IMPORTANCE DU DOSAGE DE L’HEMOGLOBINE ET DE l’HEMATOCRITE DANS LE DIAGNOSTIC DE L’ANEMIE CHEZ LES ENFANTS DE 0 A 10 ANS A LA PEDIATRIE DE L’HOPITAL DE MENONTIN

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Superviseur :

Dr. Adolphe TOPANOU

Pharmacien biologiste et Industriel Professeur Assistant d’hématologie, d’hémostase et de pharmacologie à l’EPAC/UAC

Tuteur de stage : M. Godefroy ZINSOU

Biotechnologiste de laboratoire REPUBLIQUE DU BENIN

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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI

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DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE OPTION: ANALYSES BIOMEDICALES

Rapport de stage de fin de formation pour l'obtention du diplôme de licence Professionnelle

THEME :

Réalisé et présenté par : Sous la direction de :

Jocelyne M.G. ESSOU

IMPORTANCE DU DOSAGE DE L’HEMOGLOBINE ET DE l’HEMATOCRITE DANS LE DIAGNOSTIC DE L’ANEMIE CHEZ LES ENFANTS DE 0 A 10 ANS A LA

PEDIATRIE DE L’HOPITAL DE MENONTIN

Président du Ju ry : Dr. Joseph FLENON : FSS/UAC

Membres du Jury:

Dr. Adolphe TOPANOU : EPAC/UAC Dr. Lordson DOSSEVI : EPAC/UAC ANNEE ACADEMIQUE 2013-2014

7^ème promotion

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REPUBLIQUE DU BENIN

………

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI

………

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

………..

DIRECTEUR

Professeur Félicien AVLESSI

DIRECTEUR ADJOINT CHEF SERVICE DES ETUDES ET DE LA PEDAGOGIE

Docteur Clément BONOU CHEF DE DEPARTEMENT

Docteur Julien SEGBO 7^ème Promotion

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ii

LISTES DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

OPTION : ANALYSES BIOMEDICALES (GBH-ABM) PERIODE- ACADEMIQUE : (2013-2014)

I-ENSEIGANTS PERMANENTS

N° NOM ET PRENOMS MATIERES ENSEIGNEES

01 ADISSODA Cyrille Anglais 02 AHOYO Théodora

Angèle

Microbiologie Générale et Médicale 03 AIKOU Nicolas Biochimie

04 AKPOVI Casimir Physiologie Cellulaire

05 ALITONOU Guy Chimie Générale et Organique 06 ANAGO Eugénie Biochimie structurale

07 ANAGONOU Sylvère Education Physique et sportive 08 ATCHADE Pascal Parasitologie

09 AVLESSI Félicien Chimie Générale et Organique 10 BANKOLE Honoré Bactériologie Générale et Appliquée 11 DOSSOU Cyriaque Techniques d’Expression et Méthodes de

communication

12 HOUNSSOSSOU Hubert Biométrie et Anatomie Générale 13 LOKO S. Frédéric Biochimie Clinique

14 LOZES Evelyne Immunologie Générale

15 SECLONDE Hospice Immuno-Hématologie et Transfusion Sanguine, Esprit de Leadership

16 SEGBO A .G. Julien Biologie Cellulaire, Biochimie Métabolique et Biologie Moléculaire

17 SOCLO Henri Chimie Organique

18 TOPANOU Adolphe Hématologie, Hémostase et Pharmacologie 19 YANDJOU Gabriel Technique d’Expression et Méthodes de

communication

20 YOVO K .S. Paulin Physiologie Humaine, Pharmacologie et Toxicologie

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iii

II- ENSEIGNANTS VACATAIRES

N° NOM ET PRENOMS MATIERES ENSEIGNEES

01 ABLEY Sylvestre Déontologie Médicale

02 ADOMOU Alain Physique

03 AGBANGLA Clément Génétique Moléculaire

04 AGOSSOU Gilles Législation et Droit du Travail 05 AKOGBETO Martin Entomologie Médicale

06 BINAZON Claude César Soins Infirmiers et Phlébotomie

07 DARBOUX Raphael Histologie Spéciale 08 DESSOUASSI Noel Biophysique

09 DOSSEVI Lordson Techniques Instrumentales 10 FOURN Léonard Santé publique

11 HOUNNON Hyppolite Mathématiques 12 SENOU Maximin Histologie Spéciale

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DEDICACES

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Je dédie ce travail

Au Père Tout Puissant, toi qui m’a créée et donnée la force de réaliser ce travail. Honneur et gloire à toi pour les

siècles des siècles. Amen !

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REMERCIEMENTS

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vi

REMERCIEMENTS

L’achèvement de ce travail n’a été possible que grâce aux efforts conjoints de plusieurs personnes envers lesquelles je tiens très sincèrement à présenter mes vives reconnaissances notamment :

 A mon superviseur, le Dr Adolphe TOPANOU, malgré vos multiples occupations, vous m’avez acceptée parmi vos nombreux étudiants pour mon encadrement. Recevez ici ma profonde reconnaissance ;

 Au Dr Georges OFFRIN,Directeur de l’Hôpital de Mènontin,et ses collaborateurs. Sincères reconnaissances

 A tout le personnel du Laboratoire de l’Hôpital de Mènontin, Particulièrement au chef service du laboratoire Mr Aurélien KANFON et Mr Eustache ACLINOU pour leur chaleureux accueil, leurs conseils et l’ambiance harmonieuse dans laquelle nous travaillions chaque jour

 A mon tuteur, Mr Godefroy ZINSOU, en reconnaissance de tout ce que vous avez fait pour m’aider dans le cadre de mon travail.

Profondes gratitudes

 Aux responsables de la pédiatrie et de la médecine de l’Hôpital de Mènontin et à tous leur personnel,

Votre accueil et votre collaboration nous ont été d’un très grand intérêt.

 Aux enseignants du Département de Génie de Biologie Humaine (GBH),

Tous nos remerciements pour la qualité et la réussite de notre formation.

 A vous Dr Jean Robert KLOTOE, Dr Victorien DOUGNON et à vous Brice FANOU, Lauris FAH, Hornel KOUDOPKON qui n’ont

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vii

ménagés aucun effort pour nous soutenir durant notre formation. Que l’Eternel veille sur vous et votre maisonnée.

 A tout le personnel enseignant du Département de Génie biologique, pour les précieuses connaissances que vous nous avez transmises durant notre formation. Infiniment Merci ;

 A tous mes camarades de la 7ème promotion, brillante carrière.

 A mon père, Jean-PierreESSOU ; pour le soutien moral, financier et spirituel sans cesse renouvelé. Tous tes efforts à faire de moi un cadre pour mon pays ont porté leurs fruits. Reçois par ce travail un hommage mérité. Puisse Dieu te bénir et t’accorder une longue vie ;

 A ma mère, Angèle Félicienne HAZOUME pour les sacrifices consentis, je dédie ce travail. Puisse Dieu te bénir et t’accorder une longue vie ;

 A mes frères et sœurs, Merlin, Inès, Chrystelle, ceci est le témoignage de ma profonde gratitude et de mon affection fraternelle ;

 A tous mes cousins, cousines, oncles et tantes pour toute votre affection ;

 A tous ceux qui me sont chers ; sincères gratitudes pour tout l’amour et la pensée positive que vous ne cessez de témoigner à mon égard ;

 Au Dr Joseph LANWASSONOU et son épouse, pour m’avoir toujours aidée et assistée durant ma formation professionnelle ;

 A tous ceux qui de près ou de loin, ont contribué à la réalisation de ce travail. Que l’Eternel vous bénisse et vous garde.

