TOXICITE DE L OCHRATOXINE A. 3. EFFETS PENDANT LES STADES INITIAUX DE LA GESTATION CHEZ LE RAT

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Submitted on 1 Jan 1978

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TOXICITE DE L’OCHRATOXINE A. 3. EFFETS PENDANT LES STADES INITIAUX DE LA

GESTATION CHEZ LE RAT

J. Moré, P. Galtier, M. Alvinerie, Nicole Brunel-Dubech

To cite this version:

J. Moré, P. Galtier, M. Alvinerie, Nicole Brunel-Dubech. TOXICITE DE L’OCHRATOXINE A. 3.

EFFETS PENDANT LES STADES INITIAUX DE LA GESTATION CHEZ LE RAT. Annales de

Recherches Vétérinaires, INRA Editions, 1978, 9 (1), pp.169-173. �hal-00900988�

TOXICITE DE L’OCHRATOXINE A

3. EFFETS PENDANT LES STADES INITIAUX DE LA GESTATION CHEZ LE RAT

J. MORÉ

P.

GALTIER M. ALVINERIE

Nicole BRUNEL-DUBECH

Station de

Pharmacologie-Toxicologie,

1.N.R.A., 180, chemin de Tournefeuille, 31300 Toulouse, France.

Summary

OCHRATOXIN A TOXICITY. 3. EFFECT DURING THE EARLY GESTATION IN THE RAT.―

Ochratoxin A administered

by gastric tubing

^to

pregnant

^{rats at}

day

^{2 after}

mating

^increases

the number of resorbtion sites. A

high

^{level of}

mycotoxin

^{was found in the}

plasma

^of females and in the

embryos (up

^to 5.6 p. cent of the total administered

doses).

At sacrifice time

(day

^{10 after}

mating)

^no

morphological

^{defect was observed in the}

embryos.

Introduction.

Depuis

^{les travaux} de Purchase et

Théron (1968)

^{et ceux} de Galtier et al.

(1974)

^on connaît la toxicité

aiguë

de l’ochratoxine A chez le rat et la souris adultes. Dans un

article

précédent (Moré

^et

Galtier, 1974)

^nous

avons montré les effets de cette substance

sur les foetus de rats et notamment ses pro-

priétés tératogènes qui

confirment les résul- tats obtenus dans une autre

espèce

de labo- ratoire, la

souris, après

administration intra-

péritonéale

de toxine

(Hayes

^et

al., 1974).

Dans le

présent

^{travail nous nous} proposons

d’envisager

d’une

part

^l’action et, d’autre

part,

le devenir de l’ochratoxine A chez des rates

gestantes

^et leurs

embryons

^{à la suite} d’un traitement

ponctuel

réalisé avant l’im-

plantation

des

blastocystes

^{dans l’utérus.}

Matériel et

techniques.

Les animaux.

Nous avons utilisé 69 rates

vierges

^Wistar élevées conventionnellement. D’un

poids

moyen de 273 ± 5 g, elles ont été

réparties

à raison de 3 par cage, abreuvées et nourries ad libitum

(aliment complet

d’entretien

U.A.R.,

A

304).

Après

randomisation des

traitements,

^les animaux ont été

répartis

^{en 3 lots de 23.}

La date de la saillie a été confirmée par la

pratique journalière

^{des frottis}

vaginaux

(coloration

^de

Schorr).

^Le

jour

^zéro

^étant

celui du

co’it ;

les animaux ont tous été sacrifiés au dixième

jour

^{de la}

gestation.

La toxine.

L’ochratoxine A cristallisée a été obtenue à

partir

d’une souche

d’Aspergillus

^ochraceus Wilhelm isolée de

fourrages

contaminés et

cultivée

sur blé

(Galtier

^{et Le}

Bars, 1973 ; Galtier,

¹⁹⁷⁴

a).

La

mycotoxine

^a été dissoute

sous forme de sel de sodium dans une

solution _aqueuse

isotonique

^de

NaHC0 3 (14 g/1).

Le traitement.

