Stratégie d'établissement des cartes géniques. Exemple du porc

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Stratégie d’établissement des cartes géniques. Exemple

du porc

J Gellin, C Chevalet

To cite this version:

Article

_original

Stratégie

d’établissement

des

cartes

_géniques.

Exemple

du

_porc

J

_Gellin,

C Chevalet

Institut national de la recherche _agronomique,

laboratoire de _génétique cellulaire de Toulouse, 31326 _{Castanet-Tolosan,} France

Résumé - La _{cartographie génétique} chez les animaux _domestiques consiste d’abord à établir le long du génome un réseau de marqueurs génétiques espacés entre eux de 20 cM

et dont certains sont localisés avec _précision sur les chromosomes. Parmi les différentes

sources de _{polymorphisme disponibles} sur le _génome, les microsatellites sont les _plus intéressants à utiliser. Ils sont très _polymorphes, bien répartis le _long du _génome et leur étude _peut être automatisée. Les connaissances recueillies sur le _génome seront _intégrées

aux _{analyses quantitatives} actuelles _grâce à la mise en oeuvre de nouveaux _concepts

d’analyse génétique. Elles permettront une évaluation _précoce des génotypes, la mise en

évidence de régions du génome intervenant dans la variabilité de caractères quantitatifs

ou _QTL

_(pour

_quantitative trait

_loci),

une amélioration des méthodes d’identification des

animaux et de vérification des filiations et une appréciation de la diversité génétique des

races. _L’analyse des _parties codantes du génome complète le réseau de marqueurs. Elle

permet de comparer les génomes des différents mammifères et en _particulier de profiter des informations _disponibles sur la carte humaine. Le but final de la cartographie est d’isoler des _gènes d’intérêt _{zootechnique repérés} sur le génome.

génétique animale _/ cartographie génique / marqueur moléculaire / cytogénétique / porc

Summary - Gene _mapping strategy: the _pig as an _example. Gene _mapping of

economi-cally

important animal species involves _{first defining} a network of genetic markers evenly spaced along the genome, some _{of which} should be _precisely localized on the chromosomes.

Of the _different sources _{of polymorphism} available on the genome, microsatellites are the

most _{interesting. They} are _{highly polymorphic, spread along} the _genome and their _study can be automated. This _knowledge will _provide new tools and need the _{development of} new _concepts in the fields of quantitative and population genetics. The first expected

ap-plications are: an _early evalution of genotypes; the _{discovery of} genome regions involved

*

Participent

au _programme de cartographie du porc : le laboratoire de génétique

in the variability of quantitative characters; an _{improvement of} the methods _of animal identification and _{relationship verification;} and an estimation _of breed _{genetic diversity.} The _{analysis of} the genome coding parts completes this marker network. It allows _different mammalian genomes to be compared and information concerning the human map to be used. The _{final goal} is to isolate genes important for animal production.

animal genetic / gene mapping / molecular marker / cytogenetics / pig

INTRODUCTION

Les

_{développements}

récents des

_{méthodologies}

en

biologie moléculaire,

et l’essor très

_rapide

des travaux sur le

_{génome humain,}

_permettent

_{aujourd’hui}

d’aborder

l’investigation systématique

des

_génomes

d’autres

_organismes.

L’élaboration de

cartes

_géniques

est devenue une démarche

indispensable

pour aborder la

plupart

des

_problèmes

de

_biologie,

que ce _{soit pour} l’amélioration

_génétique

des animaux

d’élevage,

ou _pour des

problèmes plus

fondamentaux,

comme l’évolution et l’étude des maladies humaines.

L’objet

d’un programme de

cartographie

est de

_déterminer,

d’une

_façon

systéma-tique

et

_homogène,

mais nécessairement non

exhaustive,

la

_position

de _marqueurs

génétiques

et de

_gènes

sur les chromosomes de

l’espèce,

de caractériser le

polymor-phisme,

et in

_fine

de déterminer la structure moléculaire des

_gènes

et leur fonction

biologique

dans

_{l’organisme.}

Chez les _animaux, on _peut en attendre un

renou-vellement des concepts de diversité

_génétique

et de race, de la connaissance du

déterminisme héréditaire des caractères

_{polyfactoriels,}

et des méthodes de

_gestion

des

_populations,

ouvrant la

_possibilité

d’une identification

_complète

des animaux et

d’une meilleure maîtrise de caractères actuellement difficiles à sélectionner

_(facteurs

de

_qualité,

résistances

_génétiques

aux

_maladies).

L’établissement

systématique

de cartes

_génétiques

des

principales espèces

ani-males

_domestiques

a été

_entreprise

depuis quelques années,

dans le cadre de

pro-grammes de recherches internationaux. Chez les bovins les travaux ont débuté en

1978

_(Heuertz

et

_Hors-Cayla,

₁₉₇₈₎

et une

_première

revue a été

_publiée

par

Wo-mack

_(1984).

La dernière version de la carte bovine a été

_publiée

dans la revue

Mammalian Genome

_(Fries

et

_al,

_1993).

_Depuis

_1992,

la carte se

développe

no-tamment en

_Europe

au sein d’une trentaine de laboratoires

_regroupés

dans le pro-gramme

Bovmap-Biotechnology (coordination

INRA :

Levéziel)

(Gellin

et

Levéziel,

1992).

Chez le _porc, les

_premiers

travaux datent de 1980

_(Gellin

et

_al,

₁₉₈₀₎

et les

premières

revues ont été

_publiées

_par Ollivier et Sellier

₍₁₉₈₂₎

et Echard

_(1984).

