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Attribution - NonCommercial - NoDerivatives| 4.0 International LicensePrimer registro de Agaricus bisporus (Basidiomycota, Agaricaceae) silvestre en Tlaxcala y Veracruz, México
Gerardo Mata, Rosario Medel, Philippe Callac, Christophe Billette, Roberto Garibay-Orijel
To cite this version:
Gerardo Mata, Rosario Medel, Philippe Callac, Christophe Billette, Roberto Garibay-Orijel. Primer
registro de Agaricus bisporus (Basidiomycota, Agaricaceae) silvestre en Tlaxcala y Veracruz, Méx-
ico. Revista Mexicana de Biodiversidad, 2016, 87 (1), pp.10-17. �10.1016/j.rmb.2016.01.019�. �hal-
02637785�
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Revista Mexicana de Biodiversidad
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RevistaMexicanadeBiodiversidad87(2016)10–17
Taxonomía y sistemática
Primer registro de Agaricus bisporus (Basidiomycota, Agaricaceae) silvestre en Tlaxcala y Veracruz, México
First report of wild Agaricus bisporus (Basidiomycota, Agaricaceae) from Tlaxcala and Veracruz, Mexico
Gerardo Mata
a,∗, Rosario Medel
b, Philippe Callac
c, Christophe Billette
cy Roberto Garibay-Orijel
daInstitutodeEcología,A.C.,Apartadopostal63,Xalapa,91000,Veracruz,México
bUniversidadVeracruzana,InstitutodeInvestigacionesForestales,Apartadopostal551,Xalapa,Veracruz,91000,México
cInstitutNationaldelaRechercheAgronomique,UR1264MycSA,Villenaved’Ornon,F-33882,Francia
dInstitutodeBiología,UniversidadNacionalAutónomadeMéxico,Apartadopostal70-153,MéxicoD.F.,04510,México Recibidoel9dediciembrede2014;aceptadoel5denoviembrede2015
DisponibleenInternetel2demarzode2016
Resumen
Elhongoconocidopopularmentecomochampi˜nón,Agaricusbisporus,eslaespeciecomestiblemáscultivadacomercialmenteenelmundo.
Apesardesuimportanciaydeque sehaincluidoenlistadosdediferentesestadosdeMéxico,supresenciadeformasilvestreno sehabía corroborado.Elobjetivo deestetrabajofue determinarsiestaespeciecrecedemanerasilvestreenMéxico.Se realizaronrecolectasenlos estadosdeTlaxcalayVeracruz,yseaislaron7cepasapartirdeejemplaressilvestres.Se obtuvieronbasidiomasdedichascepascultivadas enunsustratoabasedecomposta.LosejemplaressilvestresquesedepositaronenelHerbarioXAL,ylosobtenidosencultivo,seestudiaron macroymicromorfológicamente. LacepaIE623 seutilizóparaobtener lasecuenciadelaregión ITSdelADNribosomal. Losejemplares revisadoscoincidenmorfológicamenteconA.bisporusypresentanenpromedio63.4%debasidiosbispóricos.LasecuenciadeADNcorroboróla determinacióntaxonómica,ydeacuerdoconlosanálisisdesimilitudyfilogenéticosseconcluyóquelacepaprovienedeunejemplarsilvestrey nodeunacepacomercialcultivada.LascepasdeA.bisporussilvestresenMéxicopodríanaportargermoplasmaparamejorarsucultivocomercial.
DerechosReservados©2016UniversidadNacionalAutónomadeMéxico,InstitutodeBiología.Esteesunartículodeaccesoabiertodistribuido bajolostérminosdelaLicenciaCreativeCommonsCCBY-NC-ND4.0.
Palabrasclave: Champi˜nónsilvestre;Germoplasmanativo;Basidiosbispóricos;Hongoscomestibles Abstract
Thefunguscommonlyknownaswhitebuttonmushroom,Agaricusbisporus,isthemostcommerciallycultivatedspeciesamongedibleones worldwide.Inspiteofitsimportance,itspresenceinwildstagehadnotbeenconfirmedevenwhenithasbeenincludedinlistsofspeciesfrom differentstatesofMexico.TheaimofthisstudywastodetermineifthisspeciesgrowswildinMexico.Collectionsweremadeinthestatesof TlaxcalaandVeracruz,where7strainswereisolatedfromwildspecimens.Basidiomesofthesestrainsweregrownincommercialcompost-based substrate.Wildspecimens,depositedatXALHerbarium,andthoseobtainedinculturewerestudiedmacroandmicromorphologically.IE623 strainwasusedtoobtaintheDNAITSribosomalsequence.TherevisedspecimensmatchmorphologicallywithA.bisporusandhaveanaverageof 63.4%ofbisporicbasidia.TheDNAsequenceconfirmedthetaxonomicidentityandthroughsimilarityandphylogeneticanalysis,itwasconcluded thatthestrainderivedfromawildspecimenandnotfromacommerciallycultivatedstrain.NativestrainsofA.bisporusfromMexicocouldprovide importantgermplasmtoimproveitscommercialcultivation.