Les doses, choisies en fonction de la dose

tératogène (lot

^{A : 5}

mg/kg

et lot B : 10

mg/kg)

^ont été administrées en une

seule fois étant donné la lenteur d’élimination et l’accumulation de l’ochratoxine A

(Moré

^et

Galtier, 1975).

Tous les animaux ont reçu la

drogue

par

tubage gastrique

sous un vo- lume de

0,5

ml pour 200 _{g de}

poids

^{vif. Les}

sujets

^{du lot témoin}

(lot T)

^{ont reçu une}

quantité

^de bicarbonate

(14 g/1) équivalente

à celle des individus

intoxiqués

^de

poids identique.

Pesée

des animaux.

Les femelles sont

pesées

^le

jour

^{du traite-}

ment

(J2 post coïtum)

^{et le}

jour

du sacri- fice

(J10

post

coïtum).

On calcule _pour cha-

P

que lot le

rapport

^{- X 100 où Po}

repré-

Po

sente le

poids

^au

jour

du traitement et P le

poids

^au

jour

du sacrifice.

Les

prélèvements.

Les femelles anesthésiées à l’éther sont

laparotomisées. Après prélèvement

^{de 5 ml}

de sang dans l’aorte

abdominale,

l’ovario-

hystérotomie

^est

pratiquée.

^Les

ovaires,

sé-

parés

^des

oviductes,

^sont examinés au

stéréomicroscope

^et les _corps

jaunes

^sont

comptés.

^Les

embryons

^sont extraits des utérus. Ces derniers sont immédiatement traités par la

technique

^de Salewski

(1964)

afin de dénombrer les sites

implantatoires ;

et par là

même

d’en déduire le nombre de

résorptions.

^{Nous avons} pu ^ainsi calculer les taux de

résorption : (nombre

de

résorptions/

nombre

d’implantations)

^X

100 ; d’implanta-

tions :

(nombre d’implantations

^{/ nombre de}

corps

jaunes)

^X

100 ;

et de viabilité :

(nom-

bre

d’embryons

viables / nombre

d’implan-

tations)

X 100. La

centrifugation

du sang des femelles

permet

^de recueillir le

plasma qui

^{est aussitôt}

congelé (―30°C)

ainsi que les

embryons

^{en vue} du

dosage

^ultérieur

de l’ochratoxine A.

Dosage

de l’ochratoxine A.

Plasma et

embryons

^{sont extraits au}

Poly-

tron par l’éther

diéthylique après

^acidifica-

tion à

pH

2. La

phase organique

^des

broyats

est

séparée

par

centrifugation (6000

^tr/mn

X 10

mn)

^{suivie d’une}

évaporation

^sous vide.

Une fraction

aliquote

^est

déposée

^{sur cou-}

che mince

(gel

^de

silice,

Merck réf.

5721). ¡.

Après migration

^{dans le}

système : toluène,

acétate

d’éthyle,

^acide

formique (5:4:1.,

v/v/v)

les

spots

d’ochratoxine A sont élués par 4 ml d’une solution de bicarbonate

0,5

^M

(Galtier,

1974

b).

La

quantification

^{est effec-} tuée à l’aide d’un

spectrofluorimètre

^Perkin-

Elmer MPF 3

(À.

excitation = 380 nm ;

émission

⁼ 440

nm).

Analyse

des résultats.

Les différents résultats ont été traités soit par

analyse

de variance

(test

de F ou t de

Student),

soit par le coefficient de corré- lation des rangs

.(r’

de

Spearman)

^{ou le test}

de Kruskal-Wallis

(variables

^non

paramé- triques)

selon les

suggestions

^{de Mc Cau-}

ghran

^et Arnold

(1976).

Résultats.

- Le

poids

moyen des femelles ^au

jour

du traitement

(Po)

^{est de 269 ±} 4 g pour les

témoins,

de 270 ± 4 g pour le lot A et de 275 ± 6 _{g pour} le lot B. Aucune différence

significative

^n’existe entre les trois lots d’ani- maux

(test

^de

F).

