Co-expression et caractérisation fonctionnelle d’un transporteur de lipides (une « flippase ») de la levure S. cerevisiae : l’ATPase P4 Drs2p, en complexe avec sa sous-unité associée Cdc50p

184  Download (0)

Full text

(1)

HAL Id: tel-00938337

https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00938337

Submitted on 24 Nov 2014

HAL is a multi-disciplinary open access

archive for the deposit and dissemination of

sci-entific research documents, whether they are

pub-lished or not. The documents may come from

teaching and research institutions in France or

abroad, or from public or private research centers.

L’archive ouverte pluridisciplinaire HAL, est

destinée au dépôt et à la diffusion de documents

scientifiques de niveau recherche, publiés ou non,

émanant des établissements d’enseignement et de

recherche français ou étrangers, des laboratoires

publics ou privés.

Co-expression et caractérisation fonctionnelle d’un

transporteur de lipides (une “ flippase ”) de la levure S.

cerevisiae : l’ATPase P4 Drs2p, en complexe avec sa

sous-unité associée Cdc50p

Aurore Jacquot

To cite this version:

Aurore Jacquot. Co-expression et caractérisation fonctionnelle d’un transporteur de lipides (une “

flippase ”) de la levure S. cerevisiae : l’ATPase P4 Drs2p, en complexe avec sa sous-unité associée

Cdc50p. Biochimie, Biologie Moléculaire. Université Paris Sud - Paris XI, 2012. Français. �NNT :

2012PA11T081�. �tel-00938337�

(2)

UNIVERSITE PARIS SUD

FACULTE DE MEDECINE PARIS SUD

THESE

Pour obtenir le grade de

DOCTEUR DE L’UNIVERSITE PARIS SUD

Ecole Doctorale 419 « Signalisations et réseaux intégratifs en Biologie, Bio-SigNE»

Présentée et soutenue publiquement par

Aurore JACQUOT

Le 30 novembre 2012

Co-expression et caractérisation fonctionnelle

d’un transporteur de lipides (« Flippase »)

de la levure S. cerevisiae :

l’ATPase P4 Drs2p, en complexe avec

sa sous-unité associée Cdc50p.

Directeur de thèse: M. Marc le MAIRE

Co-directeur de thèse : M. Guillaume LENOIR

JURY

Mr Oliver NÜSSE (Président du Jury)

Mme Isabelle MUS-VETEAU (Rapporteure)

Mr Patrice CATTY (Rapporteur)

Mme Sophie CRIBIER (Examinatrice)

Mme Karine MONCOQ (Examinatrice)

(3)
(4)

Remerciements

Je tiens tout d’abord à remercier Marc le Maire et Guillaume Lenoir d’avoir accepté d’être mes

directeurs de thèse. Je les remercie pour leur accueil, leur patience (en particulier pour Guillaume), leur

disponibilité, leur soutien et pour m’avoir accordé leur confiance.

Je tiens particulièrement à remercier Guillaume pour son encadrement, ses conseils et la patience dont il a

fait preuve afin de me transmettre ses méthodes de travail.

Je remercie également Philippe Champeil pour toutes les discussions passionnantes et enrichissantes que

nous avons eues. Je remercie Philippe et Cédric Montigny pour leur énorme contribution à ce travail et

leur disponibilité.

Je remercie Hassina Azouaoui et Raphaëlle Barry avec qui j’ai eu la chance de travailler pour nos

discussions, les manips réalisées ensemble et l’amitié qui a découlé de ces moments passés ensemble.

Je remercie spécialement Christine Jaxel pour son soutien, ses conseils et sa grande disponibilité.

Je remercie Manuel Garrigos, Béatrice de Foresta, Veronica Beswick, Alain Sanson, Pierre

Nédellec, Nadège Jamin, Francis Haraux et Claire Lemaire pour leur conseil et leur disponibilité.

Je remercie aussi les « jeunes » que j’ai rencontrés durant ces trois années : Cindy, Paul, Stéphanie,

Sana, Qian, Margaux, Lila, Gaëlle, Céline, Tiona, Mehdi et. Je les remercie pour leur soutien,

leur bonne humeur et leur disponibilité. J’en profite pour remercier également Pascale, Josiane et tout le

personnel administratif pour leur disponibilité afin de résoudre tous les petits problèmes que j’ai pu rencontrer.

Je tiens aussi à remercier Lisette Cohen, ma tutrice de monitorat, pour ses conseils, sa patience, sa

disponibilité et la confiance qu’elle m’a accordée concernant l’enseignement. J’en profite pour remercier

toute l’équipe pédagogique de l’Université Paris Sud avec qui j’ai eu le plaisir de travailler ainsi que les

préparatrices de TP et Martine Bouillault qui m’ont gentiment intégrée à leur table.

Je remercie Pontus Gourdon, Poul Nissen, Frank Fijalkowski, Miriam-Rose Ash et plus

particulièrement, Hanka Hennrich et Joost Holthuis pour leur collaboration au cours de ces trois années.

Je remercie les membres du Jury : Isabelle Mus-Veteau, Patrice Catty, Sophie Cribier, Karine

Moncoq et Oliver Nüsse d’avoir accepté d’évaluer ce travail. Je remercie Thierry Touze d’avoir accepté

d’être mon tuteur de thèse.

(5)

Je tiens à remercier spécialement mes parents, ma sœur, mon frère, mes grands-parents (même si

malheureusement tous ne seront pas là pour voir l’aboutissement de toutes ces années d’études), mes oncles,

tantes, cousin(e)s, Jean-Pierre, ma belle-famille ainsi que mes amies Lucie, Mélanie, Paola,

Farah, Anaïs et Julie pour leur énorme soutien depuis plusieurs années.

Enfin, je tiens à remercier du plus profond de mon cœur mon ami, Efrahdine, qui me soutient depuis de

nombreuses années et sans qui tout cela n’aurait pas été possible.

(6)

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` ) a &**+ # + K P ! " ( & + K b c b  d    , - e B F B A , 0D CB R R Y A 01 R S T U , R 1 R U f 1 C 01 R X A E CB DF 1 R @ g @ h i    ? - j E F \ CDE F V 1 R S T U , R 1 R U f   ^ Q 1 R S T U , R 1 R U f R 1 G ? 01 F C k CA 1 V 1 R CA , F R X E A C1 Y AR V 1 0DX DV 1 R   ^ Q 1 R S T U , R 1 R U f R E F C DG X 0D] Y B 1 R V , F R 01 CA , Z D\ l B R D\ Y 0, DA 1    Q 1 R S T U , R 1 R U f R E F C B _ , 01 G 1 F C DG X 0D ] Y B 1 R V , F R V 1 F E G ? A 1 Y R 1 R X , Cm E 0E _ D1 R   \ - . B _ Y 0, CDE F V 1 R S T U , R 1 R U f     N ! " n *( a ) &o $ + + " n p+ % &` K # + *) q r K +     s     t u t  v   w   t    x  y ) ( ! &+ *   x  z ! ) ( ' &+ # + % *"  ) ' +   x , - g 1 R \ A DX CDE F V Y l 1 \ C1 Y A   x ? - @ E F R CA Y \ CDE F V 1 R l 1 \ C1 Y AR V 1 R DG X 01 1 { X A 1 R R DE F X E A C, F C 01 R _ | F 1 R g . } ~  g . } ~ € ‚ƒ „ E Y @ g @ h i … AB , 0DR B 1 , l , F C G E F , A A Dl B 1 , Y 0, ? E A , CE DA 1 -  ^ \ - @ E F R CA Y \ CDE F V 1 R l1 \ C1 Y A R V 1 \ E [1 { X A 1 R R DE F  X E A C , F C 01 R _ | F 1 R g . } ~ E Y g . } ~ €  ‚ƒ„ , l 1 \ 01 _ | F 1 @ g @ h i    S l 1 \ Y F R D C1 V 1 \ E Y X Y A 1 X , A 0, Cm AE G ? DF 1 … A B , 0DR B 1 , l , F C G E F , AA Dl B 1 , Y 0, ? E A , CE DA1 -  

(7)

S l 1 \ Y F R D C1 V 1 \ E Y X Y A 1 X , A 0, T ‡ ˆ

V - @ E F R CA Y \ CDE F V 1 R V B 0B CDE F R ‰ [ 1 C @ [ C1 AG DF , 01 R V 1 g . } ~

  

 y ( q " # + K # + n &" *" ' &+ a " *( % $ *) &! +   

, - U @ .    U @ . \ 0, R R D] Y 1    U @ . V 1 Z Y R DE F    ? - ‰ 1 CCE W , _ 1 V 1 R X AE V Y DCR V 1 U @ . 1 C V 1 V D_ 1 R CDE F    \ - Š : > 6 < 6 ;=‹ I Œ  Ž 6 I ;= = 6 ;=‹ I 3 ; > Ž < = = 6 ;=‹ I 2 3 45‘ ’ “ 7 Ž < ” 3 4 2 56 ” 6 < ‹ 7 3    V - ’ =” 3 7 ;=‹ I 2 3 45‘ ’ “ > 6 < 2 3 7 3 I • 8 9 3 7 2 3 <3 7 ;< = ;=‹ I    1 - g B X m E R X m E A W 0 , CDE F 2 3 45‘ ’ “    Z - –=” 6 ;=‹ I 2 3 45‘ ’ “    _ - U A B X , A , CDE F V 1 R ? , \ CB A D1 R ‡ — \ E 0D \ E G X B C1 F C1 R …˜ ™ š i › -   m - T A , F RZ E A G , CDE F V 1 R ? , \ CB A D1 R \ E G X B C1 F C1 R   † D- œ <: > 6 < 6 ;=‹ I 2 3 45‘ ’ “ ” : I ‹ 9 =  Ž 3 2 3 43  Ž < 3   † ž - T 1 R C V 1 \ AE DR R , F \ 1 V 1 R 01 l Y A 1 R Ÿ ? , R R 1 C1 G X B A , CY A 1   †   - g B 0B CDE F V 1 R _ | F 1 R g . } ~ 1 C @ g @ h i 1 F V E _ | F 1 R   x  ¡ ¢ P ! + K K &"  # + c !K  P + b # %  d P   x , - g 1 R \ A DX CDE F V 1 0, R E Y \ m 1 V 1 01 l Y A 1   x ? - T A , F RZ E A G , CDE F V 1 R 01 l Y A 1 R   ^ \ - U AB X , A , CDE F V 1 Z A , \ CDE F R G 1 G ? A , F , DA 1 R CE C , 01 R , X A | R \ A E DR R , F \ 1 V 1 R 01 l Y A 1 R 1 F G D0D1 Y G DF DG Y G    V - U A B X , A , CDE F V 1 R Z A , \ CDE F R G 1 G ? A , F , DA 1 R @ £ 1 C @ ~ , X A | R \ AE DR R , F \ 1 V 1 R 01 l Y A1 R 1 F G D0D1 Y AD\ m 1 —————   1 - g E R , _ 1 V 1 R X AE CB DF 1 R CE C, 01 R X , A 0, G B Cm E V 1 ¤ @ S   d Z - S F , 0W R 1 X , A } g } [ U S e ‡   _ - g B _ 0W \ E R W 0, CDE F V 1 @ V \ h i X    T 1 R CR DF DCD , Y { 1 F \ E F V DCDE F R V B F , C Y A , F C1 R    g B _ 0W \ E R W 0, CDE F V 1 @ V \ h i X 1 F \ E F V DCDE F R F E F V B F , C Y A , F C1 R 1 C 1 ZZ 1 C R Y A 0, G 1 R Y A 1 V Y V B AD lB X m E R X m E AW 0B   

 b ) ! ) % ( ! &K ) &"  ` "  % &"   + **+ # $ % " a P *+ ¢ + c ! K  P ¥ b # %  d P   