AllRightsReserved©2016UniversidadNacionalAutónomadeMéxico,InstitutodeBiología.Thisisanopenaccessitemdistributedunderthe CreativeCommonsCCLicenseBY-NC-ND4.0.
Keywords: Wildwhitebuttonmushroom;Nativegermoplasm;Bisporic-basidia;Ediblemushrooms
∗Autorparacorrespondencia.
Correoelectrónico:gerardo.mata@inecol.mx(G.Mata).
LarevisiónporparesesresponsabilidaddelaUniversidadNacionalAutónomadeMéxico.
http://dx.doi.org/10.1016/j.rmb.2016.01.019
1870-3453/DerechosReservados©2016UniversidadNacionalAutónomadeMéxico,InstitutodeBiología.Esteesunartículodeaccesoabiertodistribuidobajo lostérminosdelaLicenciaCreativeCommonsCCBY-NC-ND4.0.
G.Mataetal./RevistaMexicanadeBiodiversidad87(2016)10–17 11
Introducción
Lasespecies delgéneroAgaricusL.sonactualmente muy apreciadas,nosoloporsuspropiedadesnutricionales,sinotam- biénporsuscualidadesorganolépticasymedicinales.Elhongo conocidopopularmenteenMéxicocomochampi˜nón,Agaricus bisporus (J.E. Lange) Imbach, es la especie más célebre del géneroy tambiénlade mayorproducción enel mundoentre lasespeciescultivadas(Arrillaga,2004).Suproducciónmun- dialseestimóenmásde4millonesdetoneladasenela˜no2009 (Sonnenbergetal.,2011).Agaricusbisporus sediferenciade todaslasespeciesdelgéneroporpresentar2 esterigmasenla mayoríadesusbasidios(Parra,2008),aunque confrecuencia se puedenobservar basidiosmono,tri eincluso tetraspóricos (Callac,Imbernon,Guinberteau,DesmergeryTheochari,2003).
Apesardeestecaráctermorfológico—2esporasporbasidio—, quehaceinconfundiblealaespecie,existen2variedadessilves- tres,ademásdeA.bisporusvar.bisporus,quehanmostradoser principalmentetetraspóricas:A.bisporusvar.burnettiiKerrigan yCallaccondistribuciónenAmérica delNorteyA.bisporus var.eurotetrasporusCallacyGuinb.presenteenEuropa(Callac, Billette,ImbernonyKerrigan,1993;Callacetal.,2003).
En México A. bisporus se ha citado en diversos trabajos comopartedeinventariosendistintasentidades;sinembargo, enningunodeellossehaproporcionadounadescripcióncom- pleta de la especie y en muy pocos se especificó el tipo de vegetacióndondecrecía.SeregistróenelDistritoFederal,sin precisareltipodevegetación(HerrerayGuzmán,1972)yde zonasurbanas,suburbanasyagrícolas(Zarco,1986);enJalisco (Guzmán-Dávalos,NievesyGuzmán,1983;Sánchez-Jácomey Guzmán-Dávalos,2011);enMorelosenjardinesy zonasper- turbadas(López, Mora, Montiel y Guzmán, 1985).Agaricus bisporus var. albidus (J.E. Lange) Singer y A. bisporus var.
bisporusseconocenenMichoacán(Conabio,2005).Además, algunostrabajoshancitadoestaespeciedecultivoscomerciales enBajaCalifornia(AyalayGuzmán,1984),Veracruz(López- Ramírez,2011).Guzmán(1977)citóA.bisporusvar.albidusy A.bisporusvar.bisporuscultivadoscomercialmentesinpreci- sarlalocalidad.Porotra parte,Martínez-Carreraetal.(2001) citaronla especieenTlaxcala, enelvolcánLaMalinche;sin embargo,dichosautoresnomencionaronen quéherbariofue depositado elmaterial estudiado y aislado, por lo que no se tieneunregistrocertero.Losobjetivosdelpresentetrabajofue- ron:demostrarlapresenciadeestaespeciedemanerasilvestre enMéxico,corroborarladeterminacióndelosmaterialesatra- vésde laproducción de basidiomasobtenidos apartir de las cepasaisladasypormedio deanálisisfilogenéticos,asícomo describirsuscaracterísticasmorfológicasdevalortaxonómico bajocondicionesexperimentalesdecultivoencompostutilizado paralaproduccióncomercial.
Materialesymétodos
Serealizaronsalidasde campoenlos estadosde Tlaxcala yVeracruzpararecolectarejemplaresfrescos.Setomaronlos datosdelocalidad,sustratoyhábitatdecadasitioderecolecta.
