMG-CoA (3-hydroxy-3-méthylglutaryl-coenzyme A) réductase, qui catalyse la transformation de l’HMG-CoA en Mévalonate (étape cinétiquement limitante dans la synthèse intracellulaire du cholestérol). Alors elle va diminuer la synthèse du cholestérol par le foie, en augmentant également le nombre de récepteurs LDL à la surface des cellules hépatiques.
L'Atorvastatine abaisse le cholestérol total (CT), le taux de cholestérol LDL, elle réduit également le taux de C-VLDL (cholestérol lié aux lipoprotéines de très basse densité), de TG (triglycérides), d'Apolipoprotéine B, et de lipoprotéines de densité intermédiaire (IDL), tout en augmentant le taux de cholestérol des lipoprotéines de haute densité (HDL-C) [17].
2.1. Propriétés pharmacodynamiques :
L’Atorvastatine comme les autres molécules de sa classe pharmacothérapeutique représente un inhibiteur sélectif et compétitif de l’HMG-CoA réductase, enzyme clé qui gère le contrôle du taux de biotransformation de la 3-hydroxy-3-méthylglutaryl-coenzyme A en Mévalonate, un précurseur de la biosynthèse du cholestérol. Ce qui va impliquer une réduction du taux de cholestérol plasmatique, l’Atorvastatine augmente également le nombre des récepteurs des lipoprotéines de basse densité LDL, l’Atorvastatine peut aussi réduire le taux du cholestérol plasmatique en diminuant la production hépatique du VLDL et du cholestérol LDL [18].
17
18
2.2. Propriétés pharmacocinétiques: 2.2.1. Absorption :
L'Atorvastatine est facilement absorbée après administration par voie orale, plusieurs doses quotidiennes de 2,5 à 80 mg donnent une concentration maximum plasmatique à l'état d'équilibre de 1,95 - 252 mg/ml après 1 à 2 h. L'aire sous la courbe des concentrations augmente proportionnellement avec la dose d'Atorvastatine, donc l'absorption est dose-dépendante. La faible biodisponibilité systémique est causée par l'effet de premier passage hépatique et/ou clairance pré-systémique dans la muqueuse gastro-intestinale [20].
L’Atorvastatine a une biodisponibilité absolue de 12 % [18].
2.2.2. Distribution :
L’Atorvastatine a un volume de répartition moyen de 381 litres, avec une forte liaison aux protéines plasmatiques qui est ≥ 98 % [20].
2.2.3. Biotransformation :
L'Atorvastatine est fortement métabolisée en dérivés parahydroxylés, orthohydroxylés, et en autres produits de bêta-oxydation.
70 % de l'activité circulante inhibitrice de l'HMG-CoA réductase est due aux métabolites actifs de l’Atorvastatine [18].
2.2.4. Elimination :
L'Atorvastatine et ses métabolites sont principalement éliminés dans la bile. Chez l'homme la demi-vie d'excrétion moyenne de l'Atorvastatine est d'environ 14 h, et à cause de la contribution des métabolites actifs, la demi-vie de l'activité d'inhibition de l'HMG-CoA réductase est de 20 à 30 heures.
Après administration orale, une dose inférieure à 2 % d'Atorvastatine est excrétée dans l'urine [18].
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2.3. Indications :
L'Atorvastatine calcique est utilisée sous forme d'un complément alimentaire lors d'un régime afin de réduire la surélévation des taux cholestérol total (CT), de LDL-cholestérol (LDL-C), d'apolipoprotéine B et de triglycérides. Et de même pour développer le taux de C-HDL chez les patients atteints de dyslipidémie mixte et d'hypercholestérolémie primaire.
L'Atorvastatine est aussi indiquée pour traiter les patients présentant des taux sériques élevés de triglycérides, et pour réduire le taux du cholestérol total et LDL-C dans le cas d'une hypercholestérolémie familiale homozygote.
Elle est donnée également pour les patients atteints de dysbétalipoprotéinémie primaire, qui ne répondent pas bien au régime [18].
2.4. Interactions médicamenteuses :
Contraceptifs oraux :
L’Atorvastatine peut interagir avec les contraceptifs oraux contenant de la Noréthindrone et de l'Ethinylestradiol, la prise concomitante de l'Atorvastatine avec ces molécules induit une augmentation de leurs concentrations plasmatiques [18].
Erythromycine :
L'Erythromycine est un inhibiteur du cytochrome P450 3A4, l'administration de 500 mg d'Erythromycine quatre fois quotidiennement avec l'Atorvastatine entraîne une amélioration de 33 % de l'exposition totale à l'Atorvastatine [18].
Antiacide :
L'association d'un antiacide et d'Atorvastatine peut engendrer un taux de diminution des concentrations plasmatiques d'Atorvastatine d'environ 34 %. La réduction du taux des LDL-C n'est cependant pas changée [18].