, -™ 1 R Y A1 V 1 0, Z E AG , CDE F V 1 V B A Dl B X m E R X m E AW 0B X , A 01 ¦ § [¨ © U ª S T U … Z D0CA , CDE F -———————————————————————————————————   U m E R X m E A W 0 , CDE F    g B X m E R X m E A W 0, CDE F    ? - « 3 7 Ž <3 2 Ž 2 : < = : > ¬ ‹ 7 > ¬ ‹ < 8 4: > 6 < 6 Ž ;‹ < 6 2 =‹ ” < 6 > ¬ =3 2 5Ž I ” 3 4 2 3 ;8 > 3 Š 6 < ­ 6 2 =    \ - S \ CDl DCB S T U , R D] Y 1   

† N $ !&` &% ) &"  # $ % " a P *+ ¢ + c ! K  P ¥ b # %  d P   

, - T 1 R C V 1 R E 0Y ? D0DR , CDE F 1 F X AB R 1 F \ 1 V 1 V DZZ B A 1 F CR V B C1 A _ 1 F C    ? - U Y A = = 6 ;=‹ I > 6 <  ¬ < ‹ 9 6 ;‹ ” < 6 > ¬ =3 2 56 =I =;: 7 Ž < < : 7 =I 3 “ =© ®[ ‰ T S    \ - œ Ž < = = 6 ;=‹ I > 6 <  ¬ < ‹ 9 6 ;‹ ” < 6 > ¬ =3 2 56  =I = ;: 7 Ž < < : 7 =I 3 Š ;< 3 > ;6  =2 =I 3   † V - j D0CA , CDE F R Y A _ 1 0 1 F ¯ U Q @   ^

(8)

º        t uut       ! " # $ % &"       ¡ ¢ P ! + K K &"  # $ % " a P *+ ¢ + c !K  P ¥ b # %  d P # )  K *) *+ » $ !+ } — \ 1 A 1 l DR D, 1  † d , - } B 01 \ CDE F 1 F G D0D1 Y G DF DG Y G V 1 \ E F R CA Y \ CDE F R X E A C, F C 01 R _ | F 1 R g . } ~ 1 C @ g @ h i 1 C X E R R B V , F C Y F 1 B CD] Y 1 CC1 \ 0Dl , ? 01 X , A 0, Cm AE G ? DF 1  1 C \ A B , CDE F V Y l 1 \ C1 Y A V 1 \ E [1 { X A 1 R R DE F  † d ? - @ A E DR R , F \ 1 1 F G D0D1 Y A D\ m 1 1 C \ E [1 { X A 1 R R DE F V 1 R X A E CB DF 1 R g A R ~ X [ ¤ , V 1 C @ V \ h i X [ ¯ DR ¼ ƒ  †  ™ DR 1 , Y X E DF C  †  ‘ I 6 48 7 3 2 3 453 ½ > < 3 7 7 =‹ I 2 3 ’ < 7 ¾ > [ ¤ , V 1 C V 1 @ V \ h i X [ ¯ DR ¼ ƒ 1 F G D0D1 Y AD\ m 1  † ^ \ - g DR \ Y R R DE F  x 

  b ) ! ) % ( ! &K ) &"  ` "  % &"   + **+ # $ % " a P *+ ¢ + c !K  P ¥ b # %  d P + ¢ P ! &a ( # )  K *) *+ » $ ! +

} — \ 1 A 1 l DR D, 1  x  , - U m E R X m E A W 0 , CDE F V 1 g A R ~ X V , F R 01 R Z A , \ CDE F R G 1 G ? A , F , DA 1 R @ ~ 1 C @ £  x  ? - Q , \ E [1 { X A1 R R DE F V 1 @ V \ h i X , l 1 \ g A R ~ X 1 R C \ A Y \ D, 01 X E Y A 0 , X m E R X m E AW 0, CDE F V 1 g A R ~ X  x  \ - – 6 ” 48  ‹ 7 8 46 ;=‹ I 2 3 ¿ 2  À Á > I 53 7 ; > 6 7 < 3  Ž =7 3 > ‹ Ž < 4 6 > ¬ ‹ 7 > ¬ ‹ <8 46 ;=‹ I 2 3 ’ < 7 ¾ >  x † V -  X CDG DR , CDE F V 1 R \ E F V DCDE F R V 1 X m E R X m E A W 0 , CDE F V 1 g AR ~ X  x x 1 - ÃF m D ? DC1 Y A R V 1 0, X m E R X m E A W 0 , CDE F V 1 g AR ~ X Ä l , F , V , C1 1 C Z 0Y E A Y A 1 R  ^  Z - } E 0 Y ? D0DR , CDE F V Y \ E G X 01 { 1 g A R ~ X Å @ V \ h i X X , A 01 R V B C1 A _ 1 F CR 1 C \ E F R B ] Y 1 F \ 1 R Z E F \ CDE F F 1 001 R  ^  } E 0Y ? D0DR , CDE F V 1 R X AE CB DF 1 R g AR ~ X 1 C @ V \ h i  ^  @ E F R B ] Y 1 F \ 1 R Z E F \ CDE F F 1 001 R DG G B V D, C1 R V 1 0, R E 0Y ? D0DR , CDE F V Y \ E G X 01 { 1 g A R ~ X Å @ V \ h i X  1 C DF , \ CDl , CDE F Y 0CB A D1 Y A1 1 F Z E F \ CDE F V Y C1 G X R  ^ x _ - @ DF B CD] Y 1 V 1 V B X m E R X m E A W 0, CDE F V 1 g A R ~ X  ^  m - g DR \ Y R R DE F    µ Æ   º          v ³ ut ² t ´   µ ³ ¶ ·   ¸ ¹ ³       ! " # $ % &"     ÇÇÇÈÉ ÈÉ Ê Ë Ë Ì ÍË ÍÎ ÍÏ ÍÌ Ð Ñ Ò Ó Ô Ð Õ ÍÖ Í× Ì Ï ÍØ Î Ô Ì Õ × Ù Õ Ø Ú Ì Ï Ø Û Õ Ì Ô Ù ÍÓ Ò ÜÌ ÖÖ ÍÎ ÍÏ Ý Ó Î Ï Ì Î Ò Ó Ú   

  N $ ! &` &% ) &"  # $ % " a P *+ ¢ + c !K  P ¥ b # %  d P +  $ Î Ó Ë Ó Ð ÞÓ Ý Ï Ì Ô Ó ß Ô Ì Õ × Ù Õ Ø Ú Ì Ï Ø Û Õ Ì Ô Ù ÍÓ Ò Ü Ì ÖÖ ÍÎ ÍÏ Ý Ë Ð Õ

! ( K & + K ! + P ) » &# & +  d 

, -  ? C1 F CDE F V 1 \ E F R CA Y \ CDE F R X E R R B V , F C Y F 1 B CD ] Y 1 C C1 \ 0Dl , ? 01 X , A 0, X A E CB , R 1 T ‡ ˆ  d  ? -™ DR 1 , Y X E DF C V 1 0, X Y ADZ D\ , CDE F V Y \ E G X 01 { 1 g AR ~ X Å @ V \ h i X 1 F Y F 1 B C, X 1  d  \ - U AE CE \ E 01 Z DF , 0 V 1 X Y ADZ D\ , CDE F V Y \ E G X 01 { 1 g A R ~ X Å @ V \ h i X 1 F Y F 1 R 1 Y 01 B C, X 1  d x V - U Y A DZ D\ , CDE F V Y \ E G X 01 { 1 g A R ~ X € ‚ƒ „ [ ¤ , V Å @ V \ h i X [ ¯ DR ¼ ƒ X , A \ m AE G , CE ” < 6 > ¬ =3 2 56 =I =;: 7 Ž < < : 7 =I 3 R CA1 X C, l DV DF 1  d 1 - S F , 0W R 1 X , A Z D0CA , CDE F R Y A _ 1 0 1 F ¯ U Q @ V 1 R B 0Y , CR DR R Y R V 1 0, X Y ADZ D\ , CDE F R Y A A B R DF 1 R CA 1 X C, l DV DF 1  

(9)

Z - à \ m , F _ 1 V Y g g X , A 01 @ ¼ © ‡ á R Y A \ E 0E F F 3 7 ;< 3 > ;6  =2 =I 3 3 ; > Ž <= = 6 ;=‹ I 2 5Ž I  ‹ 9 > 43 ½ 3 =I ¬ =H : > 6 < 43 Z 0Y E A Y A 1 V 1 ? B A W 00DY G   ” â « 3 7 Ž <3 7 2 56  ;= =;: ‘ 㠜 6 7 = Ž 3 6 > < ä 7 > Ž <= = 6 ;=‹ I  † m - g DR \ Y R R DE F  ^ å ·             ³  uv    t    æ ut  t  t ²   v    ç è t  · è t  v   ut  t ´  µ ³      ! " # $ % &"  é Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÌ Ï ÍØ Î Ó Ï Ò Ý Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÌ Ï ÍØ Î Ò Ü Ð Î Ó ë Ó ÕË ÍØ Î Ï Õ Ø Î ì Ð Ý Ó Ò Ó í Õ Ë É Ô     b *"  ) ' + # + K # &`` ( !+  + K » + ! K &"  K !"  o $ ( + K # + c ! K  P # )  K *+ » + % + $ ! P î + c N † d   

  L  ) *O K + # + *) ` "  % &"   ) *& ( # + K P ! " ( & + K ! "  o $ ( + K + # + *+ $ ! + ¢ P ! + K K &"  +  a &*&+ $ a & &a $ a

  ^

   b " ï + ¢ P ! + K K &"  +  a &*&+ $ ! &% q + # + K P ! " ( & + K !"  o $ ( + K + # + b # %  d P ï ð &K ñò   d

  c &K % $ K K &"     ó  ·    u     t  ³ t   ³ t    t    x ó  ô  u õ   ³ w t      t ² t °      t ² t µ      t ² t å  † x   t ² t ö  † 

(10)

L c N ÷ ) # (  " K & + # &P q " K P q ) +

L c ø ÷ ) % &# + # ( K " ¢ O !&n "  $ % *( &o $ +

L N J ÷ ) a & " P q " K P q " *&P &# + K

L N J M ÷ ) a & " P q " K P q " *&P &# + ! )  K *" % ) K +

L M N ÷ ) # (  " K & + ! &P q " K P q ) +

L ù ø ÷ ) % &# + ! &n "  $ % *( &o $ +

ú L c ÷ # " a ) & + ) % % + P + $ ! # + n &" & +

ú L ù ÷ ú & û L a P q &P q O K & û ù » K

ú b L ÷ n &% & % q "  & &% ) % &#

ú b b N ÷ n &" & % ) ! n " ¢ O * % ) ! ! &+ ! P ! " + &

ü Ê ý é þ Õ Ø Ú Ð Õ Ó Ò Ü Ý Ï Ù ÍÒ ÍÐ Ú

ú z L ÷ n " » & + K + ! $ a ) *n $ a &

b b b N ÷ % ) ! n "  O * %O )  &# + a ï % q *" !" P q +  O *q O # ! ) ÿ "  +

b + ! ÷ % ( ! ) a &# +

b ð L N z ÷  ï  ï b q " *) a &# " P !" P O *# &a + q O *) a a "  &" ï ï P !" P )  + K $ *` "  ) +

b y b ÷ % "  % +  ! ) &"  a &% + **) &! + % !& &o $ +

b N  ÷ % " a P ) ! &a +  P ! ( ï» ) % $ " *) &!+

b î y L Jï  ÷  ï b O % *" q + ¢ O *ï ï N +  O *ï  ï c ï y ) * " K &# +

c L  ÷ # &) %O *' *O % ( ! " *

c c L  ÷ ø  ø ï c &a + q O *# + % O *) a & + " ¢ &# +

c c y ÷ # " # ( %O * a ) * " K &# +

c y N z ÷  ï # &a O !&K " O *ï K  ï' *O % + !" ï  ï P q " K P q " K + !& +

# ø M N K ÷ # ( K " ¢ O  $ % *( " &# + K ! &P q " K P q ) + K

c  ÷ # +  K & ( " P &o $ +

c M M ÷ # & q &" q ! ( & " *

¡ b J ÷ ¡ *+ % !" % q + a &*$ a & + K % +  % +

¡ c M L ÷ ) % &# + ( q O *r  + # &) a & + ( ! ) ) % ( &o $ +

¡  M L ÷ ) % &# + ( q O *r  + n &Kï " ¢ O ( q O *r  +  & ! &*"  ( ! ) ) % ( &o $ +

¡ ø M ð ÷ ¡ P K & ø ï + ! a & ) * q " a " *" ' O

¡ N ÷ +  # " K " a + K P ! ( % " % + K

¡ M ÷ +  # " K " a + K ) ! # &` K

¡  ÷ + a P O » + % " !

b ÷ ` ) a &*&) * & ! ) q + P ) &% % q " *+ K ) K &K O P + P ! " + &

 L N ÷  M N ) K + ï ) % &» ) & ' P ! " + &

 c N ÷ ' $ )  " K & + # &P q " K P q ) +

 ¡ ÷  M N + ¢ % q )  ' + ` ) % " !