Paraelestudiomacroscópicodelosmaterialesseregistraronlos datosenfrescodepíleoyestípite—forma,colorytama˜no—, arreglo y color de lasláminas, posicióndel anillo y elcolor delquesemanchaelcontexto.Además,serealizaronreaccio- nesmacroquímicas,SchäfferyKOH5%,deacuerdoconParra (2008).El estudio microscópicode los ejemplares se llevóa cabobajolastécnicasrutinariasenmicología(Largent,Johnson y Watling, 1977), con un microscopio estereoscópico (Carl Zeiss, Stemi DV4) y un microscopio compuesto(CarlZeiss, PrimoStar).Lasfotografíasse tomaronconunacámara digi- tal(Sony Cyber-shot).Para ladeterminación delaespeciese consultaronlostrabajos deArrillaga(2004);Cappelli(1984);
Kerrigan(1986)yParra(2008).Dealgunosejemplaresrecolec- tadosse aislaroncepas demaneravegetativa,de acuerdocon la metodologíade Guzmán, Mata, Salmones, Soto-Velascoy Guzmán-Dávalos(2013)enmediodecultivodeglucosayagar adicionadoconextractodecompostomediodecultivodepapa dextrosaagar(PDA,Bioxon)(MataySavoie,2007).
Paralaobtencióndeesporomassepreparóinóculode4cepas, deacuerdoconlametodologíadeMataySavoie(2007),utili- zandosemillasdesorgo(SorghumvulgarePers.).Seprepararon muestrasde4kgdecompostcomercial,alasqueselesagregó un5%deinóculo,semezclóuniformementeysecolocaronen bolsas deplástico.Despuésde14díasde incubacióna25◦C se a˜nadióunacapa de 5cmde tierradecobertura paraindu- cirlaaparicióndelosesporomas,ylasbolsassecolocaronen uncuarto a18◦Cconhumedadrelativade90% y unfotope- riodode12/12h(Mata,Calderón-FuentesySavoie,2012).Los ejemplaressecosecharonendiferentesestadiosdedesarrollo.
Todoslosejemplaresestudiados,incluyendolosejemplares provenientesdecultivo,estándepositadosenlacolecciónmico- lógicadelHerbarioXALdelInstitutodeEcología,A.C.Enlos ejemplaresde lascepas cultivadasse determinóel porcentaje de basidiosbispóricos en relaciónconlos mono, triy tetras- póricos,conunfragmentodeunaláminamaduracolocadoen unportaobjetosparasuobservacióndirectaenelmicroscopio compuesto.Sedeterminóelnúmerodeesporasporbasidio,en untotalde150basidiosporejemplar,deacuerdoconlameto- dologíadeImbernon,Callac,Gasqui,KerriganyVelcko(1996);
KerriganyRoss(1987)yCallacetal.(2003)yelnúmeroprome- diodeesporasexpresadocomoaveragesporenumber(ASN), deacuerdoconlafórmulaestablecidaporCallacetal.(1996).
Análisismolecular
Las secuencias de la región ITS —espaciador interno transcrito—delADNribosomal,quecomprendeelITS1,5.8S y elITS2,se obtuvieronde lacepa IE623 aislada del ejem- plar Mata 641 (XAL). El ADN de la cepa se extrajo con el paquete XNAP (Sigma-Aldrich). Para esto se rasparon con una aguja de disección aproximadamente 1-2mm2 de mice- lio aéreo de la cepa cultivada en PDA. El micelio se colocó en un tubo Eppendorf® con 20l de solución de extrac- ción y se calentó por 10min a 65◦C y 10min a 95◦C en untermociclador (Bio-Rad, modeloT100),posteriormentese a˜nadieron20l desolucióndedilucióny seincubóatempe- raturaambientepor30min(Garibay-Orijel,Morales-Mara˜nón,
Domínguez-GutiérrezyFlores-García,2013).LaregiónITSse amplificó con los cebadores ITS1F eITS4 (Gardes y Bruns, 1993)bajolascondicionesdescritasporIzzo,AgbowoyBruns (2005).LosproductosdePCRfueronrevisadospormediode electroforesisengelesdeagarosaal1%enamortiguadorTE.
Losampliconesdebuenacalidadselimpiaronusandounamez- clade1ldeExoSAP-IT(USB-Affimetrix)con1ldeagua por3.5ldeproductodePCR.Lareaccióndesecuenciaciónse realizóconBigDyeTerminator3.1(AppliedBiosystems)según lasinstrucciones del fabricante. Seobtuvieronlas secuencias deambasdireccionesen unsecuenciadorABI3100(Applied Biosystems)enelLaboratoriodeSecuenciaciónGenómicade laBiodiversidadylaSaluddelInstitutodeBiología,UNAM.