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Colestipol :
Une co-administration d'Atorvastatine et du Colestipol entraîne une diminution remarquable d'environ 25 % des concentrations plasmatiques de l'Atorvastatine et de ses métabolites actifs [18].
Acide fusidique :
Des rhabdomyolyses ont été observées lors d'une association de l'Atorvarstatine et l'Acide Fusidique [21].
Inhibiteurs de protéases :
L'administration concomitante d'Atorvastatine et d'inhibiteurs de protéases tels que le Saquinavir, le Ritonavir, et le Nelfinavir a entraîné une amélioration des concentrations plasmatiques d'Atorvastatine [21].
Itraconazole :
Lors d’une co-administration d’Atorvastatine et L’Itraconazonle, une forte exposition à l'Atorvastatine a été observée [21].
Midazolam :
La prise concomitante d'Atorvastatine et de Midazolam provoque une diminution de la clairance plasmatique totale du Midazolam sans changement de volume de distribution [21].
Digoxine:
L'utilisation de Digoxine avec de 80 mg d'Atorvastatine par jour augmente d'environ 20 % les concentrations plasmatiques de Digoxine et ceci est peut-être dû à l'inhibition de la protéine de transport transmembranaire ou glycoprotéine-P [21].
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2.5. Interactions avec les aliments :
L’alimentation peut avoir un impact sur la pharmacocinétique du médicament, le taux d'absorption intestinale de l'Atorvastatine diminue considérablement en prenant un petit-déjeuner moyennement gras, avec un peu d'influence sur la quantité qui atteint la circulation systémique.
La concentration maximale plasmatique diminue remarquablement de 48 % et 13 % avec la prise simultanée des aliments. Un Tmax (temps nécessaire pour atteindre la Cmax) et une demi-vie d'élimination (t1/2) entre 5,9 et 32 h. Par contre en absence
d'alimentation, ces valeurs fluctuent entre 2,6 et 35,7 h.
L’administration de l'Atorvastatine avec les repas le soir, est caractérisée par une diminution du Cmax de 25 % et une augmentation du Tmax de 30 % par rapport à l'administration loin des repas.
L’absorption intestinale d'Atorvastatine est rapide après l'administration orale aux sujets qui jeûnent, ceci est dû à la haute solubilité avec un Tmax de 0,5 à 1,5 h [18].
L'Atorvastatine peut intervenir avec les furanocoumarines contenues dans le jus de pamplemousse qui va favoriser l'inhibition de leur métabolisme, la prise d'un seul verre de jus de pamplemousse a la possibilité d'inhiber l'activité CYP3A4 intestinale pendant une durée de 3 jours [22].
2.6. Effets indésirables :
Parmi les effets indésirables observés, on cite :
- Affections musculo-squelettiques et systémiques : myopathie, rhabdomyolyse, myalgie douloureuse avec une importante libération de créatine-kinase (> 2000 UI / l).
- Troubles gastro-intestinaux : constipation, dyspepsie, flatulence, douleurs abdominales, sont les plus fréquents observés.
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- Troubles hépatiques : le dysfonctionnement hépatique est caractérisé par l'augmentation du taux sérique des transaminases (ALAT et ASAT). L'hépatotoxicité liée avec l'usage d'Atorvastatine est observée dans 1 % des cas.
- Affections du système nerveux : neuropathies démyélinisantes [20].
2.7. Contre-indications :
L’utilisation de l’Atorvastatine est contre-indiquée dans les cas suivants : Une hypersensibilité vis-à-vis de l'un des composants du médicament. Les patients qui souffrent d'une affection hépatique active.
La prise d'Atorvastatine est contre-indiquée pendant la grossesse et l’allaitement et donc, les patientes en âge de procréer devraient prendre des mesures de contraception [17].
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III. Validation d’une méthode d’analyse
1. Définition :
Selon la norme ICH (International Conférence on Harmonisation), la validation d’une méthode analytique est définie comme étant une démarche critique contenant un ensemble des opérations nécessaires afin de s’assurer de la qualité, la fiabilité, et la validité d’un protocole utilisé, et ceci pour un usage précis.
2. Objectifs :
Selon l’ICH, l’objectif de la validation analytique est de prouver qu’elle correspond à l’utilisation à laquelle elle est destinée [23].
3. Domaines d’application de la validation analytique :
Au niveau européen, les différents domaines d'application de la validation analytique selon la note explicative III/844/87 en vue d'obtenir une autorisation de mise sur le marché concernent toute procédure d'analyse employée dans les différents chapitres de la documentation chimique, pharmaceutique et biologique définis par la directive 75/318/CEE, à savoir :
Le développement galénique, les contrôles en cours de fabrication, le contrôle de la matière première, le contrôle sur les produits intermédiaires de la fabrication et du produit fini, ainsi que les essais de stabilité [24].