 N ÷ ' !+ +  ` *$ " ! + K % +  P !" + &

  L ÷  " *' &ï *" % ) *&ÿ + #  ' ) a a ) ) # ) P & + ) !ï % "  ) & & '

 M N ÷ ' $ )  " K & + ! &P q " K P q ) + ð ¡ N ¡ z ÷ ) % &# + ø ï  ï q O # ! " ¢ O + q O * P &P + !) ÿ & + ï Üï  ï ( q )  + K $ *` "  &o $ +

ð N J b ÷ q &' q P + !` " ! a )  % + *&o $ &# % q ! " a ) " ' ! ) P q O

(11)

J

N b ÷ *O K " P q " K P q ) &# O *% q " *& +

y ú c ÷ a + ) * n & # & ' # " a ) &

y  N z ÷ ) % &# +  ï ø ï a " !P q " *& " P ! " P )  + K $ *` "  &o $ +

y N ÷ a + a n ! )  + P *) K a &o $ +

ø ú c ÷ x ï  & !" n +  ÿï  ï " ¢ ) ï   ï # &) ÿ " *ï ïO *

ø N ï d ÷  "  O * P q +  " ¢ O P " *O + q " ¢ O *+ q )  " *

ø M L ÷  & !&*" ! &) % + &% ) % &#

N L ÷ ) % &# + P q " K P q ) &# &o $ +

N ú z ÷ P q " K P q ) + n $ `` + ! K ) *& + N b ÷ P q " K P q ) &# O *% q " *& + N b ù ÷ P " *O a + !) K + % q ) & ! + ) % &"  N ¡ ÷ P q " K P q ) &# O *( q )  " *) a & + N ¡  ÷ P " *O ( q O *r  + ' *O % " * N ¡ N ÷ P q " K P q " (  " *P O ! $ » ) + N  ÷ P q " K P q " ' *O % ( ! ) + & ) K + N ð ÷ P *+ % K ! & q " a " *" ' O N ÷ P q " K P q " & " K & " * N  N ÷ P q " K P q " & " K & " *ï ï P q " K P q ) + N ÷ P O !$ » ) + & ) K + N J ÷ P q " K P q " *&P &# + N J ø ÷ P q " K P q " *) a n )  N y z ÷ P q (  O *a ( q O *K $ *` "  O *` *$ " ! &# + N ø  ) K + ÷ P + P &# + ø ï' *O % " K &# ) K + N  N b ÷ ï P ) *a & " O * ï " *+ " O *ï K  ï' *O % + ! " ï  ï P q " K P q " % q " *& + N  N z ÷ ï P ) *a & " O * ï " *+ " O *ï K  ï' *O % + !" ï  ï P q " K P q " K + ! & + N z ÷ P q " K P q ) &# O *K ( ! & + ù ¡ ÷ ! ( &% $ *$ a +  # " P *) K a &o $ + ù z ÷ ! ( &% $ *$ a K ) ! % " P *) K a &o $ + z c z ÷ K " # &$ a # " # ( % O *K $ *` ) + z c z ï N L  ¡ ÷ P " *O ) % !O *) a &# + ' + * + *+ % ! " P q " !+ K &K

z ¡ ù b L ÷ z ) ! % " ¥ ¡  # " P *) K a &% ! + &% $ *$ a % ) *% &$ a L M N ) K +

z J ø ÷ K ) ! % " *&P & +

z y ÷ K P q & ' " a O ( *& +

M b L ÷ ! &% q *" !" ) % + &% ) % &#

M ¡ z ÷ ) % &# +  ï  ï q O # ! " ¢ O ï  ï n &K q O # ! " ¢ O a ( q O *( q O *) a & " ( q )  + K $ *` "  &o $ +

M ¡  ÷ M " n ) % % " ¡ % q  &!$ K

M  ø ÷ ! )  Kï  " *' &  +  " !

M ð ù ÷ q !" a n & +

M a ÷ + a P ( ! ) $ ! + # + ` $ K &" 

M ! &K ÷ ! &K q O # !" ¢ O a + q O *) a & " ( q )  +

  ÷ $ * ! ) » &" *+

(12)

  ! " # $ % &"  ' (  ( !) *+

J + K % + **$ *+ K K "  # + K $  & ( K # + n ) K + # $ » &» )  o $ & ! ( ' $ *+  *+ $ ! P !" P ! + q " a ( " K ) K &+  a ) &K o $ &

# " &» +   ! + ) $ K K & % ) P ) n *+ # + ! + % + » " &! # + K K &'  ) $ ¢ + ¢ + ! + K ) ` & # + !( P "  # ! +  $  n + K " &  ¡ **+ K K " 

× Ì Õ Ì ×Ï Ý Õ ÍË Ý Ó Ë Ô Ì Õ ÞÌ Ô Õ Ý Ë Ó Î × Ó Ò ÜÐ Î Ó Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ó P *) K a &o $ + ß Ò Ü Ð Î × ê Ï Ø Ô ÞÌ Ë Ú Ó Ó Ïß Ò Ì Î Ë ÞÓ × Ì Ë Ò Ó × Ó ÞÞÐ ÞÓ Ë

Ó Ð × Ì Õê Ø Ï Ó Ëß Ò ÜÐ Î Î Ø ê Ì Ð Ó Ï Ò Ü Ø ÕÛ Ì Î ÍÏ Ó Ë ÍÎ Ï Õ Ì × Ó ÞÞÐ ÞÌ ÍÕ Ó Ë # ( *&a & ( K P ) ! $  + a + a n ! )  +  J ) ` "  % &" 

P !+ a &r ! + # + K a + a n ! )  + K + K *) % " a P ) ! &a +  ) &"   P + ! a + )  # + K ( P ) !+ ! *+ a &*&+ $ + ¢ !) % + **$ *) &! +

Ò Ð Ú ÍÞÍÓ Ð ÍÎ Ï Õ Ì × Ó ÞÞÐ ÞÌ ÍÕ Ó Ó Ï Ò Üê a ) & +  &! # + K % " a P " K & &"  K # &`` ( ! +  + K 

J

+ K P ! + a &+ !K % " a P " K )  K

Ò Ü Ð Î Ó Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ó Ë Ø Î Ï ÞÓ Ë ÞÍÔ ÍÒ Ó K 

J

+ K *&P &# + K K "  # + K a " *( % $ *+ K ) a P q &P q &*+ K % + K ï  ï Ò ÍÕ Ó ì Ð ÜÍÞË

P " K K r # +  $  + P ) ! &+ P " *) &! + + $  + P ) ! &+ ) P " *) &!+  ¡       " ! + ! +  ! +  # + * "  P ! ( K +  ( $ 

a " # r *+ # )  K *+ o $ + * *) a + a n !)  + P *) K a &o $ + # + K Ý Õê Ï Ù ÕØ × ê Ï Ó Ë Ò ÜÌ Î ÍÚ Ì Ð Ñ Ý Ï Ì ÍÏ × Ø Ú Ô Ø Ë Ý Ó Ò ÜÐ Î Ó

n &% " $ % q + # + *&P &# + K ) » + % *) P ) ! &+ ) P " *) &!+ ) $ % +  ! + # + *) n &% " $ % q + + *) P ) ! &+ P " *) &! + # + P ) ! +

Ò Ü Ì Ð Ï Õ Ó Ò Ó ÞÌ þ Í× Ø Ð × Ù Ó  +  % "  ) % ) » + % *+ a &*&+ $ ) o $ + $ ¢  " ! + ! )  #  ! +  # + *      b + + n &% " $ % q +

# + *&P &# + K + K ! + *) &» + a +  &a P + ! a ( ) n *+ ) $ P ) K K ) ' + # + *) P *$ P ) ! # + K a " *( % $ *+ K q O # ! " K " *$ n *+ K +

× Ø Î ËÏ ÍÏ Ð Ó ÞÌ ËÏ Õ Ð ×Ï Ð ÕÓ Ò Ó þ Ì Ë Ó Ò ÜÐ Î Ó Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ó  b + P +  # )   *+ K ( % q )  ' + K # + a ) &r ! + +

Ò Ü ÍÎ Ö Ø Õ Ú Ì Ï ÍØ Î Ë Ì ë Ó × ÞÓ Ú ÍÞÍÓ Ð Ó Ñ Ï Ý Õ ÍÓ Ð Õ  ( % + K K & +  *) P !( K +  % + K $ P P *( a +  ) &!+ # + P !" ( & + K o $ & K " 

*+ K K + % "  # K % " a P " K )  K # + K a + a n ! )  + K  J + K P ! " ( & + K a + a n !)  ) &!+ K p" $ +  *+ K ! *+ K # + !( % + P + $ ! K

# + ! )  K P " ! + $ ! K " $ # + % )  ) $ ¢  Ø Ð Ò Ó Ï Õ Ì Î ËÖ Ø Õ Ú Ì Ï Ó Ð Õ Ë Ò Ü Ý Î Ó ÕÛ ÍÓ È

¡   x   z & ' + ! + ø &% " *K "  "  P !" P " K ( *+ a " # r *+ # + *) a " K ) o $ + ` *$ &# + # )  K *+ o $ + * *+ K P !" ( & + K

a + a n ! )  ) &! + K K "  K " & & ! & K r o $ + K  ! )  K a + a n ! )  ) &! + K  K " & + ¢ ! & K r o $ + K " $ P ( ! &P q ( !&o $ + K 



z

& ' + ! )  # ø &% " *K "    x 

 c )  K % + a " # r *+  *+ K P ! " ( & + K a + a n !)  ) &!+ K + *+ K *&P &# + K  + K "  P ) K

! + *&( K +  ! + + $ ¢ P ) ! # + K *&) &K "  K % " » ) *+  + K a ) &K P ) ! # + K & + ! ) % &"  K # O  ) a &o $ + K q O # ! " P q " n + K " $

P " *) &! + K o $ & P + ! a + +  # &» + ! K a " $ » + a +  K  % + K # + $ ¢ % "  K & $ )  K + P + $ » +  +  ' +  # ! + ! *)

` " ! a ) &"  # + # " a ) & + K K P ( % &` &o $ + K # + *) a + a n ! Ì Î Ó ì Ð Ó ÞÜ Ø Î Ì Ô Ô Ó ÞÞÓ Ò Ó Ë Ú Í× Õ Ø Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ë È  Ó Ë

a &% ! " # " a ) & + K a + a n !)  ) &!+ K K "  # + K !( ' &"  K ! &% q + K +  % q " *+ K ( ! " * K P q & ' " *&P &# + K +

P q " K P q ) &# O *% q " *& +  *K ` " !a +  # + K K " ! + K # + P *) + ï ` " ! a + K ! ( ) % &"   + **+ K &a P *&o $ ( + K # )  K # &» + ! K

P !" % + K K $ K + *K o $ + *) ! )  K # $ % ÍØ Î Ò Ð Ë ÍÛ Î Ì Þ Ø Ð ÞÜÓ Î Ò Ø × ê Ï Ø Ë Ó  * ) ( ( # ( a "  ! ( o $ + % + + # &» + ! K & ( # +

` "  % &"  " n K + !» ( + # )  K *+ K a &% ! " # " a ) & + K + K # $ +  $  + # &» + ! K & ( # + % " a P " K & &"  +  + !a + K # +