LassecuenciasseeditaronyensamblaronenGeneiousProR7 (Biomatters).
SeconstruyóunamatrizdesecuenciasconespeciesdeAgari- cussecciónBivelaresutilizadasenestudiosfilogenéticosprevios (Challen,KerriganyCallac,2003;Geml,GeiseryRoyse,2004) ytambiénse incluyeronaquellassecuenciasdeGenBankque resultaronsimilaresalasecuenciadelaregiónITSdelacepa IE 623mediante unabúsqueda enBlast. Lassecuencias fue- ron alineadas en Muscle (Edgar, 2004) y la matriz de datos se analizó mediante los métodos Neighbor-Joining, máxima verosimilitudeinferenciabayesianaenGeneiousProR7(Bio- matters). Agaricusbitorquis (AF432899) se usó como grupo externo(Gemletal.,2004).Los árbolesdeNeighbor-Joining fueronconstruidosconelmodelodedistanciagenéticaTamura- Nei remuestreando con bootstrap a través de 1,000 réplicas.
Paralosanálisisdemáximaverosimilitudseutilizóelprograma PhyML (Guindon et al., 2010) buscando la topología de los árbolesconSPRsyHKY85comomodelodesustitución;seuti- lizóbootstrapcon1,000réplicasparaprobarelsoportedelas ramas.TambiénserealizaronanálisisBayesianosenMrBayes (Huelsenbecky Ronquist,2001)usandoelradiodevariación Gamma,elmodelodesustituciónGTRcon4cadenasdeMonte Carlo sobre 1,100,000 generaciones submuestreando cada 400generacionesyunvalordetemperaturade0.2.Losmejores modelosdesustituciónseeligieronconMrModelTestversión 2(Nylander,2004).Sealmacenaronlosvaloresdelargodelas ramasy secalcularonlasprobabilidadesposteriores.También secomparólasecuenciadelacepaIE623con63secuencias delamismaespeciedisponiblesenGenBank.Lassecuencias sealinearonysedeterminaronlasposicionesquepresentaron heteroalelismosenlaregiónITS.
Descripción Análisismorfológico
Serevisaron10ejemplaressilvestres,deloscualesseaislaron untotalde7cepasquesedepositaronenelCepariodeHongos delInstitutodeEcologíaconlasclaves:IE623,IE673,IE674,IE 708,IE746,IE790eIE802.Serevisarontambiénlosejemplares obtenidosdelasmuestrassembradasencompostdelascepasIE 623,IE746eIE802.Todoslosmaterialesrevisadoscoinciden conladescripciónmorfológicadeA.bisporusvar.bisporusque sepresentaacontinuación.
5 μm A B
C
Figura1.Agaricusbisporus.A.Basidiosporas.B.Basidiosbispóricos.C.Quei- locistidios.
Agaricusbisporusvar.bisporus(J.E.Lange)Imbach,Mitt.
naturf.Ges.Luzern15:15,1946(figs.1y2).
Píleode 50-90mmde diámetro,globosoenetapas juveni- les,convexoaplano-convexoyfinalmenteplano,blanquecino en etapasjuveniles, beige,ocráceoafinalmentedecolorcafé claro,conelcentro caféoscuro,confibrillasseparadas hacia el margendecolorcafé.Láminas libres, muyjuntas, anchas, conlamélulas intercaladas,blanquecinascuando sonjóvenes, que cambiana colorrosado y finalmente a caféoscuro, casi negras,contonosvináceosalmadurar;aristablanquecinaylige- ramentefimbriada.Contextogrueso,blanquecinoquesemancha de color rojizo-vináceo al maltrato. Estípite de 50-55×12- 17mmdecilíndricoaclaviforme,avecesligeramentebulboso en labase, hueco, liso, blanquecino,laparteinterna se man- chadecolorrojizo-vináceoalmaltrato,confrecuenciapresenta cordones miceliales, loscuales pueden teneraspectode rizo- morfoscortos.Anilloínferoointermedio—enpocasocasiones súpero—,membranoso,grueso,blanco.Basidiosporasde(6-) 7-8(-9)×5.5-7(-9)m,ampliamenteelípticas,decolorcafé, con pared gruesa de 0.6-0.8m de grosor. Basidios de 18- 26 (-30)×6-8m, clavados, la mayoría bispóricos —pocos trispóricosotetraspóricos—,hialinos,depareddelgada.Queilo- cistidiosde15-35(-45)×10-12(-14)m,clavados,hialinos,de pareddelgada,abundantes.Reaccionesmacroquímicas:Schäf- fer y KOH negativas. Basidioma con olor débil, fúngico, agradable;sabordulcetípicamentefúngico,agradable.
Resumentaxonómico
Hábitat.Terrícola,gregario,bajoárbolesdelgéneroCupres- susenterrenosconcultivodepapaoenpastizales.