 A Mr HilarionPATINVO et son épouse pour m’avoir toujours aidée et assistée durant ma formation professionnelle

Jocelyne G .M. ESSOU

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HOMMAGES

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A son Excellence Monsieur le Président du Jury

C’est un grand honneur que vous nous faites en acceptant de présider le jury chargé d’apprécier notre travail. Cher Président de jury, par vos observations nous espérons pouvoir améliorer la qualité de ce travail. Nous vous prions de croire en l’expression de nos profonds respects et nos vives gratitudes ;

Aux Honorables membres du Jury

Nous sommes touchés par l’honneur que vous nous faites en acceptant de siéger dans notre Jury de soutenance de rapport de stage de fin de formation. Soyez rassurés que vos conseils et remarques nous aiderons à parfaire ce travail. Veuillez trouver ici, l’expression de nos profondes gratitudes et de nos sincères considérations.

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LISTES DE SIGLES ET ABREVIATIONS EPAC: Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi ABM: Analyses Biomédicales ;

OMS: Organisation Mondiale de la Santé Hte: Hématocrite

Hb:Hémoglobine

VGM: Volume Globulaire Moyen

TCMH: Teneur Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine

CCMH: Concentration Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine NFS: Numération Formule Sanguine

EDTA: Ethylène Diamine Tétra-Acétique HM : Hôpital de Mènontin

GR : Globules Rouges ; O2: Dioxygène ;

g/dl : Gramme par décilitre ; Pg : Picogramme ;

fl : femtolitre ;

ADN : Acide Désoxyribonucléique ARN : Acide Ribonucleique

B12 : Cyanocobalanine B9 : acide folique

CSM :Centre de Santé de Mènontin

PRGU : Programme de Réhabilitation et de Gestion Urbaine AID : Association Internationale du Développement

AMSM : Association Médico-sociale de Mènontin INMES : Institut National Médico-sanitaire

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LISTES DES FIGURES

Figure1: Moléculed’hémoglobine ... 14

Figure 2 : Structure de l’Hème, Fer protoporphyrine ... 15

Figure3 : Prévalence de l’anémie dans la population ... 31

Figure 4 : Prévalence de l’anémie en fonction de l’âge ... 32

Figure5 : Corrélation entre l’hémoglobine et l’hématocrite ... 34

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LISTE DES TABLEAUX

Tableau I: Présentation des données recueillies ... 29 Tableau II: Répartition des patients suivant le sexe et les tranches d’âges ... 30 Tableau III: Répartition des taux d’hémoglobines et des valeurs de l’hématocrite par tranches d’âge ... 32 Tableau IV: Répartition de l’échantillonnage suivant l’âge en fonction de l’hémoglobine et l’hématocrite ... 33 Tableau V: Répartition des patients suivant le sexe en fonction de la valeur de l’hémoglobine ... 34 Tableau VI: Répartition des patients suivant le sexe en fonction de la valeur de l’hématocrite ... 34

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RESUME

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RESUME

L'anémie est une anomalie de l'hémogramme caractérisée par une diminution de la concentration en hémoglobine intra-érythrocytaire. Cette diminution entraîne souvent une baisse parallèle du nombre de globules rouges ainsi que de l'hématocrite. Elle touche particulièrement les enfants. Son diagnostic peut se faire de plusieurs manières dont le diagnostic clinique fait par le médecin et le diagnostic biologique fait au laboratoire. Dans le cadre de notre stage de fin de cycle qui a eu lieu au laboratoire de l’Hôpital de Mènontin, nous nous sommes proposé de déterminer l’importance du dosage de l’hémoglobine et de l’hématocrite dans le diagnostic de l’anémie chez les enfants de 0 à 10 ans reçus à la pédiatrie. La présente étude qui a pris en compte 500 enfants de 0 à 10 ans, a révélé un effectif de 367 enfants anémiés, soit un taux de 73,4% de l’échantillonnage et 133 enfants non anémiés soit un taux de 26,6 %.

Notre objectif général pour ce travail est de déterminer l’intérêt du dosage de l’hémoglobine et de l’hématocrite dans le diagnostic de l’anémie. Pour atteindre cet objectif nous avons réalisé l’Hémogramme sur les échantillons à l'aide de l'automate hématologique Sysmex KX 21N. Ensuite nous avons diagnostiqué les cas d'anémie en nous basant d'une part sur les valeurs du taux d'hémoglobine et d'autre part sur l'hématocrite.

Les résultats obtenus ont révélé 52,8% de sujets anémiés en se basant sur le taux d'hémoglobine contre 39,4% lorsqu'on considère les valeurs de l'hématocrite. On remarque que les enfants de la tranche d’âge de 0à 3 ans sont les plus touchés dans la mesure où l’étude a dénombré 75enfants souffrant d’anémies sévères soit un taux de 15%.

Mais notons qu'avec la forte corrélation existant entre l'hémoglobine et l'hématocrite nous pouvons proposer pour le diagnostic de l'anémie que ces deux paramètres soient dosés afin que l'hématocrite serve d'indice de contrôle de l'hémoglobine pour que des résultats soient encore plus fiables.

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ABSTRACT

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ABSTRACT

Anemia is an anomaly hemogram the characterized by a reduction in the concentration in haemoglobin intra-erythrocytic hemoglobin. This reduction often involves a parallel fall amongst red globules as well as hematocrit. It touches the children particularly. Its diagnosis can be made in several ways in which the clinical diagnosis made by the doctor and the laboratory diagnosis made at the laboratory. Within the framework of our internship of end of cycle which took place at the laboratory of the Hospital Mènontin, we proposed to determine the importance of the proportioning of haemoglobin and the hematocrit in the diagnosis of anemia in the children 0-10 years received with pediatrics. The present study took into account 500 children 0-10 years, revealed a man power of 367 weakened children, either a rate of 73.4% of sampling and 133 children not weakened or a rate of 26.6%.

Our general objective for this work is to determine the interest of of the proportioning of haemoglobin and the hematocrit in the diagnosis of anemia. To achieve this goal we carried out Hemogram on the samples using the hematologic automat Sysmex KX 21N. Then we diagnosed cases of anemia by basing us on the one hand on the values of the rate of haemoglobin and on the other hand on the hematocrit

The got results revealed 52.8% of subjects weakened while being based on the rate of haemoglobin against 39.4% when the values of the hematocrit are considered. It is noticed that the children of the age bracket from 0-3 years are touched insofar as the study counted 75 children suffering from severe anaemia is a rate of 15%.

But let us note that with the strong correlation existing between haemoglobin and the hematocrit we can propose for the diagnosis of anemia that these two parameters are proportioned so that the hematocrit serf of index of control of haemoglobin so that results are even more reliable.