P !" ( & + K + # + *&P &# + K 

z )  ' &" !' &" + ) *  d d   M )  + ) *  d d ^   

' ) *+ a +  +   x   ú ! + K % q + ! ) K $ ' ' ( ! ( o $ + *) !( P ) ! & &"  # + K *&P &# + K # + *) a + a n !)  + P *) K a &o $ +

# + K ( !O q ! " %O + K ( ) & ) KO a ( ! &o $ +  ) » + % *+ ` + $ &**+ % O " P *) K a &o $ + +  ! &% q & +  P q " K P q ) &# O *K ( ! & + N z 

+ +  P q " K P q ) &# O *( q )  " *) a & + N ¡  + *+ ` + $ &**+ + ¢ + !  + +  ! &% q & +  P q " K P q ) &# O *% q " *& + N b  + + 

K P q & ' " a O ( *& + z y  ú ! + K % q + !  x   b + K ! ( K $ * ) K "  P ) ! *) K $ & + Ý Ï Ý × Ø Î Ö ÍÕ Ú Ý Ë Ô Ì Õ Ò ÜÌ Ð Ï Õ Ó Ë

( o $ &P + K  " ! # + K O )  # y ) !& + &  x    + ! *+ &p + ) *  x    q & + *+ O )  # ú + !'   x   +  K ) % q ) 

o $ + % + ! ) & K *&P &# + K P " K K r # +  ) $ K K & # + K P ! " P ! &( ( K ` "  % &"   + **+ K &a P " ! )  + K +  p" $ )  *+ ! *+ # +

! ( % + P + $ ! K " $ # + K + % "  # K a + K K ) ' + !K  % + K ! ( K $ * ) K "  % "  # $ &  *) ` " ! a $ *) &"  # + # + $ ¢ o $ + K &"  K ÷

ð



$ + * + K *+ !  *+ # + % + + ) KO a ( ! &+ 

(13)

, - . / 03 2 3 456 7 8 9 : ;<=3 2 3 7 4=> =2 3 7 9 3 9 H < 6 I 6 =<3 7

J

Ü Ì Ëê Ú Ý Ï Õ ÍÓ Ò Ó Ë ÞÍÔ ÍÒ Ó Ë Ì Ð Ë Ó ÍÎ # + K a + a n !)  + K P ! " % $ ! + # + K P ! " P ! &( ( K P q O K &% " ï % q &a &o $ + K

P ) ! &% $ *&r ! + K  % q ) o $ + ` + $ &**+ # + % + + a + a n ! )  + 

N ) ! + ¢ + a P *+  *+ ` + $ &**+ + ¢ + !  + # + *) a + a n ! )  + P *) K a &o $ + + K +  ! &% q & +  K ( !" *K +

K P q & ' " *&P &# + K  J + K ! ( P + ! % $ K K &"  K # + % + +  ! &% q &K K + a +  K "  &a P " ! )  + K P $ &K o $ + *+ K K P q & ' " *&P &# + K

z J  # $ ` ) & # + *+ $ ! K % q ) Î Ó Ë Ò ÜÌ × ÍÒ Ó Û Õ Ì Ë Ë Ì Ï Ð ÕÝ + K + *"  ' $ + K & + ! ) ' &K K +  P *$ K ` " ! + a +  +  !+ + $ ¢

o $ + *+ K ' *O % ( !" P q " K P q " *&P &# + K ) $ ' a +  ) &"  # + K ` " ! % + K # + » )  # + !  ) ) *K  J + K K P q & ' " *&P &# + K

P " K K r # +  ) $ K K & *) % ) P ) % & ( # + ` " ! a + ! # +  " a n ! + $ K + K *&) &K "  K q O # ! " ' r  + K & + ! + & !) a " *( % $ *) &! + K 

J + K K ( !" *K o $ )   + $ ¢  K "  !&' &# + K + Ò Ü Ì Õ × Ù ÍÏ Ó ×Ï Ð Õ Ó P *)  +  b + K # &`` ( !+  + K P ! " P ! &( ( K P + ! a + + 

$  + & + !) % &"  ` " ! + +  ! + *+ K z J + *+ K K ( !" *K % + o $ & ! +  # *+ ` + $ &**+ + ¢ + ! + # + *) a + a n ! )  +

% " a P ) % + # "  % &a P + !a ( ) n *+ + ! &' &# + ð " * q $ &K + ) *  d d 

  !" # $ % & ' ( )* + , - & . " + - ' + )" , - " , ' / + * . 0 * , . 0 * 1. - " , 23 4 5 6 ' + 7 " ' - " , / " / 8 !' + " , . 1' , / 9 " , 2: ' ( 0 * ; , < = # > > ? 6$

@ A B C D E F C D G HIJ K LFM NIO P Q @ R B C D E FC D G HIJ K LM HD G O E LG S IO P Q @ T U V W XY Z [ \ ] ^ [ \ V _XY X` a Z b` a X c dZ F H C G F e O

G S IO E C D E F C D E LIC IJ P f Q

c Ü Ð Î Ì Ð Ï ÕÓ %  (  *Ü Ó Î Õ Í× Ù ÍË Ë Ó Ú Ó Î Ï +  ) a & " P q " K P q " *&P &# + K L N J K  # $ ` + $ &**+ %O " P *) K a &o $ + # + *)

a + a n ! )  + P *) K a &o $ + # + K + $ % ) !O " + K + K &a P " ! )  P " $ ! P *$ K &+ $ ! K ` "  % &"  K  &'   N ) ! + ¢ + a P *+  &* )

Ý Ï Ý Ú Ø Î Ï ÕÝ ì Ð Ó ÞÜÌ × Ï Íë ÍÏ Ý Ò Ó ÞÌ Ô ÕØ Ï Ý ÍÎ Ó g ÍÎ Ì Ë Ó h Ý Ï Ì ÍÏ Ò Ý Ô Ó Î Ò Ì Î Ï Ó Ò Ó ÞÜÍÎ Ï Ó Õ Ì × Ï ÍØ Î Ó Î Ï ÕÓ ÞÌ i j h Ó Ï ÞÌ

N z » " &! ! + » $ + # + ð )   $  + ) *  ^ †  k ) % q "  K &      * ) ) $ K K & ( ( a "  ! ( o $ + *) P ! ( K +  % +

Ò Ül i  K K $ ! *+ ` + $ &**+ & + !  + # + K a + a n ! )  + K ( ) & &a P " ! )  + P " $ ! P + !a + ! + *) ` $ K &"  +  ! + # + $ ¢

K $ !` ) % + K *&P &# &o $ + K  m ÞÜ ÍÎ ë Ó Õ Ë Ó ß Þ) # &K K &P ) &"  Ò Ó ÞÜÌ Ëê Ú Ý Ï Õ ÍÓ Ó Ï ÞÜ Ó Ñ Ï Ó ÕÎ Ì ÞÍË Ì Ï ÍØ Î Ò Ó Ë l i  K + K

&a P *&o $ ( + # )  K # +  " a n ! + $ ¢ P ! " % + K K $ K ÷ ï J ) % " ) ' $ *) &"  K )  ' $ & + J +  ÿ  d d   ï J ) !+ % "   ) &K K )  % + # + K % + **$ *+ K +  !( + K +  ) P " P " K + P ) ! *+ K a ) % ! " P q ) ' + K  ) # " + ) *  d d d  ï  ÜÓ  ! ( + # + » &! $ K # )  K *+ K % + **$ *+ K q  + K y + !% + ! )  # ð + *+  &$ K  d d ^  ï J ) ` " ! a ) &"  # + a O " $ n + K » )  # +  ¡ &p # + + ) *  d d  ï J ) % ) P ) % & ) &"  # + K K P + ! a ) " ÿ " # + K  *+ K % q + ) *  d d 

(14)

ï J ) ! )  K # $ % &"  # $ K &'  ) * î + $  ' + ) *  d d ^  ï J + %O % *+ % + **$ *) &! + ¡ a " " )  #  a + # )   d d d  ï J ) P " *) !& ( % + **$ *) &!+  ) a " " + ) *  d d   ? - @ AB , CDE F 1 C G , DF CD1 F 2 3 456 7 8 9 : ;<=3 2 3 7 4=> = 2 3 7 9 3 9 H < 6 I 6 =<3 7

 Ø Õ Ë ì Ð ÜØ Î )  ) *O K + ÞÜÌ Ëê Ú Ý Ï Õ ÍÓ Ï Õ Ì Î Ëë Ó Õ Ë Ì ÞÓ # + K *&P &# + K ) $ K + & # + # &» + ! K + K a + a n !)  + K % + **$ *) &! + K

Ø Î Ø þ Ë Ó Õë Ó ì Ð Ü&* + ¢ &K + $  + Û Õ Ì Ò Ì Ï ÍØ Î Ò Ó ÞÜ) KO a ( ! &+ +  ! + *+ K # &`` ( ! +  K " !' )  + **+ K ) » + % *+ K

a + a n ! )  + K # $ ! ( &% $ *$ a +  # " P *) K a &o $ + ù ¡  o $ & K "  KO a ( ! &o $ + K )  # &K o $ + *+ K a + a n !)  + K # $

CA , F R

ï  " *' & + *) a + a n ! )  + P *) K a &o $ + y N  K "  ) KO a ( ! &o $ + K  &'    ð " * q $ &K )  # J + » & +   d d  

n op oq r r s t u v w x y z {| } ~  € } { ~ ~ y u v w x y z {| } ~ ‚ ƒ „… †   !" ? $ ‡ , )!8 )* + , - " , 1. - " , - ' + , 1" , / " / 8 !' + " , 2' - ' . )& - " 2ˆ * 1)0 , ' + - 5 " 7 + " = ‰ Š Š ‹ 66$ Œ G NM C G NHIHIE O J P F LIC IJ P F J G O F LP F S P S  NG O P F Ž G NIP F P LE O LP e N LE  G LIF G HIE O Q Œ G S P S  NG O P P F H FK S M HNI e P G e O IŽ P G e J e NM HI e Le S P O J E C LG F S I e P ‘R ’ f“ LIP e J P F K O HD ” FP J P F LIC IJ P F“ P H G F K S M HNI e P G e O IŽ P G e J P F S P S  NG O P F J e • E L– I P H J P LG S P S  NG O P C LG F S I e P ‘@ — f Q

J ) KO  q r K + # + K *&P &# + K ËÜÓ ÖÖ Ó ×Ï Ð Ó K $ ! *) ` ) % + % O " K " *&o $ + # $ ù ¡ + *+ K *&P &# + K # " &» +   ! +

! )  K P " ! ( K K $ ! *) ` ) % + + ¢ + !  +  $  + » & + K K + P ! " % q + # + % + **+ # + *+ $ ! P ! " # $ % &"  # + a )  &r !+  " 

K ( *+ % &» +  Ì Ö ÍÎ Ò ÜÌ Ë Ë Ð Õ Ó Õ ÞÌ þ ÍØ Û Ó Î ˜ Ë Ó Ò Ó Ë Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ó Ë È  ! # )  K *+ K a + a n !)  + K a " # r *+ K K & *)

# &`` $ K &"  *) ( ! ) *+ # + K P q " K P q " *&P &# + K + K !) P &# +  *) # &`` $ K &"  ! )  K» + !K + P ) K K &» +  # + K *&P &# + K

P " K K ( # )  $  +  + P " *) &! + + K *+  + q + $ ! + K " $ p " $ ! K P " $ ! *) N b  # $ ` ) & # $ P ! " n *r a + P " K ( P ) ! *+

P ) K K ) ' + # + *)  + P " *) &! +  ! ) » + !K *) P ) ! &+ q O # !" P q " n + # + *) a + a n !)  +  ¡  !+ » )  % q +  *+ K *&P &# + K

o $ &  + P " K K r # +  ì Ð Ü Ð Î Ó  + P " *) &! + a & &a ) *+ # &`` $ K +  P *$ K ! ) P &# + a +   ! ) » + ! K *+ K a + a n ! )  + K