Materialestudiado.Tlaxcala.MunicipiodeCuapiaxtla,ran- choElTejocotea2kmdeCuapiaxtla,julio19,2001,Mata641 (XAL),cepaaisladaIE623;octubre3,2002,Gándara371-A, 376(XAL);octubre3,2002,Ramírez-Guillén174(XAL),cepa aislada IE673, 176(XAL), cepaaislada IE674, 178(XAL);
octubre10,2003,Mata674(XAL),cepaaisladaIE708;sep- tiembre18,2006,Mata719(XAL),cepaaisladaIE746;agosto 29, 2007, Mata 755 (XAL), cepa aislada IE 790. Veracruz.
MunicipiodeCoatepec,UnidadDeportivaLic.RobertoAmorós Guiot,mayo30,2008,Mata785(XAL),cepaaisladaIE802.
Ejemplaresobtenidosencultivo:Plantadecultivodehongosdel InstitutodeEcología,A.C.,Xalapa,Veracruz,junio28,2002, Mata647(delacepaIE623,XAL);marzo20,2002,Mata724
G.Mataetal./RevistaMexicanadeBiodiversidad87(2016)10–17 13
A 1 cm
B
C
D 1 cm
1 cm
1 cm
Figura2.Agaricusbisporus.AyB.Ejemplaressilvestres(Mata641).CyD.EjemplarescultivadosdelacepaIE623.
(delacepaIE746,XAL);junio14,2011,Mata869(delacepa IE802,XAL).
Latabla1muestralaproporcióndebasidiosbispóricosres- pectoalosotrostiposdebasidios,encontradaenlosejemplares analizados.Losesporomas delascepasestudiadas mostraron variacionesentre44%y82.5%(promedio=64.3%)debasidios bispóricos típicos de la especie, de 18.5% a 56% (prome- dio=35.5%) de trispóricos y de 0.5-2.5% (promedio=0.8%) detetraspóricos.SeobtuvounASNpromediode2.65.
Análisismolecular
Seobtuvieron4 secuenciasdeADNenambossentidosde lacepa IE 623 de diferentes resiembrasy medios de cultivo con entre 620 y 710 pares de bases. Entre ellas existió una similitudnucleotídica de99.99%y su secuenciaconsensode 712paresdebasesquedóregistradaenGenBankbajoelnúmero de acceso KM677957. Todos los análisis dieron resultados similaresy se recuperó para AgaricussecciónBivelares, una estructurasimilaralaregistradaporChallenetal.(2003).En todos los casos,el clado deA. bisporus tuvo unsoporte alto
—bootstrapdeNeighborJoining99.4%,bootstrapdemáxima verosimilitud 94.6%, probabilidades posteriores bayesianas
1—.Enlos3análisislacepaIE623seubicódentrodelclado deA.bisporus.Lafigura3muestralosresultadosdelanálisisde máximaverosimilitud.SibiendentrodeA.bisporushaypoca estructuray los clados quese forman tienenpocosoporte,la secuenciadelacepaIE623tieneunasimilitudgenéticamayor acepassilvestresqueavariedadescultivadas.
Seencontraron4 posiciones—39,510,516,552—,enlas quesepresentaronheteroalelismosenA.bisporusvar.bisporus.
LacepaIE623mostróC,Y,CyCenestasposiciones,respecti- vamente,ysolounadelassecuenciasdeGenBank(JF223230) tienelamismasecuencia,peroestaúltimadifiere,además,por unaAenlaposición522.LacepaIE623tiene,porlotanto,una secuenciaúnica.Enlas4posicionesdeimportanciaheteroalé- licaelgenotipo«CYCC»deA.bisporusvar.bisporusindicaque unodesusnúcleostieneungenotipo«CCCC»queaparececon mayorfrecuencia(8/58;13%delassecuencias),mientrasque elotronúcleoquees«CTCC»esmenosfrecuente(2/58;3%) (tabla2).
En la posición heteroalélica 510 de la región ITS las 63secuencias deGenBank sonC(18),T(41),o C/T=Y(4) (tabla3).Sinembargo,estas4 últimassecuenciasdifierenen otras posiciones de la cepa IE 623, loque corroboraque no existeningunasecuenciaidénticaalasecuenciadedichacepa.
Tabla1
Variaciónenelnúmerodeesporasporbasidio(%)yenelnúmeropromediodeesporasendiferentescepasmexicanassilvestresdeAgaricusbisporus.
Ejemplardelqueseobtuvolacepa Colector Cepa Esporasporbasidio ASN
1 2 3 4
Mata641 PC-GM IE623 0 47.5 50.0 2.5 2.53
RamírezGuillén174 GM IE673 0 44.0 56.0 0 2.44
RamírezGuillén176 GM IE674 0 81.0 18.5 0.5 2.82
Mata674 GM IE708 0 82.5 17.5 0 2.83
Promedio 0 63.4 35.5 0.8 2.65
ASN:númeropromediodeesporasporbasidio(AverageSporeNumber);GM:GerardoMata;PC-GM:PhilippeCallac-GerardoMata.