Un «laboratoire sans mur» existe

depuis

1991 dans le cadre du

_projet

européen

PiGMaP-Bridge

(coordination

AFRC :

_{Archibald) (Archibald}

et

_al,

_1991).

Il réunit

une douzaine de laboratoires

_européens,

et s’est ouvert en 1993 à des laboratoires

américains,

australiens et

_{japonais. Enfin,}

_pour le

_génome

_aviaire,

une collaboration

internationale a

_pris

forme en 1992 au cours du

_congrès

de la Société internationale

de

_génétique

animale

_(ISAG).

Plusieurs

_{équipes françaises participent}

au

_{développement}

de la

_cartographie

des

en ce

_qui

concerne les travaux de

_biologie

moléculaire

_(isolement

de marqueurs,

analyse

de

_liaison,

localisation de

_gènes,

_typage des

_populations)

_que les travaux

de

_génétique

_quantitative

et des

_populations

_(dispositifs

_{expérimentaux, analyses}

statistiques,

étude de

_{caractères).}

Chez les

_petits

_ruminants, les

_équipes

abordent l’étude de

_{quelques gènes particuliers.}

Chez les ovins sont étudiés le

_gène

Booroola intervenant dans la

_{prolificité,}

le

_gène

ITY intervenant dans la résistance à la salmonellose et la

_protéine

«PrionProtéine» intervenant dans la

_scrapie.

Chez les

_caprins

sont étudiés les

_gènes

intervenant dans l’intersexualité et le débit de traite et les

_gènes

des caséines. Ces

_{équipes participent également}

au _programme

international de

_cartographie

du

_génome

_ovin,

coordonné _par la Nouvelle Zélande. En outre, sont

_engagés

de nouveaux _programmes de

_cartographie

concernant les

génomes

de la

_poule

et des salmonidés.

On _peut

_distinguer,

dans un _programme de

_{cartographie,}

3

étapes plus

ou moins

chevauchantes :

₁₎

la détermination d’un réseau

_homogène

et assez dense de

mar-queurs

génétiques polymorphes; 2)

la localisation des

gènes

contribuant de

_façon

importante

à la variabilité de caractères de

_production,

en utilisant le réseau de

marqueurs mis en

place;

3)

la caractérisation de

gènes

fonctionnellement

impor-tants pour

l’expression

et la variabilité des

_principaux

caractères de

_production.

Par la

_suite,

nous illustrerons cette démarche en nous référant aux travaux

concernant le _porc.

PREMIÈRE ÉTAPE : ÉTABLIR

UN

RÉSEAU

DE

_MARQUEURS

Il

_s’agit

d’établir une carte

_{génique composée}

de locus _marqueurs

_polymorphes,

liés de

_proche

en

proche

sur l’ensemble du

génome

de

façon homogène

et délimitant

autant de _groupes de liaison _que de chromosomes. Des distances

_génétiques

sont

définies _par le calcul des

_fréquences

de recombinaison entre les différents _marqueurs,

après

détermination du

_génotype

des individus des familles de référence. Les

marqueurs devront être distants au

_plus

de 20

_centimorgans

_(cM),

_pour une

longueur

totale du

_génome

du porc estimée à environ 25 morgans

(Andersson,

communication

_{personnelle).}

On établit simultanément une carte

_composée

de

marqueurs localisés sur les chromosomes en utilisant les

techniques d’hybridation

in situ. L’ensemble de ces 2 cartes _permet de contrôler la bonne

_répartition

des

marqueurs le

long

du

génome

et

d’analyser

la structure du

génome

par rapport aux

cartes humaine et murine. Familles de références

La réalisation du

_premier

réseau de _marqueurs dans le

_projet

PiGMaP

_s’appuie

sur une collection d’ADN

_génomique

issue de familles de référence _comprenant 26

grands-parents

F0,

18 _parents

_FI,

et 117 descendants F2

_(Archibald

et

_al,

_1991).

Chez le porc, la taille des

portées

et le

_rythme

de

_reproduction

sont un _avantage

pour

l’analyse

des

_{ségrégations.}

La diversité

_génétique

des races

_européennes

actuelles est relativement

_réduite,

c’est

_pourquoi

les familles de références sont issues de croisements _{entre porcs}

_européens

_{et porcs} chinois ou _{entre porcs}

européens

France,

en

_{Grande-Bretagne}

et en

Hollande,

les animaux sont issus d’un croisement

entre la race

Large

White et la race chinoise Meishan.

Choix d’une classe de marqueurs : les microsatellites

Parmi les différentes sources de

_{polymorphisme disponibles}

sur le

_génome,

les

mi-crc>satellites sont actuellement les marqueurs les

plus

utilisés. Ce sont des

séquences

d’ADN formées le

_plus

souvent par la

_répétition

du motif

_{dinucléotidique}

_(TG),

dont les

_propriétés

_permettent de construire un réseau dense de _{marqueurs :}

1)

ils

révèlent un

grand polymorphisme,

les allèles sont nombreux et diff’erent par le

porc

(Winter

0

et

al,

1992); 3)

le

polymorphisme

est étudié avec la

_technique

de

la PCR

_(polymerase

chain

_{reaction) (Weber}

et

_May,

1989;

Love et

_al,

_1990).

Les

amorces

nucléotidiques

sont choisies de _part et d’autre des

_{séquences microsatellites,}

dans les

_{régions flanquantes spécifiques}

du locus. Les

_produits

_{d’amplification}

obtenus à

_partir

de l’ADN des animaux sont

_déposés

sur un

gel

de

séquence

pour

l’observation des différents allèles.