^{Par contre, au}

jour

^du

sacrifice,

le

poids

moyen

(P)

des femelles saillies accuse une baisse sensible dans les lots d’animaux traités par

rapport

^{au lot té-}

P

moin. L’évolution du

rapport

^{- X 100 est} Po

illustré

par la

figure

^{1. Au}

jour

du sacrifice les trois lots diffèrent

significativement,

^non

seulement dans leur ensemble

(P

< 1

%),

mais aussi deux à deux

(A + B H T . P < 1 % ; A - B : P < 1 %). ).

- Le

pourcentage

de femelles saillies varie de 86

%,

pour les

témoins,

à 76 % pour le lot

B ayant

reçu la dose la

plus

^forte

(10 mg/kg).

Le lot A

(5 mg/kg) présente

un taux intermédiaire

(85 %).

- Les nombres moyens de corps

jaunes, d’implantations

^et

d’embryons viables,

ainsi que les taux moyens

d’implantation

^{et de} viabilité sont

consignés

dans le tableau 1.

Aucune différence

statistiquement significa-

tive n’a pu être mise en évidence lors de la

comparaison

^{de ces} moyennes. Par contre les moyennes concernant les taux de

résorp-

tion diffèrent

significativement

^{à 10 % avec}

un H’

(test

de

Kruskal-Wallis)

^{trouvé de}

5,90 (la

^limite

supérieure

^{de la table donnant}

H’ = 5,99

à

5 %). ).

- Dosage

de l’ochratoxine dans le

plas-

ma des femelles et dans les

broyats

d’em-

bryons.

Les résultats sont

consignés

dans le ta- bleau 2.

La

comparaison

des concentrations

plas- matiques

^en ochratoxine A montre une dif- férence

significative (P

<

0,001)

^entre les lots A et B

(test

^de

t).

Il en est de même pour la teneur ^en

mycotoxine

^des

broyats d’embryons.

^{En outre on ne} trouve pas de corrélation

(test r’)

^entre les teneurs

plas- matique

^et

embryonnaire

du lot

B,

tandis

qu’une

corrélation existe entre ces deux données pour le lot A

(P

<

0,05).

Enfin les

pourcentages

retrouvés de la dose totale administrée

(D.T.A.)

^{sont très voisins} dans les deux lots.

Discussion.

La perte ^de

poids

des animaux consé- cutive à l’administration d’ochratoxine A est connue

(Galtier

^et

al., 1974 ;

^{Brown et}

al., 1976),

mais ^aucune

explication

^{n’a été four-}

nie à ce

jour

pour

expliquer

^ce

phénomène

sans doute fort

complexe.

Aussi ^nous bor- nerons-nous à le constater.

En ce

qui

^concerne les

pourcentages

de femelles

saillies,

le nombre _{de corps}

jaunes,

le nombre

d’ovoimplantations,

^les moyennes

très voisines dans les trois

lots,

ne diffèrent pas

statistiquement

^au

risque

^{de 5 %. Il en}

est de même du nombre

d’embryons

^viables.

En outre, ^ces derniers ne

présentent

^aucun

trouble

morphologique.

L’analyse

des taux de

résorption

^montre

que les moyennes évoluent en fonction des doses. Le test

statistique

^{utilisé ne}

permet

pas de conclure à une différence

significative

au seuil de 5 %. Nous admettrons

cependant qu’il

y ^{a une} forte tendance à l’effet traite- ment sur le

phénomène

considéré. Il semble donc que dans ^nos conditions

expérimen- tales,

l’ochratoxine A tende à

augmenter

^le nombre de

résorptions

^{dès le début de la}

gestation.

^Ce

phénomène

s’accentue _{par la} suite comme nous avons eu l’occasion de le

signaler (Moré

^et

Galtier, 1974).

La, présence

^de

mycotoxine

dans les em-

bryons

montre

qu’elle

franchit la barrière

materno-embryonnaire.

Les

quantités

^retrou-

vées de la D.T.A. sont élevées

comparative-

ment à celles obtenues par Galtier

(1974 c).

En

effet,

pour ^une seule

injection

^de

10

mg/kg

^{de toxine,} cet auteur a pu observer 96 heures

plus

tard des valeurs allant de

0,1

%

(cceur)

^à

0,9

%

(foie)

de la D.T.A.