(15)

Œ G ª I– e NP IO J I e P LP H«¬­ J P LG J I®® e F IE O C G F FIŽ P J P J I®®M NP O H F LIC IJ P F ¯ HNG Ž P NF e O P S P S  N G O P S E J ” LP Q Œ d° [ V X^^ Z a ± J P LG ® L”  D P P FH C NE C E NHIE O O P LLP ¯ LG Ž IHP FF P J P HN G O F C E NHQ ² B H«¬­ S P Fe NM G Ž P  e O G O G LE – e P J e LIC IJ P  E O F IJ M NM Q ³ T • B J IG  K L– LK  M NE LQ Œ @ ´ B LK FE C D E F C D G HIJ K L D E LIO P Q @ ´ B C D E F C D G HIJ K L D E LIO P Q ´ P N B  M NG S IJ P Q A — B F C D IO – E S K M LIO P Q • — µ B S E O E FIG LE – LG O – LIE FIJ P F IS C LP Q ´ D E L B  D E LP F HM N E LQ

m % ) $ K + # + % + + # &`` $ K &"  ! )  K» + ! K + P ) K K &» + *+  + P " $ ! *+ K P q " K P q " *&P &# + K ú !+ K % q + ! ) P !" P " K (

ÞÜ Ó Ñ ÍËÏ Ó Î × Ó Ò Ü Ð Î Ó P !" ( & + # )  K *+ ù ¡ o $ & ` ) % &*& + ! ) & *+ ¶ ` *&P ï` *" P · # &`` $ K &"  ! )  K» + ! K +

n &# &! + % &"   + **+  # + % + K *&P &# + K ú ! + K % q + !  x 



J

) P !" ( & + ! + K P "  K Ì þ ÞÓ Ò ÜÐ Î Ó Ï Ó ÞÞÓ Ì × Ï Íë ÍÏ Ý Ë Ó Õ Ì ÍÏ

× Ó ì Ð Ü Ø Î Ì Ô Ô Ó ÞÞÓ Õ Ì ÍÏ Ò Ó Î Ø Ë ¸Ø Ð Õ Ë $  + ¶ ` *&P ï` *" P P ) K + ·  ! )  K P " ! )  !) P &# + a +  *+ K *&P &# + K ) $ ` $ ! + 

a + K $ !+ # + *+ $ ! KO  q r K +  & # ( P +  # ) a a +  # + *Ül ý i  # + a )  &r !+  "  K P ( % &` &o $ + + n &# &!+ % &"   + **+ 

z "  &# +  & ( + K & % "   $ +  J ÜØ þ Ë Ó Õë Ì Ï ÍØ Î K + *"  *) o $ + **+ ÞÜ ÍÎ Ë Ó ÕÏ ÍØ Î Ò Ü Ù Ý ÞÍ× Ó K ¹ Ì Ð Ë Ó ÍÎ # + a + a n ! )  + K

KO  q ( &o $ + K P !" » " o $ + $  ` *&P ï` *" P ! ) P &# + # + K *&P &# + K K $ ' ' r !+ Ò ÜÌ ÍÞÞÓ Ð ÕË o $ + % + Î ÜÓ ËÏ Ô Ó Ð Ïï  ! + P ) K

$  + P ! " ( & + K P ( % &` &o $ + o $ & P + ! a + % + ` *&P ï` *" P ! ) P &# + # )  K *+ ù ¡  " * + ) *  d d  

b + P +  # )   *+ ` *&P ï` *" P # + K *&P &# + K & # $ & P ) ! % Ó Ë Ù Ý ÞÍ× Ó Ë ¹ Ó Ë Ï Ö Ø ÕÏ Ó Ú Ó Î Ï ÍÎ Ù Íþ Ý Ô Ì Õ ÞÌ Ô Õ Ý Ë Ó Î × Ó Ò Ó

% q " *+ K ( ! " * $  ) n "  # )  % " a P " K )  # + *) a + a n ! )  + P *) K a &o $ + # + K + $ % ) !O " + K + % + + `` + + K

P + $ ï  ! + # º » ÞÜ Ì Ð Û Ú Ó Î Ï Ì Ï ÍØ Î Ò + *) % " a P ) % & ( + # + *) ! &' &# & ( # + K a + a n ! )  + K  ! ) » + ! K *+ K o $ + **+ K *)

 + P " *) &! + # " & !" $ » + ! $  % q + a &  &'     " * + ) *  d d   c )  K % + K a + a n ! )  + K  ` *&P ï` *" P

K P "  )  ( *+   # + K P !" ( & + K P ) ! &% $ *&r ! + K K "  # "  % P ! " n ) n *+ a +   ( % + K K ) &!+ K P " $ ! % ! ( + ! +

a ) & +  &! *ÜÌ Ëê Ú Ý Ï ÕÍÓ Ò Ó Ë ÞÍÔ ÍÒ Ó Ë ÷ # + K ¶ ` *&P P ) K + K · " $ # + K ¶ ` *" P P ) K + K ·  Ò Ý Ô Ó Î Ò Ì Î Ï Ó Ë Ò Ó ÞÜl ý i ß

K ( *+ % &» + K + $  &# &!+ % &"   + **+ K o $ & % "  K " a a +  Ò Ó ÞÜl ý i Ô Ø Ð Õ Ï ÕÌ Î Ë Ô Ø ÕÏ Ó Õ Ð Î ÞÍÔ ÍÒ Ó Ë Ô Ý × ÍÖ Íì Ð Ó

% "  ! + K "  ' ! ) # &+  # + % "  % +  ! ) &"   J ) P ! + a &r ! + ) % &» & ( # + ` *&P P ) K + # ( P +  # )  + Ò Ó ÞÜl ý i ) ( (

# ( % ! & + +   ^  # )  K *) a + a n ! )  + P *) K a &o $ + # + K ( !O q ! " %O + K  b + + ` *&P P ) K + !)  K P " ! +

K P ( % &` &o $ + a +  $  )  ) *" ' $ + # + *) N z +  # )  K $  + a " & # ! + a + K $ !+  # + *) N ¡  + + **+ ) ( (  " a a ( +

) a & " P q " K P q " *&P &# ! )  K *" % ) K + ¶ L N J M ·  z + &'  + $ ! + )  # c + » ) $ ¢   ^    c + K ) !' $ a +  K +  ` ) » + $ !

Ò Ó ÞÜ Ì Ô Ô Ì ÕÏ Ó Î Ì Î × Ó Ò Ó ÞÜl i  ý Ì Ð Ñ l ý i Ì Ë Ó Ò Ó Ïê Ô Ó i Ø Î Ï Ý Ï Ý Ì ë Ì Î × Ý K ÷ *+ ` ) & o $ + *+ K $ n K ! ) K " & *+

y ' ¼ ½ïL M N  ì Ð Ó ÞÜL M N K + ` &¢ + & # ( P +  # ) a a +  # $ N J  + o $ + ÞÜL N JM K " & & q &n ( + P ) ! *+ » )  ) # ) + + *+ K

% " a P " K ( K ` *$ " ! ( K z + &'  + $ ! + )  # c + » ) $ ¢   ^    ¡   ^   $  + ) % &» & ( # + ` *&P P ) K + ) ) $ K K & ( (

# ( + % ( + # )  K *+ K ' !)  $ *+ K % q ! " a ) `` & K n " » & K k ) % q "  K & + ) *  ^   b + + ` *&P P ) K +   " a a ( +

L M N ) K +  ) ( ( &# +  &` &( + % " a a + ( )  *+ P ! " # $ & # $ ' r  + L M N ^ L    ) *&'  + a +  # + K ( o $ +  % + )

Ô Ó Õ Ú ÍË Ò Ó Ò Ý Ï Ó Õ Ú ÍÎ Ó Õ ì Ð Ó ÞÜ" ! q " *" ' $ + # + % + + P ! " ( & + # )  K *) *+ » $ ! + ( ) & c ! K  P  $  + P ! " ( & +

*" % ) *&K ( + ) $  &» + ) $ # $ M  ø  ! )  Kï  " *' &  +  " !  M )  ' + ) *   †   ÜÌ Î Ì Þê Ë Ó Ò Ó ÞÌ Ë Ý ì Ð Ó Î × Ó Ò Ó × Ó Ë

P !" ( & + K ) P + ! a &K # + # ( + ! a & + ! o Ð ÜÓ ÞÞÓ Ë Ì Ô Ô Ì ÕÏ Ó Î Ì ÍÓ Î Ï + `` + % &» + a +   *) ` ) a &**+ # + K L M N ) K + K # +

(16)

 + K L M N ) K + K # + O P + N

, - Q 1 R S T U , R 1 R V 1 CW X 1 U 1 C 01 Y A R V DZZ B A 1 F C1 R R E Y R [Z , G D001 R

J + K L M N ) K + K # + O P + N K "  # + K P ! " ( & + K a + a n ! )  ) &!+ K & ( ' !) *+ K P ! & % &P ) *+ a +  &a P *&o $ ( + K

Ò Ì Î Ë ÞÓ Ï ÕÌ Î Ë Ô Ø ÕÏ Ò Ü ÍØ Î Ë + P ! ( K +  + K # )  K " $ *+ !r '  + # $ » &» )   J + ! )  K P " ! # Ü ÍØ Î Ë × Ø Î Ï Õ Ó *+ $ !

' !) # &+  # + % "  % +  !) &"   ( % + K K & + Ò Ó ÞÜ Ý Î Ó ÕÛ ÍÓ ß Ö Ø Ð Õ Î ÍÓ Ô Ì Õ ÞÜ Ù ê Ò ÕØ Þê Ë Ó Ò Ó ÞÜl M N  J ) P ) ! &% $ *) ! & ( # +

% + K L M N ) K + K + K *) ` " ! a ) &"  » Ô Ì ÕÏ ÍÕ Ò Ó ÞÜl ý i  ) $ % " $ ! K # $ ×ê × ÞÓ × Ì Ï Ì Þê Ï Íì Ð Ó ß Ò Ü Ð Î ÍÎ Ï Ó Õ Ú Ý Ò ÍÌ ÍÕ Ó

P q " K P q " !O *(  K $ ! $  !( K &# $ ) K P ) ! ) + % "  K + !» ( P ) !a & " $ + K *+ K L M N ) K + K # + O P + N  b + + P ) ! &% $ *) ! & (

) # "   ( K "   " a  % + + ` ) a &**+ # + P ! " ( & + K ÷ *+ K L M N ) K + K ¶ # + O P + N ·  J + $ !K + ¢ !( a & ( K ø ï + b ï + ! a & ) *+ K K "  ' (  ( !) *+ a +  *" % ) *&K ( + K # )  K *+ %O " P *) K a +  J Ü ) *&'  + a +  # + K ( o $ +  % + K # +

 " a n ! + $ K + K L M N ) K + K # + O P + N ) P + ! a &K # + ` ) &! + !+ K K " ! &! # + K a " &` K ! r K % "  K + !» ( K   " ) a a +  *)

K ( o $ +  % + % "  K +  K $ K q ) $ + a +  % "  K + !» ( + ¶ c M  ·  " ¾ í Ó ËÏ ÞÜ Ì Ë Ô Ì ÕÏ Ì Ï Ó Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÝ Ì Ð × Ø Ð Õ Ë Ò Ð

%O % *+ % ) ) *O &o $ + L ¢ + *K +  )  # N ) *a ' !+     ^  b ) O + ) *   x  y ¿ **+ ! + ) *   †  b + ) *&'  + a + 

# + K ( o $ +  % + K ) P + ! a &K # + % *) K K + ! *+ K L M N ) K + K # + O P + N K + *"  *+ $ ! K K P ( % &` &% & ( K # + ! )  K P " !  &'   

+ &* + ¢ &K +  K " $ KïÖ Ì Ú ÍÞÞÓ Ë Ò Ül ý i Ì Ë Ó Ò Ó Ï ê Ô Ó i  $ q *n ! )  #   d d   N ) *a ' ! +  )  # ø &K K +    d  ÷ ï J + K L M N ) K + K # + O P + N ÷ + **+ K K "  % *) K K ( + K +   K " $ Kï' ! " $ P + K L + ú  J + K " $ Kï' ! " $ P + L