AF432899, Agaricus bitorquis KF702398, Agaricus sp. ql-2 EU363037, Agaricus sp. CA103 AF432890, Agaricus bridghami AF432891, Agaricus bridghami AF432897, Agaricus devoniensis EU363036, Agaricus devoniensis AF432893, Agaricus devoniensis AF432892, Agaricus devoniensis AF432896, Agaricus devoniensis AF432889, Agaricus subperonatus EU257801, Agaricus agrinferus AF432888, Agaricus subfloccosus EU131639, Agaricus subfloccosus AF432887, Agaricus subfloccosus
AF465400, Agaricus bisporus var. eurotetrasporus
AF465399, Agaricus bisporus var. eurotetrasporus DQ404388, Agaricus bisporus
AF432886, Agaricus bisporus
AF465404, Agaricus bisporus
AF187270, Agaricus bisporus FJ223224, Agaricus bisporus FJ223229, Agaricus bisporus FJ223230, Agaricus bisporus C623, Agaricus bisporus JN807464, Agaricus bisporus EF460354, Agaricus bisporus AF432882, Agaricus bisporus AF188033, Agaricus bisporus AY484694, Agaricus bisporus AJ884645, Agaricus bisporus FJ223226, Agaricus bisporus AF188034, Agaricus bisporus AF432884, Agaricus bisporus HM149321, Agaricus bisporus HM149314, Agaricus bisporus HM149319, Agaricus bisporus HM149315, Agaricus bisporus HM149316, Agaricus bisporus KF986267, Agaricus bisporus AJ884644, Agaricus bisporus AF432883, Agaricus bisporus HM149322, Agaricus bisporus HM149320, Agaricus bisporus HM149318, Agaricus bisporus HM149317, Agaricus bisporus AF188035, Agaricus bisporus AY484693, Agaricus bisporus AM930981, Agaricus bisporus JN22411, Agaricus bisporus 0,02
94,6 98,8 95,5
99,4 84,8
90,8
AF465402, Agaricus bisporus var. bisporus GU327643, Agaricus bisporus var. burnettii AF465401, Agaricus bisporus var. burnettii EF460355, Agaricus bisporus
FJ223227, Agaricus bisporus
FJ755218, Agaricus bisporus FJ869182, Agaricus bisporus HM561976, Agaricus bisporus
HM561978, Agaricus bisporus JN234843, Agaricus bisporus JN234841, Agaricus bisporus
Figura3.ÁrbolobtenidodeunanálisisdemáximaverosimilituddeAgaricussecciónBivelaresbasadoensecuenciasdelaregiónITSdelADNribosomal.Se muestransololosvaloresdesoportedelasramasconunbootstrapmayora80.0%;enazulseindicaelcladodeA.bisporusyenazulynegritaslasecuenciadela cepaIE623.
G.Mataetal./RevistaMexicanadeBiodiversidad87(2016)10–17 15 Tabla2
Númerodecasosquecompartenelordenenlas4posicionesheteroalélicas(39,510,516,552)delosgenotiposencontradosenlas63secuenciasdeAgaricus bisporusdelasvariedadesbisporus,burnettiiyeurotetrasporus,obtenidasdeGenBank.
Posiciónheteroalélica Agaricusbisporus
39,510,516,552 var.bisporus var.burnettii var.eurotetrasporus
CTCT 35
CTCC 2 2
CCCC 8 3
CCAC 7
TTCT 2
YYCY 1
CYMY 1
CYCY 1
CYCC 1
Tabla3
Frecuenciaheteroalélicaenlas4posicionesrelevantesdelosgenotiposencontradosenlas63secuenciasdeAgaricusbisporusobtenidasdeGenBank.
Posición Secuencia Frecuencia
39 TCTTYGGAG Y:1 C:60 T:2
510 TGGCYCCTT Y:4 T:41 C:18
516 CTTAMTTGG M:1 C:55 A:7
552 GGAAYCGTC Y:3 T:37 C:23
Lasletrasennegritaindicanlosnucleótidosconvariaciónheteroalélica.
Tabla4
Secuenciasidénticasalos2tiposdenúcleodelacepaheterocarióticaIE623,encontradosen63secuenciasdepositadasenGenBank.
N.oGB Id Ref Material Región Tipo
EF460354 A Gemletal.,2008 CepaGAL18055 Alaska,EE.UU. Silvestre
JN807464 A CepaTarimg01 (¿China?)
AF432886 B Challenetal.,2003 CepaRWK1885 Copenhague,Dinamarca Silvestre
FJ755218 B CepaCZ450-1 (¿China?)