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SOMMAIRE

Introduction ... 01

Première Partie : Synthèse bibliographique ... 05

Deuxième Partie : Cadre, matériels et méthodes d’étude ... 21

Troisième Partie : Résultats et discussions ... 30

Conclusion ... 38

Suggestions et recommandations ... 39

Références bibliographiques ... 40

Annexes ... 43

Tables des matières ... 46

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INTRODUCTION

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Importance du dosage de l’hémoglobine et de l’hématocrite dans le diagnostic de l’anémie chez les enfants de 0 à 10 ans à la pédiatrie de l’hôpital de Mènontin

Réalisé par Jocelyne M.G. ESSOU Page 2

INTRODUCTION

L'anémie constitue un vaste problème de santé publique associé à un risque accru de morbidité et de mortalité, surtout chez les enfants et les personnes âgées. Il s’agit de l’une des maladies les plus répandues dans les pays en développement en général et particulièrement grave en Afrique noire où la prévalence est relativement élevée. Elle comporte de graves conséquences pour la santé et le bien-être ainsi que des répercussions sociales et économiques [5]. Parmi les personnes les plus vulnérables à cette maladie se trouvent les enfants en raison de causes multiples, à la fois nutritionnelles (carences en vitamines et en minéraux) et non nutritionnelles (infections), qui surviennent fréquemment en parallèle. Selon l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS), l’anémie est définie par une baisse de la concentration de l’hémoglobine circulante en dessous des valeurs limites considérées comme normales et fixées en fonction de l’âge, du sexe et d’un état physiologique particulier[18].L’anémie est également définie comme une diminution de la qualité d’hémoglobine fonctionnelle disponible dans la circulation sanguine avec ou sans diminution du nombre de globules rouges[4]. Elle entraîne des conséquences sur la santé, ce qui se justifie par ses répercussions sociales et économiques.

L’anémie est une maladie très ancienne, une anomalie de l’hémogramme caractérisée par une diminution de la concentration en hémoglobine intraérythrocytaire [1]. Elle demeure cependant un sujet d’actualité à cause des problèmes que pose son contrôle ainsi que son diagnostic dans les pays sous-développés en particulier le nôtre. L’anémie est souvent définie par une diminution de la quantité d’hémoglobine contenue dans un volume de sang [5]. Selon l’OMS, l’anémie fait partie des quinze critères de gravité du paludisme.

(22)

L’anémie est un des problèmes de santé publique à l’échelle mondiale. Elle affecte tous les groupes d’âge avec une prédominance chez les enfants de moins de 5 ans. Ce sont les pays en voie de développement qui connaissent les prévalences les plus élevées. D’après les chiffres de l’OMS, l’anémie en Afrique toucherait 50% des enfants de moins de 4 ans et 45 % des enfants d’âge scolaire dans la population mondiale. KAu Bénin, l’anémie reste une cause importante de recours au système de santé et représente la deuxième cause d’hospitalisation dans nos formations sanitaires avec un taux de 4,1%

de la pathologie notifiée en 1998, tous âges confondus [3].

L’Hôpital de Mènontin enregistre une forte prédominance de l’anémie chez les enfants de 0 à 10 ans qui apparaissent comme une couche vulnérable. La présente étude s’inscrit dans ce cadre et vise à déterminer : « L’Importance du dosage de l’hémoglobine et de l’hématocrite dans le diagnostic de l’anémie chez les enfants de 0 à 10 ans à la pédiatrie de l’Hôpital de Mènontin »

Dans le cadre de ce travail, nos objectifs sont les suivants :

OBJECTIF GENERAL

Déterminer l’intérêt du dosage de l’hémoglobine et de l’hématocrite dans le diagnostic de l’anémie chez les enfants de 0 à 10 ans à la pédiatrie de l’Hôpital de Mènontin.

Pour y parvenir nous avons fixé les objectifs spécifiques suivants : OBJECTIFS SPECIFIQUES

- Diagnostiquer l’anémie à partir du dosage de l’hémoglobine (Hbe) et de la mesure de l’hématocrite (Hte) chez les enfants de 0 à 10 ans consultant à l’Hôpital de Mènontin.

- Déterminer la corrélation entre le taux de l’hémoglobine et de l’hématocrite dans la prise en charge de l’anémie.

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Ce document qui présente nos travaux, s’articule autour des points ci-après : - première partie : Généralités;

- deuxième partie : cadre, matériels et méthodes d’étude ; - troisième partie : résultats et discussion ;k8

Au terme de notre travail, nous présenterons une conclusion et des suggestions.

(24)

PREMIERE PARTIE :

Synthèse bibliographique

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1. L’ANEMIE 1-1 Définition

L’anémie est l’un des signes fréquents d’étiologie variée dont la définition repose sur la constatation d’une concentration en hémoglobine inférieure aux taux normaux. L’anémie désigne un déficit en globules rouges dans le sang, ce qui se traduit par la diminution de la concentration en hémoglobine, de l’hématocrite et/ou du nombre d’érythrocytes par rapport aux valeurs normales pour l’âge et le sexe donnés. Au Bénin, l’anémie reste une cause importante de recours au système de santé et représente la 2^ème cause d’hospitalisation avec un taux de 16,2 % de la pathologie notifiée en 2010 tous âges confondus.

Le Larousse médical quant à lui, définit l’anémie comme une diminution du taux d’hémoglobine (pigment rouge assurant le transport de l’oxygène des poumons vers les tissus) du sang [6]. Au cours de l’anémie, il se produit un déséquilibre entre les besoins de l’organisme en érythrocytes et en hémoglobine par rapport à la production de nouveaux globules rouges par la moelle osseuse [6].

Selon Hélène Lord-Dubé et Roselyne L’Italien, l’anémie se définit comme étant la baisse du taux d’Hb circulante; elle s’accompagne souvent d’une baisse du nombre de globules rouges et de l’hématocrite [25].

Selon BERNARD J., LEVY J-P., et al ;(1998) l’anémie est une diminution du taux d’hémoglobine par unité de volume de sang au dessous des valeurs physiologiques [2].

Pour que le taux d’hémoglobine soit normal, il doit y avoir équilibre entre globules rouges produits dans la moelle osseuse et ceux détruits dans la rate.

La production des globules rouges dépend du bon fonctionnement de certains organes et de l’apport adéquat en vitamine B12, B9, C et en fer. Le fer est essentiel à de nombreuses protéines et enzymes de notre organisme. C’est notamment un composé de l’hémoglobine qui est une protéine utilisée par les globules rouges pour transporter l’oxygène.

(26)

1-2 Classification

Les anémies peuvent être classées selon leur étiologie, leur physiopathologie ou leur morphologie érythrocytaire. D’après l‘OMS, l’anémie est classée en 3 niveaux :

- L’anémie est considérée comme sévère si ce taux se situe entre 5g/dl et 7 g /dl

- Elle est modérée si ce taux se situe entre 7,0g /dl et 10 g/dl.

- Et l’anémie est considérée comme légère si ce taux se situe entre 9g/dl et 11g/dl.

Mais la classification morphologique est la plus utilisée du fait qu’elle est basée sur l’observation microscopique et les résultats de l’hémogramme au laboratoire en particulier sur le volume globulaire moyen (VGM) [16].