% "  &+   " ) a a +  $  + L M N ) K + n ) % ( !&+   + # + ! )  K P " ! # $ ½ # P N ) *a ' !+  )  # ø &K K +    d 

J + K K $ n K ! ) K !)  K P " ! ( K P ) ! *+ K L M N ) K + K # $ K " $ Kï' ! " $ P + ú K "  *+ K a ( ) $ ¢ # & K ¶ *" $ ! # K · " $ *+ K

a ( ) $ ¢ # + ! )  K & &"  % $ &» ! +  ) !' +   ÿ & %  % ) # a &$ a " $ P *" a n  + *+ $ ! K ` "  % &"  K K "  Ò Ü Ð Î Ó Ô Ì ÕÏ # +

` " $ !  &! *+ K a ( ) $ ¢  ( % + K K ) &! + K ) $ ` "  % &"   + a +  # + K a ( ) **" P ! " ( & + K + Ò Ü Ì Ð Ï Õ Ó Ô Ì ÕÏ Ò ÜÓ Ñ Ô Ø ÕÏ Ó Õ

*+ K a ( ) $ ¢ " ¢ &o $ + K q " ! K # + *) % + **$ *+  J ) P ) ! &% $ *) !& ( # + % + + ` ) a &**+ + K # + P " K K ( # + ! $  # " a ) & +

# + ` &¢ ) &"  # + K a ( ) $ ¢ y ú c  K $ ! $  + # + K + K + ¢ ! ( a & ( K + ! a & ) *+ K  N " $ ! *+ K L M N ) K + K # + K " !' )  &K a + K

Ô ÕØ × Ì Õê Ø Ï Ó Ëß ÞÓ À ü í Ó ËÏ Û Ý Î Ý Õ Ì ÞÓ Ú Ó Î Ï ÞØ × Ì ÞÍË Ý Ë Ð Õ ÞÜ Ó Ñ Ï ÕÝ Ú ÍÏ Ý ï + !a & ) *+ + # + K K ! $ % $ !+ K  n ) K K +

! ( K " *$ &"  & # &o $ +  o $ + % + # " a ) & + + K +  % "  ) % ) » + % *+ K # " a ) & + K ø ¥ N  $ + ) *  d d ^  b + % & + K

Ò Ü Ì ÍÞÞÓ Ð Õ Ë × Ø Î Ö ÍÕ Ú Ý Ô Ì Õ Ò Ó Ë + ¢ P ( ! &+  % + K # + n &" % q &a &+ % *) K K &o $ +  "  ÿ ) *+ ÿï  $ + ! !+ !" + ) *  d d  

M K &» " » K && + ) *  d d  * ) ( ( P ! " P " K ( o $ + *+ K # " a ) & + K y ú c  # + P ) ! *+ $ ! & + ! ) % &"  ) » + % *+ K

# " a ) & + K ø ¥ N  Ì Û ÍË Ë Ó Î Ï × Ø Ú Ú Ó Õ Ý Û Ð ÞÌ Ï Ó Ð Õ Ë Ò Ó ÞÜ Ì × Ï Íë ÍÏ Ý Ò Ó Ë l ý i Ì K + K N ú ÷ # )  K *+ % ) K K P ( % &` &o $ + # +

ÞÜl ý i Ì Ë Ó ï b $ ½ q $ a ) & + &K K $ + # $ ' r  + S T U Á ¤

ß ÍÞ Ë Ó Ú þ ÞÓ ì Ð Ó ÞÜ ÍÎ Ï Ó Õ Ì ×Ï ÍØ Î Ó Î Ï Õ Ó Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ë À ü í Ó Ï Â i

K " & ) $ " ï & q &n & !&% + + o $ + *) ` &¢ ) &"  # + b $ ½ *r » + % + + ) $ " ï & q &n & &"  Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó M K &» " » K && + ) *

 d d   * ) ( ' ) *+ a +  ( ( P ! " P " K ( o $ + *+ K &"  K b $ ½ K " &+  ) $ P ! ( ) *) n *+ ! )  K` ( !( K # $ # " a ) & + y ú c

) $ ¢ K & + K a + a n !)  ) &!+ K # + q ) $ + ) `` & & (  a ) &K *) *" % ) *&K ) &"  # $ # " a ) & + y ú c + *+ ` ) & o $ + *)

Ò Ý ÞÝ Ï ÍØ Î Ò Ð À ü í Ò Ì Î Ë þ Ó Ì Ð × Ø Ð Ô Ò Ül ý i Ì Ë Ó Ë Ô Õ Ø × Ì Õê Ø Ï Ó Ë Î Ü Ì ÍÏ ì Ð Ó Ò Ó Ë Ó ÖÖ Ó Ï Ë Ú Ì ÕÛ ÍÎ Ì Ð Ñ Ë Ð Õ ÞÜÌ × Ï Íë ÍÏ Ý

 + K " $ &+   +  P ) K % + + q O P " q r K + ú ) * + ) *  d d  )  )  # ù " K +    d d   c + K a $ ) &"  K # + K ' r  + K

× Ø Ò Ì Î Ï ÞÓ Ë l ý i Ì Ë Ó Ë » × Ð Íë ÕÓ Ó Î Ï Õ Ì ÃÎ Ó Î Ï ß × Ù Ó Ä ÞÜ q " a a +  *+ K a ) *) # &+ K # + y +  + K " $ # +  &*K "   J )

a ) *) # &+ # + y +  + K % " !! + K P "  #  $  ! " $ n *+ # $ a ( ) n " *&K a + # $ % $ &» ! + o $ & ! ( K $ * + # + *) a $ ) &"  # $

' r  + S T U Á S

 % " # )  $  + +  ÿO a + ! + K P "  K ) n *+ # $ ! )  K P " ! & ! ) % + **$ *) &!+ # $ % $ &» !+  c + K a $ ) &"  K

# + % + ' r  + +  ! )  +  $  # ( ` ) $ # ) n K " ! P &"  # $ % $ &» ! + ) $  &» + ) $ # + K & + K & K  $ *P + + ) *    

J + K P ! & % &P ) *+ K a )  &` + K ) &"  K K "   + $ ! " *" ' &o $ + K + ) % % " a P ) '  ( + K # $  % q )  ' + a +  # + *) + ¢ $ ! +

# + K % q + » + $ ¢ % ) ! ) % ( ! &K &o $ + # + *) a ) *) # &+  J ) a ) *) # &+ # +  &*K "   o $ )   + **+  ! ( K $ * + # + *) a $ ) &" 

# $ ' r  + S T U Á ¤

 % " # )  $  + +  ÿO a + ! + K P "  K ) n *+ # $ !)  K P " ! & ! ) % + **$ *) &!+ # $ % $ &» ! + # )  K *+ ` " &+ +

(17)

# + ! )  K P " ! # + K K " $ Kï' !" $ P + K  L +  ú + K *+ % ) *% &$ a )  # &K o $ + *+ K " $ Kï' !" $ P +  b + K !+ P ! ( K +  ( P ) ! # + K L M N ) K + K # + ! )  K P " ! ø ) ½¥ ½ " $ ð ½¥ ½  J + K K " $ Kï' ! " $ P + K  L +  ú K "  # &`` ( ! +  % &( K P ) ! 

P " & K ÷ J + K " $ K ' ! " $ P +  ú P " K K r # + $  # " a ) & + # + ` &¢ ) &"   *) % ) *a " # $ *& + K $ ! $  + # + K + K

+ ¢ ! ( a & ( K + ! a & ) *+ K + % + # " a ) & + Õ Ý Û Ð ÞÓ ÞÜÌ ×Ï Íë ÍÏ Ý Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó  *+ K " $ Kï' ! " $ P +  ú  + ! )  K P " ! +

ì Ð ÜÐ Î Ë Ó Ð Þ × Ì Þ× ÍÐ Ú Å ÞÌ Ö Ø Õ Ú Ì Ï ÍØ Î Ò Ó Ò Ý ÕÍë Ý Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÝ » ÞÜÝ Ï Ì Ï ËÏ Ì Ï ÍØ Î Î Ì ÍÕÓ Ó ËÏ Ì Ð Û Ú Ó Î Ï Ý Ó Ô Ì Õ ÞÌ P !( K +  % + # + *)  q )  + P " $ ! *+ K " $ Kï' !" $ P +  ú  % "  ! ) &! + a +  ) $ ¢ ) $ ! + K L M N ) K + K # + O P + N  # "  *+ K " $ Kï' ! " $ P +  L  J + K " $ Kï' ! " $ P + 

b P " K K r # + *) P ) ! &% $ *) ! & ( # + ! + o $ ( ! &! ÞÌ Ô Õ Ý Ë Ó Î × Ó Ò Ü $  + K " $ Kï $  & (

! ( ' $ *) !&% + P " $ ! K "  ` "  % &"   + a +  K " $ Kï Ð Î ÍÏ Ý  Æ  + + ! & '   d d   Ì Ò Ý × Ø Ð ë Ó ÕÏ Ó Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó ï

ø ) ½¥ ½ Ô Ì Õ ÞÜ Ý ì Ð ÍÔ Ó Ò Ó Ç g Ø Ð Ó Î È É Ê Ë ÞÐ Í Ì ë Ì ÞÐ ÞÓ Ô ÕÍÑ Ø þ Ó Þ z " $    x  z + ! % ) )  # $ K " $ Kï' ! " $ P +  L 

+ K *) P ! + a &r !+ L M N ) K + # + O P + N P " $ ! *) o $ + **+ *) K !$ % $ ! + +   # &a +  K &"  K ) ( ( " n +  $ +  q ) $ +

! ( K " *$ &"  M " O " K q &a ) + ) *  d d d 

ï J + K L M N ) K + K # + O P + N  ÷ b + K L M N ) K + K ß ì Ð Ó ÞÜØ Î Ï ÕØ Ð ë Ó Ò Ì Î Ë ÞÌ Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ó Ô ÞÌ Ë Ú Íì Ð Ó Ò Ó Ë

P *)  + K + a &% !" " !' )  &K a + K + ¢ P " ! +  # + K P ! " "  K » + ! K *+ a &*&+ $ + ¢ ! ) % + **$ *) &! + ) ` & # + % ! ( + ! $ 

' !) # &+  ( *+ % ! " % q &a &o $ + ì Ð Í ë Ì Ô Ó ÕÚ Ó ÏÏ Õ Ó ÞÜÌ Ë Ë ÍÚ ÍÞÌ Ï ÍØ Î Ò Ó Î Ð Ï Õ ÍÚ Ó Î Ï Ë È i Ì Õ + ¢ + a P *+  % q + ÿ *+ K

P *)  + K $  + + ¢ P " K & &"   *) *$ a &r ! + +  ! )  + $  + % q )   + # + ! ( ) % &"  K ) n " $ &K K )   » &) *)

Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÌ Ï ÍØ Î Ò Ð Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ò Ü Ì Ð Ï Ø ï Õ Ý Û Ð ÞÌ Ï ÍØ Î Ò Ó ÞÜ Ó Ñ Ï ÕÝ Ú ÍÏ Ý h ïÏ Ó ÕÚ ÍÎ Ì ÞÓ Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó » Ô ÕØ Ï Ø Î # + *) Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ó Ô ÞÌ Ë Ú Íì Ð Ó Ò Ó Ë × Ó ÞÞÐ ÞÓ Ë Ò Ó Û Ì ÕÒ Ó Ò Ó Ë ËÏ Ø Ú Ì Ï Ó Ëß » ÞÜ Ì ×Ï Íë Ì Ï ÍØ Î # + % + + P ! " ( & +  J + ' !) # &+  Ý ÞÓ × Ï ÕØ × Ù ÍÚ Íì Ð Ó ÕÝ Ë Ð ÞÏ Ì Î Ï Ó Î Ï Õ Ì Ã Î Ó ÞÜÌ þ Ë Ø ÕÔ Ï ÍØ Î Ò ÜÓ Ì Ð Ó Ï Ò Ü ÍØ Î Ë Ô Ì Õ ÞÓ Ë × Ó ÞÞÐ ÞÓ Ë Ò Ó Û Ì Õ Ò Ó  J + K % + **$ *+ K ë Ø Î Ï Ì ÞØ Õ Ë Û Õ Ø Ë Ë ÍÕ Ó Ï Ô Ó Õ Ú Ó Ï Ï Õ Ó ÞÜØ Ð ë Ó ÕÏ Ð ÕÓ Ò Ó Ë Ô " ! + K # + K K " a ) + K % + o $ & » ) P + ! a + !+ ) $ ¢ P *)  + K Ò Ü Ì þ Ë Ø Õþ Ó Õ ÞÓ h Ì ¼ y + ! *" + ) *  d d x  