_L’analyse

peut être automatisée et

_envisagée

à

_grande

échelle _pour des coûts raisonnables : ce _type de

_cartographie

est

_déjà

développé

au Généthon _pour la carte humaine

_(Weissenbach

et

_al,

_1992).

Isolement et localisation des microsatellites

La localisation

_{chromosomique}

de microsatellites par

hybridation

in situ

(Yerle

et

al,

1994)

est

_possible

à condition

_qu’ils

soient isolés à

_partir

de cosmides

_(fig

_2).

Ce

_procédé

est

_cependant

laborieux et la

_{majeure partie}

des microsatellites a été

obtenue à

partir

d’une

_banque

d’ADN

_génomique

réalisée dans des

_plasmides.

L’ADN

_adjacent

isolé est de l’ordre de 600

_pb

et cette taille réduite ne _permet

pas de mettre en oeuvre les

_{techniques d’hybridation}

in situ. Les chromosomes

porteurs

de ces microsatellites sont déterminés par 2

techniques

complémentaires :

l’hybridation

cellulaire et le tri de chromosomes.

Le

_{panel d’hybrides}

cellulaires

_disponible

chez le _porc demeure

_incomplet,

les

caryotypes

ne sont _pas établis et c’est surtout des

_{synténies (2 gènes}

situés sur le

même

_chromosome)

_qui

_peuvent être recherchées.

Le tri de chromosome en

_cytométrie

de flux

_sépare

les chromosomes du _porc

(Schmitz

et

_al,

_1992),

et

_depuis

_peu, on connaît

_l’origine

_{chromosomique}

de

chaque

pic

du

_«caryotype

en flux». Ce résultat a été obtenu par des

expériences

d’hybridation

in situ. L’ADN contenu dans

_chaque

_pic

est

_{amplifié, marqué}

par une

molécule fluorescente et utilisé comme sonde pour «colorier» dans une

_métaphase

de

_leucocytes

de porc le chromosome

correspondant (Milan

et

_al,

_1993;

Yerle et

al, 1993b;

Langford

et

_al,

_1993).

Cette connaissance de l’ensemble du _caryotype en

flux _permet maintenant d’utiliser l’ADN des chromosomes triés pour

assigner

les

marqueurs

génétiques

isolés et

_compléter

les données de

_synténie.

De

_plus,

l’ADN d’un chromosome

_particulier

isolé par

cytométrie

de

flux,

permet de construire des

banques

d’ADN

_puis

d’isoler des microsatellites

_spécifiques

de ce chromosome. Ce

processus est

particulièrement

intéressant pour isoler des microsatellites à

partir

des chromosomes pour

lesquels

peu de marqueurs sont connus.

Chez

_l’Homme,

de très nombreux microsatellites ont été isolés et localisés

(Weissenbach

et

_al,

_1992).

Des

_couples

d’amorces

_spécifiques

de microsatellites humains

_assignés

chez l’Homme _peuvent être testés sur de l’ADN de porc. La

possibilité

d’utiliser dans certaines conditions des microsatellites humains ouvre

des

_perspectives

de

_comparaison

des cartes

_génétiques

des 2

_espèces.

Typage

des animaux

Les programmes d’étude des cartes

_génétiques

et

_plus

encore la seconde

_étape

de

lo-calisation de

_gènes

à effets

_quantitatifs

_(QTL)

nécessitent la réalisation de nombreux

tests

_{génétiques.}

Nous avons choisi d’utiliser des

_techniques

d’analyse

_automatique

Biosystems)

permet la mesure exacte de la

_longueur,

en nombre de

_paires

de bases

(pb),

des

_fragments

d’ADN

_amplifiés.

Le

principe

de détection est basé sur

_l’emploi

de molécules fluorescentes

_couplées

aux amorces utilisées _pour la PCR. Comme en

moyenne la différence de taille entre les allèles extrêmes d’un microsatellite est de

l’ordre de 30 à 40

_pb

_{et que} l’on

_dispose

de 3 types de molécules

fluorescentes,

il est

possible d’analyser

dans une même

_piste

_jusqu’à

4 ou 5 _marqueurs différents avec

chaque

molécule fluorescente

_{(fig 3).}

L’ensemble du processus est contrôlé par l’intermédiaire d’une base de

données,

développée

pour

répondre

à

plusieurs

besoins

complémentaires :

gestion

des

in-formations sur les _animaux, des stocks

d’ADN,

des microsatellites et des

condi-tions

_{expérimentales;}

aide au choix automatisé des lots d’animaux et de _marqueurs

analysés simultanément;

reconnaissance

_automatique

des

_allèles;

vérification de la conformité des résultats avec les

_{généalogies;}

exportation

de données validées vers

les bases de données

_{génétiques.}

Carte

_{physique :}

étude de la

_position

des

_gènes

Les études de la

_position

des

_gènes

ont été d’abord

_{développées}

en étudiant des

relations de

_synténies

entre

_{gènes grâce}

aux

hybrides

cellulaires

(Gellin

et

al,

1980).

Ensuite,

les

_{techniques d’hybridation}

in situ se sont

_{développées}

avec des sondes

d’ADN

_marqué

au tritium

(Gellin

et

al, 1985;

Yerle et

_al,

₁₉₈₆₎

puis

avec des

sondes d’ADN fluorescent

_(Yerle

et

al,

1992).

Cette activité a

_permis

de localiser

de nombreux

_gènes

_(Andersson

et

_al,

_1993).