Ainsi on distingue :

- Les anémies normocytaires : 80-100 fl - Les anémies microcytaires : < 80 fl - Les anémies macrocytaires : >100 fl 1-2-1 Indices érythrocytaires

 VGM = hématocrite (%) x 10⁷/Nombre de Globules Rouges (mm³)

 TCMH = hémoglobine (g /dl) x 10⁷/Nombre de Globules Rouges (mm³)

 CCMH = [hémoglobine (g /dl)/ hématocrite(%)] x100 1-2-2 L’anémie normocytaire

L'anémie normocytaire désigne une anomalie du nombre des globules rouges présents dans le sang, mais dont la taille est normale. Celle-ci peut provenir d’une hémorragie parfois sévère et brutale, des atteintes immunologiques ou à des anomalies de la membrane de l'hémoglobine et d’une insuffisance de fabrication des globules rouges [3].

Dans cette catégorie on distingue

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 Les anémies hémolytiques

 Les anémies post-hémorragiques aiguës ;

 Les anémies par insuffisance médullaire quantitative.

1-2-2-1 L’anémie normocytaire normochrome

Ce genre d’anémie se traduit par une baisse isolée du taux d'hémoglobine sanguine et est souvent due à une insuffisance médullaire (la moelle osseuse ne produit plus assez de globules rouges) : on parle d'anémie centrale arégénérative. Il peut s'agir par exemple d'une atteinte toxique (médicaments, insecticides, etc.) ou physique (irradiation, envahissement par des cellules anormales, etc.) de la moelle [12].

1-2-2-2 Les anémies hémolytiques

C’est un type d’anémie qui est caractérisé par la destruction des globules rouges prématurément dans sang, tandis que leur taux de production demeure normal. Cette destruction appelée hémolyse prématurée est peut être attribuable aux anomalies d’un ou de plusieurs de ses constituants, à la présence de produits toxiques dans le sang, à des infestions (par exemple, la malaria) ou encore être congénitale (anémie à hématies falciformes, thalassémie, etc.) [19]. Elle peut être également provoquée par des autoanticorps anti-globule rouge. On y distingue trois différents types :

 Anémies hémolytiques héréditaires ;

 Anémies hémolytiques acquises ;

 La forme congénitale touche surtout les individus d’origine africaine.

1-2-2-3 Les anémies post-hémorragiques aigues

C’est une anémie qui résulte d’une rupture brutale d’un gros vaisseau sanguin, d’une érosion artérielle ou d’une anomalie de l’hémostase (d’une perte de sang importante survenue après un grave accident, une intervention chirurgicale ou un accouchement, par exemple, peut rapidement causer une anémie). Certains problèmes gastro-intestinaux (un ulcère gastroduodénal, des polypes intestinaux ou un cancer colorectal) peuvent aussi y conduire, mais cette fois en entraînant une légère et constante perte de sang dans les selles (parfois invisible), sur une longue période [16].

(28)

1-2-2-4 Les anémies dues aux maladies chroniques

Elles sont le plus souvent normochromes, normocytaires et régénératives et peuvent survenir en cas d’inflammation ou d’infection persistante. Ce sont des maladies chroniques qui peuvent réduire la quantité de globules rouges en circulation dans le sang. C’est le cas du cancer, de la maladie de Crohn et de maladies inflammatoires comme l’arthrite rhumatoïde. L’insuffisance rénale peut aussi provoquer l’anémie, car les reins sécrètent l’érythropoïétine, l’hormone qui stimule la production des globules rouges. Ceux-ci conservent toute fois leur taille et leur aspect normaux [13].

. 1-2-3 Anémie microcytaire

L'anémie microcytaire est caractérisée par la présence de globules rouges de taille inférieure à la moyenne, d’une fabrication d'hémoglobine insuffisante et d’une diminution du VGM en dessous de 80fl. L'anémie microcytaire peut résulter d'une forte carence en fer dans le sang due à des pertes sanguines régulières, ou la présence d'une inflammation. Elles sont en générale hypochromes, mais dans le cas des maladies chroniques, elles peuvent apparaître normochromes [16].

. 1-2-3-1 Les anémies microcytaires hypochromes

Ces anémies sont définies par la diminution de la concentration en hémoglobine des globules rouges et d’autre part d’une baisse du volume globulaire moyen. Les anémies microcytaires hypochromes peuvent également se voir avec un fer sérique normal : elles sont alors causées par des troubles de l'utilisation de fer dans la synthèse de l'hémoglobine, dans des maladies comme les thalassémies [12].

(29)

1-2-3-2 L'anémie ferriprive

L'anémie ferriprive encore appelée anémie par carence martiale ou sidéropénique, est une anémie due à une carence des réserves en fer de l'organisme. Elle est la forme d’anémie la plus fréquente et la répandue chez l’homme. Les menstruations abondantes, les pertes sanguines digestives et une alimentation pauvre en fer en sont les causes génératrices d’une diminution de l’absorption du fer. L’anémie ferriprive modifie la taille des globules rouges ; celle-ci devient plus petite que la normale [15].

1-2-3-3 La thalassémie

La thalassémie encore appelée maladie de Cooley est l’une des maladies héréditaires les plus répandues dans certains pays du monde. Cette maladie grave qui est liée à une anomalie génétique qui affecte la synthèse de l’une ou l’autre des deux chaînes (la chaîne alpha ou la chaîne bêta) de l’hémoglobine, sans qu’il y ait en général d’anomalie structurelle de ces chaînes. On la retrouve plus fréquemment dans les pays de l’Est méditerranéen et de l’Extrême-Orient où elle touche plus du quart de la population [14]. Selon le type de chaîne affecté, on distingue quatre formes de thalassémie :

 Alpha-thalassémie

 Bêta-thalassémie.

 Delta thalassémie

 Delta bêta thalassémie 1-2-3-4 Anémie sidéroblastique

L'anémie sidéroblastique est un groupe d'anémies très rares dans lesquelles les globules rouges ne peuvent fixer le fer dans l’hémoglobine. Elle provient d'une insuffisance en hème de l'hémoglobine. Il s’agit d’un problème enzymatique d’origine héréditaire ou acquise suite à une inefficacité du mécanisme permettant la fabrication du globule rouge. Par ailleurs, l'anémie sidéroblastique peut aussi être d'origine toxique dans le cadre du saturnisme.

Les globules rouges sont alors de taille plus petite que la normale. [3]

(30)

1-2-3-5 Anémies microcytaires normochromes

Elles sont causées par de nombreuses pathologies chroniques qui peuvent affecter la production des hématies et donc provoquer une anémie légère ou modérée. On distingue entre autres le cancer, le SIDA, l’ulcère gastrique et les chroniques et inflammatoires.

1-2-4 Les anémies macrocytaires

Les anémies macrocytaires (VGM élevé, TCMH élevé, CCMH normal) sont liées à un défaut de synthèse du ADN responsable d'une réduction des divisions cellulaires et d’une prolongation du cycle. Elles renferment deux grands groupes étiologiques : les anémies mégaloblastiques d'origine carentielle (B12 et/ou folates) et les autres étiologies dominées par les états myélodysplasiques primitifs (état pré-leucémique). Elles sont caractérisées par des érythrocytes qui sont plus gros qu’à l’ordinaire appelés des macrocytes. Les causes peuvent provenir des carences en vitamines B12 et/ou B9 dues à un apport insuffisant ou à une mauvaise absorption de celles- ci par l’intestin (anémie de Biermer) et aussi d’un défaut de maturation des cellules sanguines progénitrices dans la moelle osseuse [17].

