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Mr. TEMAGOULT Mahmoud
Laboratoire de Biochimie Génétique et Biotechnologies Végétales.
Département de Biologie et Ecologie Végétale.
mtemagoult@umc.edu.dz
La génétique moléculaire étudie la nature du matériel génétique, c'est à dire sa propagation, sa variation et son expression.
Elle essaye de mettre en évidence le lien entre
le support de l’hérédité et le phénotype.
Principales techniques d’analyse de la variation du matériel génétique:
• Techniques d’analyse par amplification.
• Techniques d’analyse par hybridation.
• Techniques d’analyse par séquençage.
1- Techniques d’analyse par amplification :
1- 1- La PCR : Polymerase Chain Reaction
Amplification spécifique d’un fragment d’ADN par l’utilisation d’une paire d’amorces complémentaires à des régions du génome proches l’une de l’autre. Une PCR se compose de 20 à 30 cycles environs dans lesquels alternent dénaturation/ hybridation des amorces et synthèse de nouveau brin par une ADN polymérase thermorésistante (la Taq polymérase).
A chaque cycle, la PCR double la quantité d’ADN du cycle précédant.
1- 2- La RT-PCR : Reverce Transcription PCR
La RT-PCR se compose de deux réactions :
Une première transcrit l’ARNm en ADN complémentaire simple brin (ADNc) par le biais d’une retrotranscriptase.
La deuxième est une PCR conventionnelle qui utilise comme matrice l’ADNc issu de la première réaction.
2- Analyse par hybridation : Analyse de Southern
Portant le nom de son inventeur, l’analyse de Southern consiste à repérer une séquence d’ADN génomique à l’aide d’une autre séquence qui lui est complémentaire appelée « sonde ». Elle repose sur le principe de dénaturation – hybridation de deux molécules d’ADN.
3- Analyse par séquençage :
Le séquençage reste souvent l’étape ultime d’une analyse moléculaire et permet de connaitre la suite des bases d’un segment d’ADN.