Ces résultats mettent en évidence la

conservation de

_portions

_{chromosomiques}

au travers des

espèces (Yerle

et

al,

1990;

Mellink et

al,

1993).

Ces

_points

de

_{repères précisent}

la distribution du

_premier

réseau de _marqueurs

_génétiques

et

_soulignent

les zones non encore suffisamment

État

actuel de la carte du porc

En août

1989,

la carte du _porc était

_composée

de 48 marqueurs

(Echard,

1990).

La dernière carte

_publiée

_(Andersson

et

_al,

₁₉₉₃₎

fait état de 170 marqueurs,

60

_{correspondent}

à des

_fragments

d’ADN _anonymes dont une

_cinquantaine

de

microsatellites. Des marqueurs sont

assignés

à tous les chromosomes sauf pour

les 2

_plus

_petits,

le 17 et le 18

_(le

_porc a 18

_paires

de chromosomes

plus

les 2

chromosomes

_{sexuels). Des groupes}

de liaison ont été

_assignés

aux chromosomes

_1,

2, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13,

14 et 15. Douze groupes de liaison ne _{sont pas} encore

assignés

à un chromosome.

DEUXIÈME ÉTAPE :

LOCALISATION DE

GÈNES À

EFFETS

QUANTITATIFS

(QTL)

Les cartes

_génétiques

_moyennement

denses,

où _{2 marqueurs} consécutifs sont à une

distance de l’ordre de 20

_cM,

renouvellent les méthodes

_qui

visent à localiser des

QTL.

En

_effet,

l’existence d’un réseau de marqueurs, et non

_plus

de _marqueurs

épars,

permet de suivre avec

_précision

la transmission de

_fragments

entiers de chromosomes entre parents et descendants.

_Malgré

une efficacité moindre chez

l’animal _que chez les

_plantes,

cela accroît sensiblement la

_puissance

des tests

statistiques,

en limitant le

_risque

de ne _pas détecter la

_{ségrégation}

d’un

_gène

important

(Lander

et

_{Botstein, 1989;}

_Haley

et

_al,

_1994).

Le

_{dispositif expérimental}

Le

_{dispositif expérimental français s’appuie,}

comme _pour la

_{première étape}

de la

cartographie,

sur des animaux issus de croisements entre les races

_Large

White

et Meishan. Ces 2 races diffèrent pour un

grand

nombre de caractères d’intérêt

économique

(Legault

et

_{Caritez, 1983;}

_Legault

et

_{al, 1985;}

Bidanel et

_al,

_1993).

Elles

présentent

chacune des

_{aptitudes potentiellement}

intéressantes. La race Meishan se

caractérise par une faible vitesse de croissance et une forte

adiposité

de la carcasse,

mais une

_précocité

sexuelle et une

_{prolificité supérieures}

au

_Large

White

_(Bidanel

et

_{al, 1989;}

_1990).

La

_divergence

_{phénotypique}

entre ces 2 races _permet de se

_rapprocher

d’une

situation où des allèles différents sont fixés dans les 2

_{populations parentales pour}

chacun des

_QTL.

Dans cette

_hypothèse

et avec les effectifs

_prévus

de 500

_produits

F2,

on doit détecter avec une

_puissance

de 70 à 80% un

_QTL

tel _que les allèles

correspondant

induisent une différence d’environ

_0,5

écart _type

phénotypique.

Ces

ordres de

_grandeur

_permettent

_{d’envisager}

la recherche de

_QTL

_pour des caractères d’héritabilité _moyenne

_(Bidanel,

communication

_{personnelle).}

Les caractères étudiés

Plusieurs groupes de

caractères,

choisis pour leur

importance

économique

ont été

retenus :

- les caractères liés à la

- la

qualité

de la viande :

_paramètres

_{technologiques}

et taux

_{d’androsténone,}

stéroïde contribuant aux odeurs de la viande de mâle

_{entier ;}

- la

reproduction : fertilité, prolificité,

taux

_{d’ovulation,}

et mécanismes

physiolo-giques

de l’établissement de la fonction sexuelle chez les

_femelles;

- la réactivité

comportementale, neurovégétative

et neuroendocrinienne du

porce-let;

- la résistance à la diarrhée néonatale du

porcelet ;

- des

paramètres hématologiques.

Parallèlement à ces mesures de caractères de

_production,

le nombre de _typages

à réaliser avec les microsatellites sur les animaux du

_{dispositif expérimental}

est de l’ordre de 150000. En

_effet,

certains caractères ne

_{s’expriment}

_que dans un seul sexe et 500 animaux de

_chaque

sexe seront

_typés

pour environ 150 marqueurs.

TROISIÈME ÉTAPE : L’ACCÈS

AUX

GÈNES

La troisième

_étape

de la

_cartographie

sera une

_approche

de

_biologie

moléculaire

plus

ciblée sur des

régions

restreintes du

génome.

Les

QTL repérés

sur le

_génome

devront être encadrés par des marqueurs

plus proches

afin de mieux suivre leurs

ségrégations

dans les croisements. Cette activité _permettra

_également

de localiser

plus

finement le

_{gène responsable}

et à terme de le caractériser et l’isoler. L’utilisation des données

_d’analyse

de

_séquences,

de la

_physiologie

et de la

_{cartographie comparée}

entre mammifères deviendra essentielle. Au niveau

_technique,

les nouveaux vecteurs

de

_clonage

et la recherche

_{systématique}

de

_{polymorphisme}

dans l’ADN devront être utilisés.