4. Contexte réglementaire :
L’extension du principe de la validation des procédures analytiques dans les domaines d’activité où des mesures sont réalisées, a permis de mettre en œuvre des directives sur la validation des méthodes analytiques dans des publications comme les guidelines ICH, particulièrement le guideline ICH Q2(R1), le guideline publié en 2005: « Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology ». Le document donne un signe sur les données qui devraient exister dans un dossier d'enregistrement.
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Alors le guideline ICH représente une exigence réglementaire face à toute validation de méthode analytique exprimée dans un dossier d'AMM (Autorisation de Mise sur le Marché).
On trouve aussi des publications ne présentant pas des exigences réglementaires, et qui ont été formées dans le but d'aider à valider les procédures analytiques en se basant sur les recommandations réglementaires, pour avoir une AMM, comme les guides de validation analytique de la SFSTP (Société Française des Sciences et Techniques Pharmaceutiques) :
SFSTP « Guide de validation analytique – Rapport d’une commission SFSTP » en 1992.
SFSTP « Méthodes chromatographiques de dosage dans les milieux biologiques : stratégie de validation. Rapport d’une commission SFSTP » en 1997.
SFSTP « Validation des procédures analytiques quantitatives : Harmonisation des démarches » [23].
5. Cycle de vie d’une méthode analytique :
Une validation d'une méthode analytique passe par plusieurs étapes interdépendantes. L’exemple d’une méthode de dosage peut se décomposer en quatre grandes phases successives :
1- Sélection de la méthode : dans cette phase, les objectifs et les conditions opératoires initiales sont définis.
2- Mise au point de la méthode : il s'agit d'une phase de développement de la méthode sélectionnée, avec ou sans optimisation au moyen de plans d’expériences. Il est nécessaire de suivre un cheminement précis pour maîtriser la programmation des essais et les délais.
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3- Validation de la méthode : deux types de validations ont été distingués, la validation inter-laboratoire et la validation intra-laboratoire, la phase de validation peut être précédée par une phase de pré validation.
4- Usage en routine : c'est une phase de validation en routine et parfois d'une revalidation [4].
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6. Les critères de validation d’une procédure analytique :
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6.1. Spécificité
La spécificité d’une procédure analytique est sa capacité d'évaluer un analyte, en présence d'autres composés susceptibles de l’accompagner. Il s'agit de démontrer que le signal mesuré provient seulement de la substance à analyser, en se basant sur une absence d’interférences [26].
6.2. Linéarité
La linéarité d'une procédure d'analyse exprime la capacité d'une méthode à donner des résultats qui sont directement proportionnels à la concentration (quantité) introduite [27].
6.3. Exactitude (Justesse)
L’exactitude ou la justesse donne une indication sur les erreurs systématiques. Selon l’ICH, l’exactitude est la mesure de l'étroite concordance entre la valeur trouvée dans un échantillon par la méthode et la valeur qui est adoptée soit comme une valeur de référence, soit comme une valeur conventionnellement vraie.
Selon la SFSTP, l’exactitude d’une procédure analytique correspond à l’étroitesse de l’accord entre la valeur moyenne obtenue, et le résultat qui est retenu soit comme une valeur de référence acceptée, soit comme une valeur considérée comme véritable par convention, en appliquant plusieurs fois le procédé expérimental.
6.4. Fidélité (Précision) : ICH-SFSTP
La fidélité ou la précision d'une méthode analytique est définie comme le degré de dispersion entre des séries de mesures par des prises à partir d’un échantillon homogène dans des conditions prescrites. La fidélité donne une explication sur les erreurs aléatoires, elle est souvent exprimée par la variance, l’écart-type ou le coefficient de variation d’un ensemble de mesures.
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Elle peut être exécutée à trois niveaux, à savoir la répétabilité, la fidélité intermédiaire et la reproductibilité.
6.4.1. Répétabilité
La répétabilité ou précision intra-analyse se rapporte à des essais dans les mêmes conditions de réalisation, dans de courts intervalles de temps, par le même opérateur utilisant le même équipement, dans un même laboratoire.
6.4.2. Précision intermédiaire
La précision intermédiaire exprime la variabilité intra-laboratoire, les différents résultats obtenus par la même méthode en travaillant dans le même laboratoire, mais à des jours différents, en utilisant des appareils différents, avec différents opérateurs.
6.4.3. Reproductibilité
La reproductibilité exprime la fidélité en se basant sur des résultats d'études faites en collaboration par différents laboratoires, en employant des équipements différents, par des personnes différentes, dans différents laboratoires.
6.4.4. Robustesse : ICH-SFSTP
La robustesse d’une procédure analytique est une mesure de sa capacité à ne pas être affectée par une légère modification des conditions expérimentales (un ou plusieurs paramètres).
Elle donne une idée de la fiabilité de la procédure dans les conditions normales d'utilisation.