(18)

Í Î ÏÐ Ñ Ò ÓÔ Ñ Õ Ö × Ô Ñ Ö Ø Ï ÕÐ Ù × ÚÏ ÚÔ Ù Þ ß Ð à á â Ð á ã ä á å á ã ä á å á

  !" æ $ 3 !8 ! " . 0 ç 1*  & + & )9 " - " 1' è' / 11" - " , 3 é 4 ' , " , - " )ç . " 4 2' - ' . ) & - " 2ê 0 18 !' + - )= ‰ Š Š æ 66$ Œ P F e  F HNG H J P HNG O F C E NH P F H IO J I e M J G O F LP  G J NP  LP e Q Œ P O E S J P F ë ì c Z ^ Z ^ _ W ] í] ±° ^ Z í] c ídZ ^[ ì W Z B P O Ž P NH“ ë ì c Z ^ Y dî ±V ï XY ] [ ^ X^ _\ V íXV c V ð P O E NG O – P “ – ” O P F J P ´ G P O E ND G  J IHIF P LP – G O F ð P O – NIF“ – ” O P F J P R F D P NI D IG  E LI ð Z c ï íZ a ñ ] c W ° ò ë ì c Z ^ Y dó ] ô ] ^V [ XZ c ^ ð P O  LP e  LG IN“ – ” O P F J P — P HD G O E  G  HP NIe S HD P NS E G e HE HNE C D I e S ð P O õG e O P “ – ” O P F J P — M HD G O E  E   e F õG O O G F D II ð P O Ž IE LP H“ – ” O P F J P A K O P  D E  K F HIF @ ´ ´ ö ÷ ø µ ð P H P O NE e – P“ – ” O P F J P A G   D G NE S K  P F  P NP Ž IF IG P Q ´ LG FF I® I G HIE O P ®® P  He M P C G N T ù P LF P O P H @ G LS – NP O P O ú û û ÷ Q ï J + K L M N ) K + K # + O P + N  ÷ *+ $ ! K $ n K !) K # + ! )  K P " ! K + a n *+   !+ # + K P q " K P q " *&P &# + K + + **+ K  + K "  P ! ( K +  + K o $ + % q + ÿ *+ K + $ % ) !O " + K L ¢ + *K +  )  # N ) *a ' ! +     ^  J + K L M N ) K + K # + O P + N 

Ë Ó Ú þ ÞÓ Î Ï Î Ý × Ó Ë Ë ÍÏ Ó Õ ÞÌ Ô ÕÝ Ë Ó Î × Ó Ò Ü Ð Î Ó Ë Ø Ð Ëï $  & ( ! ( ' $ *) ! &% +  *+ K P ! " ( & + K b c b  d 

J

" P + ÿï y ) ! o $ + K +

) *  d  b + K L M N ) K + K K + !"  # ( % ! & + K P *$ K P ! ( % &K ( a +  % &ï ) P !r K 

ï J + K L M N ) K + K # + O P + N  é ÞÓ Ð Õ Ë Ð þ ËÏ Õ Ì Ï Ò Ó Ï Õ Ì Î Ë Ô Ø ÕÏ Î Ü Ó ËÏ Ô Ì Ë Ó Î × Ø Õ Ó Ò Ý Ö ÍÎ ÍÈ ÇÞ Ó Ñ ÍËÏ Ó Ò Ó Ð Ñ

K " $ Kï' ! " $ P + K  L +  ú  *" % ) *&K ( K ) $  &» + ) $ # $ ù ¡  L  " $ ) $  &» + ) $ # + K *O K " K " a + K # + K » ) % $ " *+ K " $

# + *) a + a n ! )  + P *) K a &o $ +  ú  z " ! +  K +  + ) *  d d  * ) ( ( P ! " P " K ( o $ + *) ` "  % &"  # + ` *&P P ) K +

) $  &» + ) $ # $ ù ¡ K " & !( ) *&K ( + P ) ! *+ K P ! " ( & + K ) P P ) ! +  )  ) $ K " $ K ï' ! " $ P +  L N " $ *K +  + ) *



d d ^ n ß Ú Ì ÍË × Ó Ï Ï Ó Ô Õ Ø Ô Ø Ë ÍÏ ÍØ Î Ó ËÏ Ð Î Ô Ó Ð × Ø Î Ï ÕÌ Ò Í×Ï Ø ÍÕ Ó Ì ë Ó × ÞÜÍÒ Ý Ó üë Ø ÍÕ Ô ÞÐ Ë Ù Ì Ð Ï Æ ì Ð Ó × Ó Ï Õ Ì Î Ë Ô Ø ÕÏ

(19)

- Q1 R \ , A , \ CB A DR CD] Y 1 R R CA Y \ C Y A , 01 R V 1 R S T U , R 1 R V 1 CW X 1 U J + K K ! $ % $ !+ K % ! &K ) **" ' !) P q &o $ + K # + *ÜL M N ) K + ï b ) ¼½ z + !% ) ) # + *) P & M " O " K q &a ) + ) *  d d d  # + ÞÜL M N ) K + ï ø ) ½¥ ½ # + P " ! % y " ! q + ) *  d d x  Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó ï ð ½ # + P *)  + K L ð L  N + # + ! K +  + ) *  d d x  Ó Ï Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó ï b $ ½ # + Q1 _ DE F 1 00, X F 1 Y G E X m D0, b " P L  " $ ! # "  + ) *  d  "  # ( p ( ( " n +  $ + K

 &'  †  + a ) *' ! ( $  ` ) &n *+ # + ' ! ( # + % "  K + !» ) &"  # + K ( o $ +  % +  *+ K K ! $ % $ ! + K # + % + K # &`` ( ! +  + K

K " $ KïÖ Ì Ú ÍÞÞÓ Ë Ò Ül ý i Ì Ë Ó Ë Ë Ø Î Ï K &a &*) &! + K  J + K L M N ) K + K # + O P + N K "  % "  K & $ ( + K  +  ' (  ( !) * # + 

# " a ) & + K   # + % + K # " a ) & + K K "  % O " P *) K a &o $ + K *+ K # " a ) & + K L  ø  N )  # &K ì Ð Ü Ð Î Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ó ËÏ

! )  K a + a n ! )  ) &!+  y  P ) !` " &K K ( P ) ! ( +  # + $ ¢ K " $ Kï # " a ) & + K M +

z

 &'     b + ! ) & + K L M N ) K + K # +

O P + N P !( K +  +  $  % & o $ &r a + # " a ) & +  "  » &K &n *+ K $ ! *) &' $ !+    " a a ( # " a ) & + ù + K & $ ( 

ÞÜ Ó Ñ Ï Õ Ý Ú ÍÏ Ý ï + ¥ " $ b ï + ! a & ) *+ Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó  $ q *n !)  #   d d   N ) *a ' !+  )  # ø &K K +    d    !" ‹ $ þ ¦§œ ÿ ¦œ §£ ¦ §š¤ š £ Ÿ  šž Ÿ Ÿ £ ¥¥£ £ ¦ ¦ž   ž ¥ž  š£ ¤ £ ¥¨   ¡  £  '  24 ' 1/  !" + ' + - , , " + = ‰ Š # # 6$ – G e  D P B A HNe  He NP E  HP O e P C E e N A P N G ú G ‘@ ³ B ú A f Q Œ G C E S C P P F H E N– G O IFM P P O HNE IF J E S G IO P F  K HE C LG FS I e P F ‘T “  P H @ f“ Z _ a c Y ] ô V Xc Z ô Z ô ï ±V c V X±Z Y X X^ Xï íZ Z c  [ V ±_XZ ^ b Z _    Z Y ] ô V Xc Z  íXZ ídî   Z H C E FF ” J P e O N LP J P  IO G F P “  e I Ž G C D E F C D E NK LP N LP J E S G IO P @ Q Œ P J E S G IO P T õE e P LP N LP J P C D E F C D G HG F P P O J M C D E F C D E NK LG O H LP J E S G IO P @ Q Œ P F IE O F HNG O F C E NHM F ‘´ G ­ J G O F  P  G F L¯ f F P ® Iù P O H G e S ILIP e J e J E S G IO P P H LP F IHP J P ®Iù G HIE O P FH G   P F F I LP G LHP NO G HIŽ P S P O H“ G e  E e NF J e  K  LP “ FE IH C G N LP  K HE C LG F S P F E IH C G N LP S ILIP e P ù HM NIP e NQ J NE IHP B ’ P C NM FP O HG HIE O F IS C LI® IM P J P LG F HNe  He N P C NM F P O HM P ¯ – G e  D P Q Œ P F J I®® M NP O HF J E S G IO P F F E O H NP C NM F P O H° ^ [ V ± Y Z ^ íZ __±Z ^   Z Y ] ô V Xc Z î Z ^ _ W ] c ^ _X_a ° Y Z ídZ  _±° ô X_°  HP NS IO G LP P H J P LG C NP S I” NP  E e  LP  K HE C LG FS I e P Q Œ P J E S G IO P  P FH e O P IO F P NHIE O J G O F LP J E S G IO P @ Q Œ P F J E S G IO P F  P H @ F E O H  E O FHIHe M F C G N LG F P  E O J P  E e  LP  K HE C LG F S I e P Q Œ P J E S G IO P S P S  NG O G INP P F H  E O F HIHe M J P ú ø FP – S P O HF HNG O F S P S  N G O G INP F J E O H LP F ö C NP S IP NF  E O F HIHe P O H LP J E S G IO P P H LP F  J P NO IP NF  E O F HIHe P O H LP J E S G IO P A Q

ï J + # " a ) & + N P " $ ! ¶ P q " K P q " !O *) &"  ·  % "  &+  *) K ( o $ +  % + % "  K + !» ( + c M  " ¾ c + K

ÞÜ Ì Ë Ô Ì ÕÏ Ì Ï Ó Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÝ È h Ó Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó × Ø Î Ï ÍÓ Î Ï Ò Ó Ð Ñ Ì Ð Ï Õ Ó Ë Ë Ý ì Ð Ó Î × Ó Ë ý  í Ó Ï  í   í ÍÚ Ô ÞÍì Ð ( + K

Ò Ì Î Ë ÞÌ × Ø Ø Õ Ò ÍÎ Ì Ï ÍØ Î Ò Ð Ú Ì Û Î Ý Ë ÍÐ Ú Ì Ë Ë Ø × ÍÝ » ÞÜl ý i È h Ó Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ó ËÏ × Ø Î ËÏ ÍÏ Ð Ý Ò Ó Ò Ó Ð Ñ Ô Ì ÕÏ ÍÓ Ëß

Ë Ý Ô Ì Õ Ý Ó Ë Ô Ì Õ ÞÓ Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó ß Ò Ø Î Ï Ð Î Ó Ó ËÏ Õ Ó ÞÍÝ Ó » ÞÜÙ Ý ÞÍ× Ó À Ï Ì Î Ò ÍË ì Ð Ó ÞÜÌ Ð Ï Õ Ó Ó ËÏ Õ Ó ÞÍÝ Ó » ÞÜÙ Ý ÞÍ× Ó

(20)