_L’analyse

des

_parties

codantes du

_{génome correspondant}

à des fonctions

physiologiques

sera une bonne méthode pour proposer des

gène

candidats _pour les

QT

L

.

Isolement des

_gènes

Les recherches de _marqueurs

_{supplémentaires}

_pourront être concentrées sur les

régions

où un

_QTL

a été

_suspecté.

Ces

_précisions

sur la

_position

d’un

_gène

serviront de base _pour le

_clonage

et l’isolement de ces

_gènes.

En _passant de l’utilisation

d’un _marqueur à la connaissance du

_{gène lui-même,}

on _peut mettre au

_point

un

_typage

plus performant

_{qui supprime}

les

_{imprécisions}

liées au _pourcentage de

recombinaison _{entre marqueur et}

_{QTL. L’analyse}

de la

_{séquence complète}

du

_gène

donne la

_possibilité

de

_répertorier

tous les allèles du

_{QTL disponibles}

pour des

actions de sélection. Un

_exemple

est donné avec les

_gènes

des caséines de la chèvre

(Martin

et

_{Grosclaude, 1993).}

L’absence d’information

_{physiologique}

devient vite un

_handicap

_important.

Dans

le

cas du

_gène

de sensibilité à l’halothane _par

_exemple,

le _{processus physiologique}

responsable

du

_syndrome

était bien connu notamment

_grâce

aux informations

complémentaires disponibles

chez l’Homme. Le

_{gène responsable}

a été isolé et la

mutation causale a été caractérisée. Des preuves doivent s’accumuler pour être sûr que l’on a bien isolé le

gène

_que l’on cherche _{et constater notamment que} la

_séquence

de l’ADN du

_gène

candidat code _pour une structure

_protéique

en accord avec la

L’isolement des

_gènes

nécessite l’utilisation de vecteurs

_capables

de cloner de

grands

fragments

d’ADN.

_{Jusque là,}

les cosmides _ayant une

capacité

de

clonage

de

45 kb d’ADN ont été utilisés pour la carte du porc, notamment dans la recherche

de microsatellites

_(Ellegren

et

_al,

_1993,

Robic et

al,

1994).

L’utilisation de vecteurs

ayant

des

_capacités

de

_{clonage plus}

_importante

est

_envisagée.

Dans le cadre du consortium

_européen

sur la carte du _porc les laboratoires

envisagent

la

préparation

d’une

_banque

d’ADN cloné dans des chromosomes artificiels de levure

_(YAC).

Ce

système

permet de cloner de

_{grands fragments}

d’ADN de

_plusieurs

centaines de kilobases. Ce _type de clone est très utilisé actuellement en

cartographie

humaine.

Cette recherche ciblée de marqueurs et l’utilisation d’ADNc seront associées à une

utilisation la

_{plus complète possible}

du

_{polymorphisme}

sur l’ADN. Les

techniques

allant dans ce sens se

développent

actuellement

(Grompe, 1993) .

La

_{cartographie comparée}

La notion d’une conservation entre

_{espèces de certains groupes de}

liaison et de

synténie

s’est

_{dégagée progressivement.}

La ressemblance des cartes _permet, dans certains cas, l’utilisation de modèles animaux pour l’étude de maladies héréditaires

humaines;

inversement, l’identification et le

_clonage

de

gènes responsables

d’anoma-lies héréditaires chez l’Homme ou la souris _permettront de formuler des

hypothèses

sur la nature de certains

_gènes

majeurs

chez les animaux

_domestiques.

La carte

comparée

constitue un élément

_important

des

stratégies

de

cartographie

à

met-tre en _oeuvre, même si cette

_approche

a ses limites car la conservation d’éléments

génétiques

communs à travers les

espèces

est

partielle.

Cette démarche peut per-mettre de trouver

_rapidement

des marqueurs

judicieusement

distribués le

long

du

génome.

L’utilisation la

_plus

_importante

est de

_pouvoir

_désigner

pour des

QTL

ou

gènes

majeurs

un

_gène

candidat

déjà repéré

dans une zone _ayant une

équivalence

avec un chromosome humain.

Quelques

_comparaisons

sont

_déjà

réalisées _pour

plu-sieurs chromosomes du porc

(Yerle

et

al, 1990;

Mellink et

al,

1993).

Cette

approche

profite

des travaux

_approfondis

réalisés sur la carte humaine. L’utilisation chez

plu-sieurs

_espèces

des mêmes locus

microsatellites,

comme chez l’Homme et le porc,

ou mieux chez des

espèces proches

comme les

_bovins,

ovins ou

_{caprins, permettra}

de _{progresser rapidement} dans la

_comparaison

des cartes. Une étude

systémati-que de

comparaison

des cartes peut

également

être

envisagée

dans les 3 directions

suivantes : - la fabrication

par PCR des sondes

spécifiques

du porc à

partir

des informations

de

_séquences

recueillies chez

l’Homme;

- les

expériences d’hybridation

in situ _par

_{«coloriage» spécifique}

de chromosome

pour comparer les

génomes

des

mammifères ;

- l’utilisation de

banque

d’ADN

_{complémentaires (ADNE) correspondant}

à une

fonction

_{physiologique.}

Fabrication de sondes

_homologues

Dans un

_premier

_temps, l’utilisation de sondes de

gènes

localisés chez l’Homme

est utile pour créer un

premier

réseau de

comparaison.

Tout

gène

connu _peut être

partir

d’amorces «consensus» choisies _par

_comparaison

des

_séquences

du

_gènes

dans

différentes

_espèces.