Or,

si l’on considère _{que le}

blastocyste

^{se fixe à}

la

paroi

^{utérine vers} le

cinquième jour post-

coïtum et

qu’avant

^la nidation les

échanges materno-blastocystaires

^{sont assez}

réduits,

il reste environ 96 heures à

l’embryon

pour accumuler une

quantité importante

^{de toxine.}

De

plus,

^les

échanges mère-embryon

^com-

mencent à se

réaliser,

chez le rat, surtout au moment de l’invasion du cône ecto-

placentaire

par les lacunes

sanguimater-

nelles

(huitième jour).

L’ochratoxine A atteint donc

l’embryon,

mais les modalités de son transfert

(diffusion, transport actif,

activité des cellules

ectoplacentaires,

rôle de la vési- cule

ombilicale...)

^restent obscures et

singu-

lièrement au cours des stades considérés En

effet,

la

question

n’est pas

simple

^et l’on sait que pour ^une même substance

plusieurs

mécanismes de transfert

peuvent

entrer ^en

jeu

simultanément ou successive- ment. De

plus,

^{il faut}

également

^considérer l’état dans

lequel

^{se trouve la} molécule. On sait que l’ochratoxine A

injectée

^dans

l’orga-

nisme se lie pour ^une

part importante

^aux

protéines plasmatiques,

^tandis

qu’une

^autre

partie

^{reste libre}

(Gallier,

¹⁹⁷⁴

b).

La corrélation entre les teneurs

plasma-

tiques

^et

embryonnaires

^en ochratoxine A dans le lot A infirme les

résultats

obtenus

avec le lot

B ayant

reçu la

plus

^{forte dose.}

Peut-être existe-t-il un

phénomène

^{de satu-}

ration au niveau des mécanismes de trans-

port

dans le cas des animaux

ayant

^{reçu la}

dose la

plus

^élevée

(lot B).

^Ainsi

s’expli- querait,

^en

partie,

la similitude des pourcen-

tages

^retrouvés de la D.T.A. dans les deux lots.

Nous devons donc constater que

malgré

l’atteinte des femelles

(perte pondérale

^et

persistance

de la toxine dans le

plasma), malgré

aussi les

pourcentages

d’ochratoxine retrouvés de la D.T.A. chez les

embryons

et

malgré

enfin une dose de toxine

proche,

dans le lot

B,

de la DMT

(11,31 mg/kg

per os ; Galtier et

al., 1974),

^le

développe-

ment

embryonnaire

^n’est que faiblement _per- turbé. Nous pensons

qu’au

^stade

ontogé- nique

^considéré que l’absence de troubles de nature

morphologique peut indiquer qu’il

y ^{a eu} soit restitution ad

integrum

de ter-

ritoires

blastocystaires éventuellement lésés,

soit que l’atteinte n’est _pas

morphologique

mais

peut

^{être due à une}

perturbation

^bio-

chimique

^ou

métabolique qui agira

^{à retar-} dement

étant

donné le

stockage

^du

produit

dans le

plasma

maternel et surtout dans les tissus

embryonnaires.

Accepté

pour

publication,

^{le 16 décembre}

1977.

Remerciements.

Les auteurs remercient le docteur vétéri- naire R.

Camguilhem, responsable

^{des ani-}

maleries,

Mlle G. Larrieu

qui

^{nous a fourni} l’ochratoxine A et MM. Dantzer et Mormède pour leur aide concernant

l’interprétation

^sta-

tistique

des résultats.

Résumé

L’ochratoxine A a

été administrée

_par

tubage gastrique ^à

^{des rates}

gestantes

avant l’im-

plantation (jour 2, post coïtum).

^Il semble que ^la toxine, aux doses utilisées

(5 mg/kg

et 10

mg/kg)

^{tende à}

augmenter

le nombre de

résorptions embryonnaires.

^De

plus,

^une pro-

portion élevée

de la

quantité

^de

drogue

administrée a été

retrouvée

dans les femelles et dans les

embryons

^{de 10}

jours (jusqu’à 5,6 %).

On n’a pas

observé,

^au moment du sacrifice

(J10 post coïtum), d’altérations morphologiques

^des

embryons.

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