Ó ËÏ ÍÎ Ë Ý Õ Ý Ì Ð Ë Ó ÍÎ Ò Ð Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó i Ó Ï ×Ü Ó ËÏ ÞÓ Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ò Ø Î Ï ÞÌ Ë Ý ì Ð Ó Î × Ó Ó ËÏ ÞÌ Ô ÞÐ Ë ë Ì Õ ÍÌ þ ÞÓ Ô Ì Õ Ú Í ÞÓ Ë

L M N ) K + K # + O P + N 

ï J + # " a ) & + L P " $ ! ¶ ) % $ ) " ! ·  + K % "  K & $ ( # + *) n " $ % *+ ! + *&)  *+ K q ( *&% + K y  + y  +

# + K ) % &# + K ) a & ( K ø ï + ! a & ) $ ¢ K & $ ( K +  ) a "  # $ P !+ a &+ ! K + ' a +  ! )  K a + a n ! )  ) &! +  * % "  &+ 

*+ a " &` M  ¡ z o $ & + K q ) $ + a +  % "  K + !» ( ) $ K + & # + K L M N ) K + K # + O P + N + o $ & + K &a P *&o $ ( # )  K *)

Ò Ý Ô Ù Ø Ë Ô Ù Ø Õê ÞÌ Ï ÍØ Î Ò Ó ÞÜÌ Ë Ô Ì ÕÏ Ì Ï Ó È h Ó Ò Ø Ú Ì ÍÎ Ó Ì Û ÍÏ Ò Ø Î × × Ø Ú Ú Ó $  + P q " K P q ) ) K +  b + # " a ) & + + K

! r K ` *+ ¢ &n *+  % + o $ & *$ & P + !a + # + K a " $ » + a +  K # + ' !)  # + ) a P *& $ # + 

ï J + # " a ) & + y P " $ ! ¶ a + a n ! )  + ·  + K % "  K & $ ( # + K q ( *&% + K ! )  K a + a n ! )  ) &! + K ) $ K + &

# + K o $ + **+ K K + K & $ + *+ K & + # + ` &¢ ) &"  # + K &"  K ! )  K P " ! ( K  b + # " a ) & + + K % "  K & $ ( # $ # " a ) & + # +

! )  K P " ! M  ! r K ` *+ ¢ &n *+ + &a P *&o $ ( # )  K *+ ! )  K P " ! # + K &"  K + *+ # " a ) & + # + K $ P P " ! z  P *$ K

! &' &# +  J ) K ( o $ +  % + # + K # " a ) & + K y # + K # &` ` ( ! +  + K L M N ) K + K + K ! r K P + $ % "  K + !» ( + 

ï J + # " a ) & + ù P " $ ! ¶ !+ ' $ *) " !O ·  P ! ( K +  P " $ ! % + ! ) & + K L M N ) K + K + K $  # " a ) & + o $ &

P + ! a + *) \ DR

ï ! ( ' $ *) &"  # + % + ! ) & + K L M N ) K + K # + O P + N  Þ Ô Ó Ð Ï " Ï Õ Ó Ë ÍÏ Ð Ý » ÞÜ Ó Ñ Ï ÕÝ Ú ÍÏ Ý ï " $ b ï

+ ! a & ) *+ " $ ) $ ¢ # + $ ¢ + ¢ !( a & ( K  * ) ' & % " a a + $  # " a ) & + ) $ " & q &n & + $ ! +  & + ! ) ' &K K )  ) » + % *+

! + K + # + *) P " a P + 

b + ! ) & + K L M N ) K + K # + O P + N P " K K r # +  # + K K " $ Kï $  & ( K ) # # & &"   + **+ K ! + o $ &K + K P " $ ! *+ $ !

) # ! + K K ) ' + + ¥ " $ *+ $ ! ` "  % &"   $ q *n ! )  #   d d   N ) *a ' ! +  )  # ø &K K +    d  N ) ! + ¢ + a P *+ *Ül M N ) K + ï

ø ) ½¥ ½ P " K K r # + $  + K " $ K ï Ð Î ÍÏ Ý  ß × Ø Î ËÏ ÍÏ Ð Ý Ó Ò ÜÐ Î Ë Ó Ð Þ Ë Ó Û Ú Ó Î Ï Ï Õ Ì Î Ë Ú Ó Ú þ ÕÌ Î Ì ÍÕÓ Ó Ï Ò Ü Ð Î ÞÌ ÕÛ Ó

# " a ) & + % O " P *) K a &o $ +  ¡ **+ + K &a P " ! )  + P " $ ! *Ü Ì Ò Õ Ó Ë Ë Ì Û Ó # $ % " a P *+ ¢ + + a " # $ *+ K "  ) `` & & (

P " $ ! *+ ½  + + ! & ' 



d d  c )  K % + ! ) & + K % + **$ *+ Kß ÞÜl ý i Ì Ë Ó ï ø ) ½¥ ½ + K ) K " $ Kï Ð Î ÍÏ Ý  ÍÎ Ï Ó ÕÌ Û ÍË Ë Ó Î Ï

) » + % *+ K P ! " ( & + K # + *) ` ) a &**+ # î c   " a a ( + K ) $ K K & K " $ Kï Ð Î ÍÏ Ý Ë $ È h Ó Ë Ë Ø Ð Ëï Ð Î ÍÏ Ý Ë $ Ë Ø Î Ï Ò Ó Ô Ó Ï ÍÏ Ë

Ô Ø Þê Ô Ó Ô Ï ÍÒ Ó Ë × Ø Î ËÏ ÍÏ Ð Ý Ë Ò ÜÐ Î Ë Ó Ð Þ Ë Ó Û Ú Ó Î Ï Ï Õ Ì Î Ë Ú Ó Ú þ Õ Ì Î Ì ÍÕ Ó È í Ì Î Ë ÞÓ × Ì Ë Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó Ì ½¥ ½ # $

! + &  % + + K " $ Kï $  & ( ! ( ' $ ÞÓ ÞÜÌ ÖÖ ÍÎ ÍÏ Ý Ò Ó ÞÜl ý i Ì Ë Ó Ô Ø Ð Õ ÞÓ Ì ½  + + ! & ' + ) *  d d   c )  K *+ a $ K % *+

K o $ + *+ &o $ +  $  P + & P + P &# + !( ' $ *+ ) $ K K & ÞÜ Ì × Ï Íë & ( # + ÞÜl ý i Ì Ë Ó b ) ¼½ z + ! % ) ) ÷ *) K ) !% " *&P & +  # )  K *+

× % Ð Õß ×Ü Ó ËÏ *+ P q " K P q " *) a n )  o $ & ÕÝ Û Ð ÞÓ ÞÜ Ì ×Ï Íë ÍÏ Ý Ò Ó Ç Ó Õ × Ì É Ì y ) % J +   )  + ) *  d d   y ) % J +   ) 

(21)

&' () * + ,-. / 0 12 3 4 5 6 7 89 4 3 :9 3 4 5 ; < =9 5 > 3 5 ; ? < 3 4 @ 1 A A B 4 5 >9 5 ; CD EF ; 5 ; @ 5 9G ? 5 E HI 3 = J 19K L MN O P Q R S T SU V < 3 4 @ < > L MN O P Q R S T T W XY Z[ \ ]^ _` ab XY Z[ \ ] c ] de f ] Z g h ] i jk l ] m m[ f l ]` nk f o j m [ pq r s tu v wx yz { | } ~  ] € [ b XY Z[ \ ] c ] de f ] Z ‚ X c ] m[ f j l  ] € [ g [ ƒ Z „ …b gY †  ‡ ~ XY Z[ \ ]^ ˆ[ a ‰ Š ab XY Z[ \ ] c ] de f ] Z ‚ _ c ] fk €  ƒ Z „ …b ‹ Š „ Z ‡ ~ XY Z[ \ ]^ Œ a Ž ‘ ’ “ ” “ •– — “  ˜ ” “ — ™‘ š • “ ’ Ž › Ž œ   ž Ÿ ˜ Ÿ   ¡ ¢ £ ¤¥ ” ¦ ™ “ ” “ ™ § Ž ‘ ’ “ ^ Œ a ¨ ©ª «‘ ’ •¬ ­® ¯ “ ” “ ™ § ›¥ ° ° “ ±‘ ’ ² ’ ¯¬ ™‘ ’ •¬ ¯ ³ • ¯¬ “ ” “ ™ § Ž ‘ ’ “^ ˆ[ a ‰ Š a ~ h ] ck n[ j l ] “ ’ • “ š ¬ ¥ ¯ « “ ´ ™ “ ”¥ °‘ ­ š “  “ ’ • “ š ± ™ “ ¯ ´ ™ “ ” ¥ °‘ ­ š “ Ž “ ’ • “ š µ‘ ¯ š “£ ¶ “ ’ ”¥ °‘ ­ š “ ’ ¤ ’¥ š • “ š ± ™ “ ¯ —¥ ¯¬ · “¬ ³‘¸ “ š ¥ ¬ ‘ š « “ —¥ ¯¬ ™ § ŽY Z[ \ ]^ ˆ[ a ‰ Š a ¸ “ š ¹ “¬ • —¥ ¯¬ ” “ ™ § Ž ‘ ’ “^ Œ a ‰ Šº «‘ ’ •¬ ­® ¯ “ ” “ ™ § ›¥ ° ° “ ¸ “ š «¬ ­ ’ —¥ ¯¬ ” “ ™ § Ž ‘ ’ “^ Œ a ” “ — ™‘ š • “ ’ “ • “ š °‘ ¬ ¬ ¥ š ³ ™‘ ­¬ —¥ ¯¬ ™ § Ž  ‘ ’ “^ _` a c ] h ] i jk l ] m m[ f l ] ` nk f o j m [» h ] \ \k ` \^ ` l j d ¼ \ ½ ] d¾ ” “ ™ § Ž ‘ ’ “^ ˆ[ a ‰ Š a \k l d € ] f € ¼ \ ] l d ¼ ] \ ] l n[ € €k l ] d¿ ] € d € ] \ f ]  d j ¿ ] n ] l d ~ h [ \k ` \ ^ ` l j d ¼ ½ ” “ ” “ ™ § Ž ‘ ’ “^ Œ a ¨ © ª «‘ ’ •¬ ­® ¯ “ ” “ ™ § ›¥ ° ° “ “ ’ • ¬ “ —¬ ² ’ “ š • ² “ š ¹ “¬ • ³ ™‘ ­¬ £

Figure

Fig 7:  Short and long term effects of detergents  on phosphorylation (from [γ- 32 P]ATP) of Drs2p-Bad

Fig 7:

Short and long term effects of detergents on phosphorylation (from [γ- 32 P]ATP) of Drs2p-Bad p.170
FIGURE 2. Characterization of P2 and P3 membranes from yeast co-ex- co-ex-pressing Drs2p-Bad and Cdc50p-His 10

FIGURE 2.

Characterization of P2 and P3 membranes from yeast co-ex- co-ex-pressing Drs2p-Bad and Cdc50p-His 10 p.174
FIGURE 5. Orthovanadate or fluoride compound inhibition of phospho- phospho-rylation (from [g- 32 P]ATP) of Drs2p-Bad in P3 membranes

FIGURE 5.

Orthovanadate or fluoride compound inhibition of phospho- phospho-rylation (from [g- 32 P]ATP) of Drs2p-Bad in P3 membranes p.176
FIGURE 8. Turnover-dependent dephosphorylation of Drs2p-Bad either in membranes or in presence of various detergents

FIGURE 8.

Turnover-dependent dephosphorylation of Drs2p-Bad either in membranes or in presence of various detergents p.178
FIGURE 9.Presence of PtdIns(4)P is required to allow PS to stimulate turn- turn-over-dependent dephosphorylation of Drs2p in excess DDM.D 1 P3  sam-ples containing 0.5 mg of protein/ml were first solubilized with 5 mg of DDM/ml supplemented in some cases w

FIGURE 9.Presence

of PtdIns(4)P is required to allow PS to stimulate turn- turn-over-dependent dephosphorylation of Drs2p in excess DDM.D 1 P3 sam-ples containing 0.5 mg of protein/ml were first solubilized with 5 mg of DDM/ml supplemented in some cases w p.179

References

Related subjects :