Ces

_gènes

sont localisés sur le

_génome

par

hybridation

in situ et _peuvent faire

_l’objet

d’une recherche

_{systématique}

du

_{polymorphisme}

_(Grompe,

1993).

Coloriage

des chromosomes

L’ADN

_spécifique

d’un chromosome humain issu d’une

_{génothèque partielle}

_peut être utilisé comme sonde sur des

_métaphases

de différents

_singes

afin de

détermi-ner des

équivalences

entre chromosomes

_(Jauch

et

_al,

_1992).

Des

_expériences

simi-laires

_{d’hybridation hétérologue}

sont tentées entre l’ADN humain

_spécifique

d’un chromosome et des chromosomes du porc. Il est sans doute nécessaire dans le cas

d’espèces

aussi différentes de sélectionner dans l’ADN humain les

_parties

suscepti-bles de

_s’hybrider

avec l’ADN de porc. Bien que

difficiles,

ces

expériences

ont un

caractère

_{systématique}

et _permettront de caractériser les

_{régions homologues}

des chromosomes

_porcins

et humains.

Utilisation des ADN

_{complémentaires}

Les _avantages des microsatellites

_justifient

leur utilisation _quasi exclusive comme

marqueurs pour la

cartographie génétique

et _pour la recherche

_{systématique}

de

_QTL

dans l’ensemble du

_génome.

Ces marqueurs ont le défaut de ne _pas

_correspondre

à

des

_parties

codantes de l’ADN. Pour cette

_raison,

il est essentiel d’associer au réseau

de

_{microsatellites,}

_{«squelette»}

fondamental de la _carte, des _marqueurs

_plus

classi-ques constitués de

séquences

d’ADN codant _pour des

_gènes

_qui

interviennent dans les mécanismes fondamentaux des

_organismes

ou dans des fonctions

spécialisées

telles que la

reproduction.

Cette carte fonctionnelle _pourra être reliée à des cartes

plus développées

comme celle de l’Homme. Des ADNc _peuvent être isolés à

_partir

de cellules folliculaires et de cellules nerveuses ou de cellules de

_glande

mammaire. L’isolement de ces

_gènes

est obtenu _par des

_criblages

différentiels entre des

ban-ques d’ADNc obtenues de cellules

plus

ou moins

_engagées

dans leur différentiation.

Ces marqueurs sont intéressants _{pour :}

₁₎

trouver de nouveaux

_gènes

_importants

pour la fonction

physiologique étudiée;

2)

décrire le

_{polymorphisme}

et la diversité

génétique; 3)

comparer les différents

génomes

des mammifères

_(structure

du

_gène,

localisation)

et _proposer

_ainsi,

_par

_{cartographie comparée,}

des

_gènes

candidats _pour les

_QTL.

CONCLUSION ET PERSPECTIVES

La

_première

_étape

de la

_{cartographie génétique}

_apportera un réseau de _marqueurs

localisés

_grâce

au travail

conjoint

de

_{plusieurs équipes}

sur les mêmes familles

de référence. Les distances _{entre marqueurs,} calculées sur ces

_familles,

seront

ensuite

_précisées

à l’occasion des

_expériences

de localisation de

_QTL,

_qui

font

appel

à des effectifs

_{beaucoup plus}

élevés

₍₅

à 10 fois

_plus

de descendants

_F2),

et

progressivement

de nouveaux _{marqueurs seront} inclus dans des

_{régions particulières}

Les utilisations des résultats de

_cartographie

vont concerner tant la

_génétique

des

_populations

que la

génétique

quantitative

dans ses _aspects

_appliqués

(sélection)

et fondamentaux

_{(compréhension}

du déterminisme

_génétique

des

_{caractères).}

Identification des allèles de

_{gènes majeurs}

Une des

_premières

attentes de la

_cartographie

est la localisation de

_gènes

_majeurs,

dont l’existence a

déjà

été mise en évidence _par des

analyses

_statistiques

(Le

Roy

et

al,

1989).

Des

_exemples

de

_gènes

_majeurs

existent dans

_{plusieurs espèces}

comme le

gène

Rn de

_qualité

de la viande chez le porc ou le

gène

Booroola intervenant dans la

_prolificité

des ovins. La

_description

des

_{polymorphismes génétiques}

_permettra d’associer ces

gènes

à des marqueurs et donc d’identifier le

génotype

des animaux

dès leur naissance. Pour le

_gène

de sensibilité à

_{l’halothane,}

cette

_approche

a _pu

être utilisée

_(Guérin

et

_al,

₁₉₈₃₎

bien _{avant que} le

_gène

lui-même ne soit isolé et que la mutation causale ne soit identifiée

_(Fujii

et

_al,

_1991).

Introgression

La caractérisation des

_génotypes

_pour un

_gène

_majeur

_permet de concevoir des pro-tocoles

_{d’introgression}

_{plus rapides}

_grâce

à la caractérisation

_précoce

des

_génotypes

(Hospital

et

_Elsen,

_1992).

On peut

optimiser

ces

protocoles

_si,

en dehors du locus du

gène

majeur,

on

_dispose

de _marqueurs dont les allèles _permettent de décider

_qu’un

chromosome

_provient

de la

_population

«donneuse» ou «receveuse» du

gène

_majeur

introgressé.

Si les taux de sélection le _permettent, le choix des individus _porteurs de l’allèle favorable au locus

_majeur

_peut alors être

_optimisé

pour accélérer aux autre

locus le retour vers la structure

_génétique

de la

_population

receveuse

(Hospital

et

al,

1992).