1-2-4-1 Les anémies mégaloblastiques

Elles sont liées à une carence vitaminique B12 ou folates (en vitamine B9) responsables d'un défaut de synthèse d’ADN lui-même responsable d'une diminution des mitoses, de la prolongation du cycle cellulaire et de la destruction intramédullaire des érythroblastes : la grande taille est liée au maintien des capacités de synthèse d’ARN et des protéines. Elles peuvent survenir en raison d’un apport alimentaire insuffisant en cette vitamine, de sa mauvaise absorption dans l’intestin. L’aspect caractéristique de ces érythroblastes dans la moelle est qualifié de mégaloblastes [17].

1-2-4-2 Les anémies non mégaloblastiques (myélodysplasiques)

Les anémies non mégaloblastiques (myélodysplasiques) correspondent à un dysfonctionnement de la moelle osseuse caractérisé par une atteinte des lignées des souches cellulaires à l'origine des globules rouges, des globules

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blancs et des plaquettes .Elle se définit par l'existence de cellules sanguines souches anormales dans la moelle osseuse (blastes ou cellules myélodysplasiques). Ces anomalies vont se traduire par une atteinte variable en quantité et en qualité des trois lignées sanguines qui en découlent, globules rouges surtout, mais aussi globules blancs et plaquettes, responsables respectivement d'une anémie, d'une infection ou de troubles de la coagulation.

Les trois lignées peuvent être touchées dans les étapes de maturation des souches cellulaires, simultanément ou non, et de façon inégale. En général, la myélodysplasie est un syndrome primitif mais peut être aussi secondaire à une chimiothérapie ou à une exposition à un produit toxique, tel que le benzène [9].

1-2-4-3 Cas de l’anémie aplasique (ou aplastique).

L'anémie aplasique est une forme d'anémie rare et grave. Elle se caractérise par une production insuffisante de cellules souches, ayant pour conséquence directe un nombre insuffisant d'érythrocytes (globules rouges), souvent associé à une baisse des leucocytes (globules blancs) et des plaquettes. Elle peut être aiguë ou chronique et apparaître sans raison apparente. Elle peut aussi être secondaire à une infection, à la prise de certains médicaments ou à l'exposition à des substances toxiques. Elle peut aussi s'expliquer par de graves maladies, comme un cancer de la moelle osseuse (par exemple, une leucémie) [10].

2- IMPACTS DE L’ANEMIE CHEZ LES NOUVEAU-NES ET LES ENFANTS

L’anémie est caractérisée par une quantité faible d’hémoglobine circulant dans le sang. L’hémoglobine transporte l’oxygène dans tout l’organisme, et une quantité insuffisante d’hémoglobine peut donc avoir des conséquences graves sur la santé de l’individu. L’anémie ferriprive (causée par une carence en fer) est le type d’anémie la plus fréquente. Elle affecte en majorité les nourrissons, les jeunes enfants, les adolescents et les femmes enceintes dans les pays en développement, notamment au Bénin. les enfants de moins de 5 ans et plus sont les plus touchés avec une incidence de 76 ,6% selon l’OMS

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[11].Un enfant qui souffre de cette anémie présentera des défauts d’attention, d’asthénie, la fièvre, ainsi qu’une diminution de la résistance physique. Chez les adolescents, les signes les plus évidents se traduiront par une baisse de la résistance à la fatigue et de la puissance de travail et un peu de fièvre. Lorsque la prévalence d’anémie est élevée, le déficit d’origine alimentaire peut être comblé par un supplément quotidien ou hebdomadaire en fer.

Au Bénin, près de 60% des enfants de moins de cinq (5) ans et les adolescents souffrent d’anémie par carence en fer, une maladie qui affecte leur croissance, leur développement psychomoteur et réduit leur résistance aux infections. Les bouillies de riz, traditionnellement données aux enfants en complément de l’allaitement maternel, ne suffisent pas à couvrir leurs besoins en fer, particulièrement élevés à partir de 4 à 6 mois [11].

L’administration quotidienne d’un supplément est efficace lorsqu’il s’agit de réduire rapidement le déficit en fer d’un individu fortement carencé et le taux d’anémie d’une population. Elle pose des contraintes d’applications chez les nourrissons. Le supplément en fer le plus administré pour les nouveau-nés est sous forme d’un sirop qui doit être disponible en grande quantité [11]. En dehors de l’anémie ferriprive, nous avons l’anémie aplasique, l’anémie à hématie falciforme et l’anémie hémolytique qui affectent aussi les enfants.

3- DIAGNOSTIC DE L’ANEMIE

L’anémie est une affection fréquente, chez les enfants comme chez l’adulte. Les facteurs spécifiques contribuant à l’origine de l’anémie au sein de la population demeurent largement inconnues, de sorte qu’il est difficile de concevoir des interventions appropriées. On en déduit que les causes des anémies sévères sont multiples dans les pays en développement, mais il faut penser avant tout aux différentes carences possibles et aux anémies hémolytiques [11].

3-1 Diagnostic de présomption

Très souvent les médecins se précipitent sur l’examen physique sans faire attention à un retard staturo-pondéral, une malnutrition ou une maladie chronique. Ces informations peuvent être des clés importantes aux diagnostics

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étiologiques et apportent une information sur l’ancienneté de la maladie. Ce diagnostic est fait d’éléments d’orientation de l’anémie. Nous pouvons citer :

- Peau et les muqueuses qui sont souvent examinées dans la précipitation d’examiner cœur et poumons ;

- Pâleur, ictère, angiomes, sècheresse des cheveux, anomalie des ongles.

- Vertige. ; - Palpitation ; - Dyspnée ;

- Accélération du rythme cardiaque ; - Céphalées ;

3-2 Diagnostic de certitude

Elle repose sur le bilan d’une anémie avec les examens de laboratoire.

Nous pouvons citer comme examen :

- Dosage du taux d’hémoglobine (Hb) et mesure de l’hématocrite (Hte).

- Numération Formule Sanguine (NFS) ou Hémogramme. [8]

3-3 Diagnostic différentiel

Le taux d’hémoglobine peut être faussement abaissé dans les hémodilutions des syndromes œdémateux ou des apports hydriques importants, de l’hypersplénisme, des hyperprotidémies importantes.

A l’inverse, un déficit en plasma peut masquer une véritable anémie. C’est le cas dans les insuffisances surrénales chroniques, certaines hypothyroïdies et dans les premières heures d’une hémorragie aigue. [22]

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4-DESCRIPTION DES INDICATEURS BIOLOGIQUES DE L’ANEMIE

4-1 L’hémoglobine 4-1-1 Définition

L'hémoglobine est une molécule de protéine présente dans les globules rouges et qui a pour rôle de transporter l'oxygène des poumons vers les tissus du corps et le gaz carbonique des tissus vers les poumons dans l'organisme humain et chez les autres vertébrés. Elle se trouve essentiellement à l'intérieur des globules rouges du sang ce qui leur confère leur couleur rouge. Elle appartient à la famille des protéines globulaires. L'hémoglobine est constituée de quatre chaînes identiques deux à deux : deux chaînes α de 141 acides aminés chacune et de deux chaînes β de 146 acides aminés chacune (ce qui donne un total de 574 acides aminés pour l'hémoglobine). Chacune de ces chaînes est associée à un groupement prosthétique : l'hème. Le nom d'hémoglobine provient de deux mots : hème et globine. On la symbolise par

« Hb ». Une molécule d'hème est constituée d'un ion fer complexé par une porphyrine. Enfin, elle joue également un rôle important dans le maintien de la forme des globules rouges et une structure anormale de l'hémoglobine peut donc influer sur la forme des globules rouges et entraver leur fonction et leur flux à travers les vaisseaux sanguins. [8]

 Les Valeurs normales

Le taux d’hémoglobine est exprimé en grammes par décilitre (g/dl).