AF465403 B Callacetal.,2003 CepaBs261-150 Francia(protoplastodeBs261) Silvestre
FJ223225 B CepaAGRHS202 (¿China?)
FJ223228 B CepaAS2796 (¿China?)
Id:identidadconeltipodenúcleo;N.oGB:númerodeaccesodeGenBank.
Porlotanto,entrelos2núcleosdelacepaheterocarióticaIE623 unnúcleoquesepodríadenominarAcontieneelnucleótidoC, mientrasqueelotronúcleollamadoB contieneelnucleótido T.Se compararon lassecuencias de estos 2 núcleos, A y B, conlas18y41secuenciasdeGenBank,respectivamenteconte- niendoCoTenlaposición510.Entreellasseencontróque2 secuenciaseranidénticasalnúcleoAy5alnúcleoB(tabla4).
Entrelas2secuenciasdetipoAseobservóqueunacorresponde aunacepasilvestreprovenientedeAlaska(EF460354;Geml, Laurseny Taylor,2008); mientras queentre las5 de tipo B, unaesunhomocariónaisladoporelmétododeprotoplastosa partirdeunacepasilvestreprocedentedeFrancia(AF465403;
Callacetal.,2003)yotraes unacepasilvestredeDinamarca (AF432886;Challenetal.,2003);delas4secuenciasrestantes deGenBanknoexisteinformaciónenlabaseopublicadasobre suprocedencia.
Discusión
Elmaterial estudiado coincideconAgaricus bisporus var.
bisporus(Arrillaga,2004;Cappelli,1984;Parra,2008),yaque
lapresenciadebasidiosbispóricosesuncarácterdistintivo,así comolamedidadelasbasidiosporasmayoresa6mdelongitud y queilocistidios nomayoresen promedio a35mde longi- tud(Callacetal.,1993;Cappelli,1984;Parra,2008).Kerrigan (1986)mencionóquelasreaccionesmacroquímicasdeSchäffer yKOHsonnegativasenA.bisporus,yquesucaracterísticaprin- cipaleslapresenciapredominantedebasidiosbispóricos.Seha clasificadoenlasecciónBitorques(Kuhn.yRom.exHein.)Bon etCappelligrupoBisporusCappelli(Arrillaga,2004;Cappelli, 1984) y en lasección Bivelares (Kauffman) L.A. Parra sub- secciónHortenses(Kauffman)L.A.Parra(Kerrigan,Callac,&
Parra,2008;Parra,2008).Arrillaga(2004)mencionómedidas másgrandesdeldiámetrodelpíleo,hasta100mmconescamas marrónpardusco,quenoseobservaronenlosejemplaresestu- diados.Laproporcióndebasidiosbispóricosytetraspóricosse hadocumentadoenotrostrabajosparaA.bisporusvar.bispo- rus;Martínez-Carreraetal.(2001)registraron67.5%debasidios bispóricosy27.5%detetraspóricos,mientrasqueCallacetal.
(2003) encontraron 80% y 1.27% de bi y tetraspóricos, res- pectivamente. Si bienla mayoría de las cepas han mostrado altosporcentajesdebasidiosbispóricos,enalgunoscasoseste
porcentajehavariadode17%a55%encepassilvestres(Callac et al., 1993,2003). De acuerdo con los resultadosobtenidos porKerrigan, Billette,Callac y Velcko (1996)y Callac etal.
(2003)tantoA.bisporusvar.burnettiiKerriganyCallaccomo lavar.eurotetrasporusCallacyGinb.poseenunporcentajealto debasidiostetraspóricos,noasílavar.bisporus,quepresenta másbispóricosquetetraspóricos.Enestetrabajoseobtuvieron resultadossimilaresalosregistradasporKerriganetal.(1996) y Callacet al.(2003),aunque conmenorporcentaje de basi- diostetraspóricos.ElASNdelosejemplaresobtenidosapartir decepascultivadas(promedio=2.65)secorrespondebiencon losejemplaresconsideradoscomobispóricosporCallacetal.
(1996)(Callac,Theochariy Kerrigan,2002),además,lacepa IE623presentóunASNde2.53(tabla1).Elnúmerodeespo- rasporbasidioesunacaracterísticadeterminadaprincipalmente porunlocusgenéticosimplellamadoBSN,elcualestáligado allocusdeapareamientoMATy aotroslocidelcromosomaI (Imbernonetal.,1996).Agaricusyotrosgéneroscercanosdela tribuAgariceaePat.sonconsideradosancestralmentetetraspó- ricos,esdecir,queproducenbasidiospredominantementecon 4 esterigmas (Kerrigany Ross, 1987), loque podría signifi- carqueelcarácterbispóricodeestaespecieesresultadodeun procesodeunaadaptaciónevolutiva(Callacetal.,2003).