Il est à _{noter que cette}

_application

ne

_présuppose

_pas une association

entre marqueurs et

gènes

à effets

_{quantitatifs,}

mais seulement la

_{disponibilité}

de

marqueurs

répartis

assez uniformément sur le

_génome.

Sélection assistée _{par marqueurs}

L’introgression

utilisant des _{marqueurs est} un cas

_particulier

de «sélection assistée

par marqueurs». Celle-ci peut être

_envisagée

dans le cadre usuel des

_protocoles

d’évaluation des

_{reproducteurs,}

si l’on a identifié un _marqueur

polymorphe

étroi-tement lié à un

QTL.

La donnée du

_type

_allélique

_reçu au locus _{marqueur est}

introduite d’une

_façon

similaire à celles décrivant les niveaux de variation d’un effet

d’environnement ;

l’effet du

_QTL

associé est estimé pour

chaque

individu,

et cette

estimation est

_intégrée

dans l’évaluation de la valeur

_{génétique globale}

_(Fernando

et

Grossman, 1989).

Des méthodes

_plus

directes de sélection sur un indice combinant

les valeurs

_{phénotypiques}

et les

_génotypes

en de nombreux _{marqueurs ont} aussi

été

_proposées

_(Lande

et

_Thomson,

_1990),

dans la situation où l’on sélectionne une

population

issue d’un croisement entre 2 races

_présentant

une

_grande

_divergence

(Chevalet

et

_Boichard,

_1992).

La recherche de

_QTL

_pour les caractères de

_reproduction

chez le porc

ap-paraît

particulièrement

intéressante,

car les allèles favorables _{seront pour} une

grande

part

apportés

par la race Meishan.

_Inversement,

la détermination dans

européennes

pour les caractères

d’engraissement

et de

composition

corporelle

no-tamment, permet

d’envisager

la mise en oeuvre d’un

_protocole

reprenant les

prin-cipes

généraux

d’un schéma

_{d’introgression.}

L’existence de marqueurs délimitant

les

_{régions chromosomiques}

déterminant ces différents caractères

_permettrait

d’en-visager

la construction d’une race

_synthétique

réunissant les allèles favorables des

2

_populations

_parentales.

On _peut ainsi

_imaginer

améliorer les

_performances

de

reproduction

des _types

_génétiques

maternels utilisés à l’heure actuelle en

_Europe,

sans

dégrader

la valeur charcutière de leurs

produits

croisés.

Caractérisation de la diversité

_génétique

La caractérisation

_génétique

des

_populations

_permet d’améliorer les méthodes d’identification des

_animaux,

de vérifier les filiations

_{(Hanset, 1975)}

et de

_gérer

la diversité. Un choix

_judicieux

de

_quelques

_marqueurs microsatellites devrait

per-mettre de

_répondre

aux 2

_premières

_{applications, malgré}

une attention

particulière

à _porter au taux de mutation de ce _type de _marqueur,

_probablement

assez élevé

quoique

mal connu. Pour la

_gestion

de la

_diversité,

les microsatellites sont utilisés

par

exemple

chez les bovins. Un marqueur idéal pour ce _type d’étude devra révéler un

_{grand polymorphisme}

et

_{présenter malgré}

tout un taux de mutation bas. Il _peut être

_judicieux

d’étudier la

_partie

codante du

_génome

a

_priori

plus représentative

de la diversité. Dans ce _cas, le

_{polymorphisme}

_disponible

_peut s’avérer suffisant avec de nouvelles méthodes

_d’analyses

comme la DGGE

(denaturing

gradient gel

electrophoresis) (Myers

et

_al,

₁₉₈₇₎

associée à la PCR. Plus

_qu’une

étude du

po-lymorphisme

de marqueurs ou de

_gènes,

un travail au niveau de la structure du

génome

serait sans doute fructueux. Un certain nombre de groupes de marqueurs

polymorphes

et liés entre eux _peuvent être choisis _{pour mettre} en évidence non

seulement des allèles

_spécifiques

dans différentes races mais _{surtout pour mettre} en

évidence des

_{haplotypes préférentiels plus}

ou moins

particuliers

à

chaque

race.

La

_{disponibilité}

de _marqueurs

_génétiques

_permet de mesurer une diversité

génétique

dans les

_populations,

et _apporte donc à la

_génétique

des

_populations

de nouveaux _moyens. Par

exemple,

les méthodes de contrôle de la variabilité

génétique

trouveront là des outils nouveaux

_d’analyse

et de

_gestion

_{(Chevalet, 1992),}

complémentaires

des

_approches

fondées seulement sur des mesures

d’apparentement

calculées

_d’après

les

_{généalogies}

_(Rochambeau

et

_Chevalet,

_1985).

Dans les

_populations

_naturelles,

une

_{application rapide}

concernera la mesure de

flux

_migratoires.

On _pourra aussi aborder la recherche de

_régions

du

_génome,

puis

de

_{gènes, impliquées}

dans certains mécanismes de la

_spéciation.

Par

_exemple

l’ana-lyse

de croisements entre individus

_{d’espèces proches}

dans des zones de contact

(Vanlerberghe

et

al,

1988)

devrait mettre en évidence des associations entre

mar-queurs et caractères

participant

au

_phénomène

de

dysgenèse hybride (distorsions

de

ségrégation,

détermination du sexe,

symétrie

bilatérale).