Le taux normal d’hémoglobine dépend de l'âge et, à partir de l'adolescence, du sexe de la personne. Les valeurs normales sont les suivantes :

 Chez l’homme : 14 à 18 g / dl ou 140 à 180 g/l

 Chez la femme : 12 à 16 g / dl ou 120 à 160 g/l

 Chez l’enfant : 12 à 14 g / dl ou 120 à 140 g/l

 Nouveau-né : 14 à 27 g / dl ou 140 à 270 g/l

 Femme enceinte : 11 g/dl ou 110 g/l

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4-1-2 Structure de l’hémoglobine

L’hémoglobine (Hb), tétramère de poids moléculaire 64.500 daltons environ, est une chromoprotéine constituée d’une fraction protéique, la globine et d’un groupement prosthétique, l’hème [8].

Figure 1 : Molécule d’hémoglobine [8].

4-1-2-1 L’hème

C'est la fraction non protéique qui est un dérivé du noyau porphirinique, composé tétrapyrrolique. Ce noyau est issu de la synthèse par l'organisme des uroporphyrines puis coproporphyrines et enfin protoporphyrines. Celui- ci, dans l'hème, comporte un atome de fer ferreux Fe²⁺ et est substitué de 4 radicaux méthyles, 2 radicaux propionates chargés, 2 radicaux vinyles.

Plusieurs dispositions sont donc possibles mais une seule sur 15 est retenue : l'isomère protoporphyrine IX. Les protoporphyrines ou porphyrine peuvent se lier, par leurs azotes, à des métaux, ici le fer ferreux. Ce sont donc également des métalloprotéines. Cet atome de fer est hexacoordinant : 4 liaisons de coordinence entre l'atome de fer et le noyau porphyrine, 2 liaisons de coordinence libres. L'hème oxydé est dit hématine.

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Figure 2 : Structure de l’Hème, Fer protoporphyrine [8].

4-1-2-2 La globine

C'est la partie protéique de la molécule. La myoglobine ne comporte qu'une seule chaîne de globine à 153 acides aminés. L'hémoglobine contient 4 chaînes de globines, on distingue :

 les chaînes α à 141 acides aminés,

 les chaînes β,

 les chaînes γ,

 les chaînes δ.

Toutes trois à 146 acides aminés. Il existe donc différentes combinaisons pour différentes hémoglobines humaines :

 l'hémoglobine normale de l'adulte est l'HbA : α2β2 (97-98%),

 l'hémoglobine mineure de l'adulte est l'HbA2: α2δ2 (2%),

 l'hémoglobine fœtale est l'HbF: α2γ2 (moins d'1%, synthétisée entre le 3ième et le 8ième mois de vie fœtale).

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Bien d'autres possibilités existent donnant des hémoglobines anormales. Il peut s'agir d'une anomalie de répartition: 4 chaînes β pour l'hémoglobine H par exemple, responsable de mort in-utero. On peut également observer des anomalies de composition en acides aminés comme dans l'hémoglobine Sk2 responsable de la drépanocytose : l'acide glutamique en 6 de la chaîne β est remplacé par une valine [21].

 Liaison hème – globine

L'hémoglobine est constituée de 4 chaînes polypeptidiques chacune liée à une molécule d'hème au sein d'une crevasse peptidique, la poche de l'hème.

 En l'absence d'oxygène

Une des deux coordinences libres de l'atome de fer ferreux de l'hème va lier la fraction non protéique à une histidine, histidine proximale de la chaîne de globine (His 87 chaînes α His 92 chaîne β).

En plus de cette liaison fer-globine, d'autres liaisons vont stabiliser la structure

 liaisons salines entre un radical propionate de l'hème et un groupement aminé d’une radicale lysine de globine,

 liaisons Van der Walls entre les radicaux hydrophobes de l'hème et les acides aminés de la globine.

La liaison hème-globine est donc forte sans être covalente.

En l'absence d'oxygène, l'atome de fer est attiré hors du plan du noyau protoporphyrine.

 En présence d'oxygène

On retrouve l'atome de fer lié par sa cinquième coordinence à l'histidine proximale. La sixième coordinence, ici, va se lier à l'oxygène de la molécule de globine. En plus de cette liaison au fer, l'oxygène va également se fixer à la chaîne de c=globine par le biais d'une histidine, histidine distale (His 58

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chaîne α et His 63 chaîne β). L'atome de fer est replacé dans le plan du noyau protoporphyrine.

Qu'il s'agisse de la chaîne α ou β de l'hémoglobine ou de la myoglobine, autant d'acides aminés (29) séparent histidine distale et histidine proximale.

C'est la liaison histidine proximale-hème qui est responsable de la réversibilité de la liaison O2-hémoglobine. La liaison hémoglobine-O2 est la même dans l'hémoglobine que dans la myoglobine. Donc d'un point de vue tridimensionnel, les chaînes α et β de l'hémoglobine sont similaires à celles de la myoglobine malgré des séquences aminoacides très différentes. Cependant, neuf positions sont invariables entre hémoglobine et myoglobine. Ces neufs aminoacides sont logiquement proches de l'hème pour sept d'entre eux, comme les histidines proximales et distales. On peut aussi relever que lek2 caractère apolaire de la partie interne de chaque sous-unité est invariant [21].

4-1-3 Fonctions de l’hémoglobine

Lors du passage des globules rouges dans les capillaires pulmonaires, l’Hb fixe directement l’O2 qui s’y trouve et le transporte dans les tissus périphériques quand la pression partielle de l’O₂ est faible dans le sang.

Chaque molécule d’hème fixe une molécule d’O₂ ce qui donne la coloration rouge des artères.

Après avoir lâché l’O2 dans les tissus, l’Hb transporte le CO2 des tissus vers les poumons où est libéré le CO2 qui est ensuite rejeté dans l’air expiré par les poumons ce qui confère la coloration sombre bleu des veines.

NB : la quantité d’O₂ fixée à l’Hb représente environ 98% de l’O₂ total contenu dans le sang, l’O2 circule, donc, sous forme majoritairement liée à l’Hb et ne passe à l’état dissous que lors des phénomènes d’échange [8].

4-1-4 Place du taux d’hémoglobine dans le bilan de l’anémie

Pendant longtemps l’anémie a été recherchée en appréciant le nombre de globules rouges par unités de volume de sang. Or elle est définie comme la diminution pathologique de la quantité d’hémoglobine fonctionnelle disponible dans la circulation avec ou sans diminution du nombre de globules rouges.

