TABLES DES MATIERES
1. RÉSUMÉ ...1
2. INTRODUCTION...4
2.1.LES RÉCEPTEURS COUPLÉS AUX PROTÉINES G. ...5
2.1.1. Généralités-classification. ...5
2.1.2. Structure. ...6
2.1.3. Mode d’activation...7
2.1.4. Régulation de la réponse. ...8
2.1.4.1. La désensibilisation rapide...9
2.1.4.1.1. Désensibilisation par les kinases dépendantes d’un second messager. ...9
2.1.4.1.2. Désensibilisation par les kinases agonistes dépendantes. ...11
a) Les GRK ...11
b) Autres kinases...14
2.1.4.1.3. Endocytose : mécanismes alternatifs. ...16
2.1.4.2. La resensibilisation des récepteurs...17
2.1.4.3. La désensibilisation lente...18
2.2.LES RÉCEPTEURS VPAC...21
2.2.1. Généralités-classification. ...21
2.2.2. Le ligand : le VIP...22
2.2.3. Rôle et localisation du VIP. ...22
2.2.4. Structure des récepteurs VPAC. ...23
2.2.5. Expression-localisation des récepteurs VPAC. ...24
2.2.6. Mode d’activation-régulation des récepteurs VPAC. ...25
2.2.7. Interaction ligand-récepteur...27
2.2.7.1. Contribution du ligand...27
2.2.7.2. Contribution du récepteur. ...27
3. BUT DU TRAVAIL ...29
4. MATÉRIEL ET MÉTHODES...32
4.1.L’IMMUNISATION GÉNÉTIQUE. ...33
4.2.CARACTÉRISATION DE L’ANTICORPS MONOCLONAL...34
4.3.ETUDE DE LA DÉSENSIBILISATION RAPIDE DU RÉCEPTEUR...36
5. RÉSULTATS...38
5.1.LE RÉCEPTEUR VPAC1 HUMAIN. ...39
5.1.1. Etude de la phosphorylation des récepteurs VPAC1 humains. ...39
5.1.1.1. Caractérisation de la phosphorylation...39
5.1.1.2. Identification des sites de phosphorylation. ...39
a) Mise en évidence d’une phosphorylation au niveau des boucles intracellulaires :...40
b) Mise en évidence d’une phosphorylation du domaine carboxy-terminal :...40
5.1.1.3. Elaboration d’un mutant non phosphorylable. ...41
5.1.2.Etude de l’internalisation et de la réexpression des récepteurs VPAC1 humains...42
5.1.2.1. Caractérisation de l’internalisation. ...42
5.1.2.2. Etude de l’internalisation et de la réexpression des mutants générés...43
5.1.3.Implication de la phosphorylation dans l’internalisation ou l’activation du récepteur VPAC1 humain ? ...44
5.1.4.Complément à l’étude de la phosphorylation du récepteur VPAC1 humain : substitution des ser/thr d’intérêts en acide glutamique. ...79
5.2.LE RÉCEPTEUR VPAC2 HUMAIN. ...83
5.2.1. Etude de la phosphorylation du récepteur VPAC2 humain...83
5.2.2. Etude de l’internalisation du récepteur VPAC2 humain. ...95
5.3.COMPARAISON DE LA PHOSPHORYLATION, DE L’INTERNALISATION ET DE LA RÉEXPRESSION DES DEUX RÉCEPTEURS VPAC. ...105
6. DISCUSSION GÉNÉRALE...107
7. BIBLIOGRAPHIE...120