Lascepascomercialesprovienendeunnúmerolimitadode genotipostradicionales(RoyseyMay,1982),ylamayoríason idénticasomuysimilaresalosprimeroshíbridosHorstU1®y HorstU3®obtenidosenladécadade1980alcruzarlasvarie- dades white y offwhite (Fritsche,1983). Encontraste conla uniformidadencontradaentre lascepas cultivadas,lassilves- tresmuestranunadiversidadgenéticamayor(Foulogne-Oriol, SpataroySavoie,2009).LasecuenciadelaregiónITSdelADN ribosomaldelacepaIE623apoyóladeterminacióntaxonómica delejemplarMata641—delcualseobtuvolacepa—.Los3aná- lisisubicaronestasecuenciadentrodelcladodeA.bisporuscon altoniveldesoporte.Elanálisisdesimilitudnucleotídica(tabla 4)demuestra quelacepa IE623es genéticamentemuysimi- laracepassilvestresdediferentespaísesdelHemisferioNorte, comoEstadosUnidosdeAmérica,DinamarcayFrancia—delos ejemplaresrecolectadosenChinanosetienecertezadequesean silvestres—.Dehecho,lassecuenciasdelascepascomerciales máscercanas(HM149321,HM149322,FJ869182)sonconsi- derablementediferentes(0.5%).Estodemuestraquealmenos lacepa IE 623 es silvestrey se desarrolla de maneranatural enelestadodeTlaxcala,yquenosetratadeunacepacomer- cialcultivadaqueprovengadeloscultivosdechampi˜nones.La secuenciadelacepaIE623estípicadeA.bisporus;sinembargo, representaunadisposiciónúnicadelosalelosconocidosenesta especiehastaahora.
DeacuerdoconParra(2008)A.bisporuscreceenEuropa, principalmenteenlugaresdondesepractica laganadería,con frecuenciabajoárbolesdelafamiliaCupressaceae,rarasveces bajo otros árboles y en dunas; los materiales recolectados en Tlaxcala también se encontraron bajo árboles del género Cupressus,noasílosmaterialesdeVeracruz.Sibieneltrabajo deMartínez-Carreraetal.(2001)citóestaespeciedeTlaxcala, nomencionóenquéherbariosedepositóelmaterialestudiado, porloqueestetrabajocorroboralapresenciadeA.bisporusen
Tlaxcala yloregistraporprimeravezdeVeracruz,enambos casos creciendo de manera silvestre. Aunque el número de ejemplares recolectado fue bajo, los resultados sugierenque laespeciepodría tenerunadistribución ampliaenMéxico.A escalamundialA.bisporusseharegistradodeformasilvestre enAméricadelNorte(EstadosUnidosdeAméricayCanadá), América del Sur (Argentina), Europa (Dinamarca, Espa˜na, Francia,Grecia)yAsia(Israel,China)(Albertó,1996;Callac etal.,2002;Challenetal.,2003;Gemletal.,2008;Niveiroy Albertó,2013;Parra,2008;Wangetal.,2008).Elgermoplasma encontradoenMéxicopuedeserunafuenteimportantedecarac- terísticas genéticasapartirde lascuales sepodríarealizarun programadetrabajoencaminadoalaobtencióndecepasmejo- radascapacesdedesarrollarsebajolascondicionesambientales locales. Lacapacidadderesistenciaaplagasyenfermedades, elcrecimientoadecuadoenmaterialesregionales,asícomola habilidadparafructificaratemperaturassuperioresa25◦Cson algunasdelascualidadesdeseablesenlascepasdechampi˜nón (Largeteau,Callac,Navarro-RodríguezySavoie,2011;Navarro y Savoie, 2014; Salmones, Ballesteros-Hernández, Zulueta y Mata,2012).Elretoserálograrqueelgermoplasmamexicano seincorporeencortotiempoalaproduccióncomercial.
Agradecimientos
Este trabajo fuefinanciado en elmarco de lacooperación bilateralMéxico-Francia,atravésdelproyectoAgasub115790 Conacyt-ANR. La secuenciaciónde ADN fue financiada por la red MEXBOLa través delproyecto Conacyt1251085. Se agradece altécnico Ranulfo Castillo-delMoral, delINIFOR- UV, su asistencia en el trabajo de gabinete y elaboración de figuras.AlDr.GastónGuzmányaltécnicoJuanLara-Carmona, delacoleccióndehongosdelHerbarioXALdelINECOL,porsu ayudaenlaconsultaybúsquedademateriales.AlingenieroJuan CarlosSucarrats,delaempresaRiojal,ladonacióndecompost paraelcultivodelascepasaisladas.SeagradecealM.enC.
RodolfoÁngeles-Argaiz,delInstitutodeBiologíadelaUNAM, suapoyoenlaobtencióndelassecuenciasdeADN.
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