L’hémoglobine étant le principal pigment du sang ayant le pouvoir de transport de l’oxygène, elle traduit mieux par le nombre de globules rouges

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dans l’anémie. En pratique, lorsqu’elle est en faible quantité on observe une diminution de la coloration ce qui permet de soupçonner par simple appréciation à l’œil nu une anémie [22].

4-2 L’hématocrite 4-2-1 Définition

Le mot hématocrite (Hématocrite) vient du grec (Haimat = sang) et (Krimo = je sépare) et signifie alors étymologiquement : séparation du sang (partie rouge) du plasma (partie claire). Il existe deux méthodes de mesure de l’hématocrite : la méthode du macro-hématocrite et celle du micro- hématocrite.

La plus utilisée est celle du micro- hématocrite à cause de sa simplicité dans la technique et de son application aux petits échantillons de sang obtenus par ponction cutanée.

L’hématocrite exprime La fraction du volume érythrocytaire par rapport au sang total :

Volume de globules rouges

Hte = x 100

Volume du sang total

Ce rapport donne donc en pourcentage le volume total occupé par les globules rouges par rapport à un volume donné de sang total.k2

Valeurs normales.

 Homme : 40 à 55% ou 0,4 à 0,55 L/L

 Femme : 35 à 48% ou 0,35 à 0,48 L/L

 Enfant : 33 à 44% ou 0,33 à 0,44 L/L

 Nouveau-né : 44 à 65% ou 0,44 à 0,65 L/L

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4-2-2 les constantes érythrocytaires

 Volume globulaire moyen

Le volume globulaire moyen (VGM) est le volume qu’un érythrocyte moyen occupe dans le sang. Il est calculé à partir de la formule :

VGM = [Hte / NGR (mm³)] x 10⁷

Le résultat est en micron cube (µ3) ou en femtolitre (fL) La valeur normale se situe de 80 à 100µ3 [20].

 La CCMH (mesure de la concentration Corpusculaire moyenne en hémoglobine)

Elle est en fait la meilleure méthode d’expression de l’hémoglobine.

Elle représente le degré de saturation en hémoglobine des globules rouges.

Elle est obtenue grâce à la formule suivante : CCMH = [(Hb (g/dl)] / Hte x 100

Le résultat est en pourcentage ou en g/dl La valeur normale se situe de 32 à 38% [20].

 La TCMH (Teneur Corpusculaire moyenne en hémoglobine) La TGMH est le poids moyen de l’hémoglobine contenue dans le globule rouge. La teneur corpusculaire moyenne (en hémoglobine) est égale au rapport de l'hémoglobine en gramme par litre par le nombre de globules rouges par millimètre cube. Normalement elle se situe entre 27 et 31% [20].

4-2-3 Place de l’hématocrite dans le diagnostic de l’anémie

La procédure de l’hématocrite consiste à l’appréciation globale du sang. Il est l’un des examens hématologiques les plus simples et les plus rapides pour détecter l’existence d’une anémie. En effet, lors de la centrifugation, les globules rouges se sédimentent au fond au fond du tubes si bien que le plasma et les couches cellulaires restes au-dessus. Ainsi, pour établir l’existence d’une anémie, il suffit d’apprécier à l’œil nu ou par simple mesure la qualité des globules rouges sédimentés au fond du tube par rapport au volume de sang total en prenant pour repère les valeurs normales [22].

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DEUXIEME PARTIE :

Cadre, matériel et méthodes d’étude

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1- CADRE D’ETUDE

Dans le but de parfaire notre formation, nous avons effectué notre stage de fin de formation à l’Hôpital de Mènontin dans le laboratoire d’Analyses Biomédicales et qui à servi de cadre pour notre travail. Ce stage s’est déroulé sur une période de trois (3) mois du 25 Juin au 25 Septembre 2014.

1-1 Historique et situation géographique de l’Hôpital de Mènontin Le Centre de Santé de Mènontin (CSM) inauguré en 1996, devenu Hôpital de Mènontin et érigé en hôpital de la zone sanitaire de Cotonou 5 en 2003, est un établissement public construit dans le cadre du PRGU sur crédit AID, mis en contractualisation grâce à un mandat de gestion en concession avec l’AMSM et disposant d’une autonomie de gestion administrative et financière. Localisé dans le 12ème arrondissement dans le département du Littoral, l’Hôpital de Mènontin est non loin de l’église catholique Marie Auxiliatrice de Mènontin. Cet hôpital est situé dans la rue pavée après le supermarché ʺBénin marchéʺ en quittant l’échangeur de Godomey et dans la première rue à droite ou à gauche en quittant le stade de l’amitié dans la rue faisant face à Diamond Bank (Voir schéma à l’annexe).

1-1-1 Rôle de l’Hôpital de Mènontin

L’Hôpital de Mènontin est un centre hospitalier destiné à la prise en charge des patients (accueil, consultation, examen complémentaire, traitement). Il participe à :

 L’encadrement pratique des étudiants en médecine de l’Université d’Abomey- Calavi, des élèves infirmiers et sage femmes de l’INMES et des étudiants en Génie Biologie Humaine de l’EPAC-UAC, aux étudiants de la FAST, de l’ENAFISAR, de l’IRGIB AFRICA, du FAUCON, du FOPASE et de GASA Formation etc.

 La recherche scientifique dans le domaine de la santé (IRSP) et les différentes écoles citées ci-dessus

1-1-2 La structure de l’Hôpital de Mènontin

L’Hôpital de Mènontin dispose d’un bureau des entrées (recouvrement et accueil) , d’un service de protection maternelle et infantile, de cinq bureaux de consultations générales adultes et enfants, d’une maternité, d’un service de

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chirurgie générale doté de deux bloc opératoire, d’un service de réanimation médicale et chirurgicale, d’une unité d’endoscopie digestive, d’une unité de soins externes, d’un service de médecine, d’un service de pédiatrie, d’un cabinet dentaire, d’un service d’Imagerie Médicale, d’une pharmacie, des unités de consultations spécialisées (cardiologie, ORL, Ophtalmologie, psychologie, psychiatrie, gynécologie, dermatologie, ,diabétologie, médecine du travail), d’un service de kinésithérapie et rééducation fonctionnelle, d’un service des affaires administratives et financières et enfin d’un laboratoire d’analyses biomédicales où s’est déroulé notre stage.

1-1-3 Présentation du laboratoire

Le laboratoire de cet hôpital qui nous a accueillis est situé à l’étage du bâtiment principal et à l’extrême Est ; le laboratoire répond aux normes nationales et aux normes de l’OMS relatives à un laboratoire d’analyses biomédicales dans un hôpital de zone sanitaire ou de district sanitaire.

Le laboratoire de l’HM dispose :

 D’un hall d’accueil,

 D’un box de prélèvement

 D’une salle multidisciplinaire (Biochimie, Immunologie, Hématologie, Hémostase, Endocrinologie, et Immuno-parasitologie) qui est le siège d’une unité de banque de sang.

 D’une salle de Microbiologie (Bactériologie, Parasitologie et Mycologie),

 D’un bureau pour la gestion administrative,

 D’une salle de garde qui sert de vestiaire et de secrétariat

 D’une salle d’eau (WC et douche).

1-1-3-1 Organisation du laboratoire

Le laboratoire est organisé pour fonctionner 24h /24h avec une équipe de biotechnologistes dévoués et rompus à la tâche qui ne ménagent aucun effort pour satisfaire les patients.

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1-1-3-2 Les différentes sections du laboratoire

 Le prélèvement

Le prélèvement s’effectue tous les jours de 7h à 10h dans le box de prélèvement jouxtant le Hall. Après les prélèvements, les échantillons bien étiquetés sont ramenés sur les différentes paillasses où ils seront manipulés.

Les différentes analyses effectuées dans le laboratoire se déroulent sur les paillasses de biochimie et immuno-hématologie, et d’autres servent pour les analyses hématologiques, parasitologiques et bactériologiques.

 La paillasse d’hématologie

Sur cette paillasse sont faites les analyses suivantes :

 l’Hémogramme (NFS)

 numération des globules rouges

 numération des globules blancs

 comptage des plaquettes

 La vitesse de sédimentation (VS)

 Le taux d’hémoglobine (Hbe)

 La mesure de l’hématocrite (Hte)

 test d’Emmel

 GE/ DP ou FS /DP

NB : Exceptionnellement pour des raisons de commodités, et pour l’équipe de garde, les GE/DP sont faites à la paillasse d’hématologie

 K2La paillasse immuno-hématologie

 Le groupage sanguin et le facteur rhésus

 La recherche de Du (D faible)

 TPHA (Treponema pallidum Hemagglutination Assay)

 SDW (Séro Diagnostic de Widal et Félix),

 VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory),

 HIV (Virus Immunodéficience Humaine),

 CRP (la protéine C réactive),

 HCV (Virus de l’Hépatite C)

 L’AgHBS (Antigène Hbs),

 Test Biologique de Grossesse Sérique (TBG sérique).

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 La paillasse de biochimie

 Glycémie,

 Calcémie,

 Magnésémie,

 Transaminases,

 Créatinémie,

 Urémie (azotémie),

 L’uricémie,

 Cholestérol total et HDL,

 Triglycérides,

 Les protéines,

 Protidémie,

 Ionogramme sanguin etc.

 La paillasse de bactériologie et de parasitologie

 ECBU

 ECBU + ATB (Examen Cyto- Bactériologique des Urines+Antibiogramme)

 Spermogramme,

 PV (Prélèvement Vaginal),

 ECB-LCR (Examen cytobactériologique du liquide céphalorachidien),

 Coprologie parasitaire.

2- MATERIEL DE TRAVAIL 2-1 Matériel biologique

Il est constitué d’échantillons de sang veineux prélevé sur EDTA d’enfants de 0 à 10 ans sans distinction de sexe.

2-2 Equipements

Divers types de matériels sont utilisés pour la réalisation de notre travail.

Nous allons établir la liste du matériel selon les différents examens réalisés.

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2-2-1 Matériel de prélèvement

Concernant le prélèvement nous avons utilisés de nombreuses matériels comme la Blouse blanche, gants, des aiguilles, une pissette d’alcool iodée, des tubes EDTA, un portoir, un garrot, un marqueur, un stylo, coton hydrophile, un cahier d’enregistrement

2-2-2 Matériel de l’hémogramme

Automate d’hématologie Sysmex KX 21N

2-2-3 Matériel Pour Hémoglobine - Hématocrite

 Solution de Drabkin conservée à l’abri de la lumière ;

 Micropipette de 50μL réglable ;

 Pipette de Salhi ;

 Canule ;

 Tubes à essai propres ;

 Papier hygiénique

 Cônes ;

 Spectrophotomètre (Secoman Basic);

 Micro-tubes à hématocrite ;

 Centrifugeuse à hématocrite ;

 Abaque de lecture à hématocrite ;

 Pâte à modeler ;

 Portoir ;

 Marqueur.

3- METHODES DE TRAVAIL 3-1 Type d'étude

Il s’agit d’une étude transversale, prospective et descriptive, portée sur les enfants de 0 à 10 ans reçus à la pédiatrie de l’Hôpital de Mènontin.

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3-2 Choix de l’échantillon

Les échantillons collectés proviennent des enfants de 0 à 10 ans reçus à la pédiatrie de l’Hôpital de Mènontin à qui le taux de l’hémoglobine, la mesure de l’hématocrite ou la NFS à été demandé durant la période de notre stage.

3-3 Critère d’inclusion Pour être inclus il faut :

 Avoir entre 0 et 10 ans

 Avoir été consulté à la pédiatrie de l’Hôpital de Mènontin

 Avoir un bulletin d’examen portant mention : NFS, Hb ou Hte

Sur cette base 500 patients ont été pris en compte pour notre étude.

3-4 Traitement des échantillons 3-4-1 Phase pré-analytique

Cette section de la phase pré-analytique regroupe toutes les conditions à mettre en œuvre pour la réalisation des différents examens de notre étude.

 Se mettre dans la tenue de travail adéquate,

 disposer d’un prélèvement veineux bien réalisé dans un tube EDTA,

 disposer le matériel sur une paillasse propre,

 se laver les mains et

 mettre les gants.

3-4-2 Phase analytique

 Hémogramme (NFS)

 Allumer l’appareil par son interrupteur

 Rincer l’appareil avec le CELL PACK puis attendre que l’appareil affiche « analyse » avant de commencer l’aspiration des échantillons.

 Bien homogénéiser l’échantillon prélevé sur un tube EDTA.

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 Placer l’échantillon homogénéisé au niveau de l’aiguille d’aspiration de l’automate KX-21N et appuyer sur le plateau START.

 Retirer l’échantillon dès l’émission d’un bruit de fond.

 Attendre un peu pour que l’appareil affiche le résultat sur l’écran et sort l’imprimé du résultat.

 Dosage de l’hémoglobine

Le dosage de l’hémoglobine est fait manuellement et effectué à la méthode de cyanméthémoglobine avec le spectrophotomètre. Il consiste à :

 Allumer le spectrophotomètre et attendre environ 15 min

 Manipuler en tenant compte des indicateurs affichés ;

 Disposer dans un tube de 2500 µl de la solution de Drabkin pour le tube blanc réactif

 Mélanger chaque échantillon prélevé sur tube EDTA.

 Prendre 2500µl de Drabkin dans -+-des tube

 Ajouter 20µL de l’échantillon à l’aide d’une micropipette

 Attendre 10 min

 Faire la lecture au spectrophotomètre à 540nm. Le taux de l’hémoglobine s’affiche sur l’écran de l’appareil

 Eteindre le spectrophotomètre. [20]

 Mesure de la valeur de l’hématocrite

La mesure de l’hématocrite est faite manuellement et effectué à la méthode de centrifugation du micro-hématocrite. Il consiste à :

 Brancher et allumer la centrifugeuse à hématocrite

 Bien homogénéiser l’échantillon prélevé sur un tube EDTA.

 Prendre un Microtube à hématocrite

 Plonger l’une des extrémités du Microtube dans l’échantillon, incliner légèrement le tube pour que le sang puisse monter par capillarité

 Laisser remplir le Microtube à 3/4

 Sortir le microtube et nettoyer avec du papier absorbant

 Boucher l’autre extrémité du microtube avec de la pâte à modeler