On peut aussi _{penser que} l’étude des structures

_génétiques

_(gradients

de

_fréquences,

_{déséquilibres}

de

_liaison)

REMERCIEMENTS

Les travaux de _cartographie des _porcins et des bovins sont financés par l’AIP INRA

Agrotech-Prodige, par les programmes Génome et GREG

(groupement

de recherches et

d’études sur les

génomes)

du ministère de la Recherche et de la _Technologie et _par la Communauté économique européenne

(BRIDGE-PiGMaP

et

_{BIOTECH-BovMap).}

RÉFÉRENCES

Andersson

_L,

Archibald

_LA,

Gellin

_J,

Schook LB

₍₁₉₉₃₎

_Report

of the lst

_pig

gene

mapping

workshop

(PGMI),

7th

_August

_1992,

Interlaken Switzerland. Anim Genet

24, 205-216

Archibald

_{A, Haley}

_CS,

Andersson

_L,

Bosma

_AA,

Davies

_M,

Fredholm

_M,

Gelder-mann

H,

Gellin

_J,

Groenen

M,

Gustavsson

I,

Ollivier

L,

Tucker

EM,

Van de

Weghe

A

₍₁₉₉₁₎

PiGMaP : A

_European

initiative to _map the

_porcine

genome.

Proceedings

of the XXII International Conference on Animal Genetics. East

Lansing

USA. Anim

Genet 22

_(suppl),

82-83

Barendse

_W,

_Armitage

_SM,

Kossarek LM et al

₍₁₉₉₄₎

A

_genetic

_linkage

map of the

bovine genome. Nat Genet

6,

227-235

Bidanel

_JP,

Caritez

_JC,

Gruand

_J,

_Legault

C

_{(1993) Growth,}

carcass and meat

quality performance

of crossbred

_pigs

with

_graded

_proportions

of Meishan _genes. Genet Sel Evol _25, 83-99

Bidanel

_JP,

Caritez

_JC,

_Legault

C

₍₁₉₈₉₎

Estimation of

_{crossbreeding}

_parameters between

_Large

White and Meishan

_porcine

breeds. I.

_{Reproductive performance.}

Genet Sel

Evol 21,

507-526

Bidanel

JP,

Caritez

JC,

Legault

C

₍₁₉₉₀₎

Estimation of

_{crossbreeding}

parameters

between

_Large

White and Meishan

_porcine

breeds. II. Growth before

_weaning

and

growth

of females

_during

the

_growing

and

_{reproductive periods.}

Genet Sel

Evol 22,

431-445

Bishop

MD, Kappes SM,

Keele JW et al

₍₁₉₉₄₎

A

_genetic

_linkage

_map for cattle. Genetics

_136,

619-639

Chevalet C

₍₁₉₉₂₎

Utilisation de marqueurs pour la

sauvegarde

de la variabilité

génétique

des

_populations.

Prod Anim hors série «Eléments de

_génétique

quantita-tive et

_application

aux

populations

animales»,

295-297

Chevalet

_C,

Boichard D

₍₁₉₉₂₎

Sélection assistée par marqueurs. Prod Anim hors

_série,

«Eléments de

_génétique

_quantitative

et

_application

aux

_populations

animales»,

291-294

Echard G

_{(1984) The gene}

map of the

pig

(Sus scrofa

domestica

_L).

In: Genetic

maps. Cold

Spring

Harbor

Laboratory

Press

3,

392-395

Echard G

₍₁₉₉₀₎

The gene map of the

pig.

In: Genetic maps. Cold

Spring

Harbor

Laboratory

Press

_5,

4110-4113

Ellegren

H,

Johansson

_M,

_Chowdhary

BP et al

_{(1993) Assignment}

of 20 microsa-tellite markers to the

_porcine

_linkage

_map. Genomics

_16,

431-436

Fries

_{R, Eggen A,}

Womack J

₍₁₉₉₃₎

The bovine _{genome map.} Mamm Gen

_4,

405-428

Fujii

J,

Otsu

_K,

Zorzato

_F,

de Leon

_S,

Khanna

_VK,

Weiler

_J,

O’Brien

_PJ,

MacLennan DH

₍₁₉₉₁₎

Identification of a mutation in

_porcine

_ryanodine

_receptor

associated with

_malignant

_{hyperthermia.}

Science

_253,

448-451

Gellin

_J,

Benne

_F,

_Hors-Cayla

_MC,

Gillois M

₍₁₉₈₀₎

Carte

_génique

du _porc

_(Sus

scrofa L)

I : Etude de 2 groupes

synténiques

G6PD,

PGK,

HPRT et

_PKM2,

MPI. Ann Génét

_23,

15-21

Gellin

_J,

Echard

_G,

Yerle

_M,

Dalens

_M,

Chevalet

_C,

Gillois M

₍₁₉₈₅₎

Localization

of.the

_(a)

and

₍₆₎

_{casein genes} to the

_q24

_region

of chromosome 12 in the rabbit

( Oryctolagus

cuuiculus

_{L) by}

in situ

_{hybridization. Cytogenet}

Cell Genet

_39,

220-223

Gellin

_J,

Grosclaude F

₍₁₉₉₁₎

_Analyse

du

_génome

des

_{espèces d’élevage :}

_projet

d’établissement de la carte

_génétique

du porc et des bovins. Prod Auim

4,

97-105 Gellin

_J,

Levéziel H

_{(1992) Stratégie}

d’établissement des cartes

_géniques

des

_espèces

d’élevage.

Prod Anim hors

_série,

«Eléments de

_génétique

_quantitative

et

_application

aux

_populations

_animales»,

281-286

Grompe

M

₍₁₉₉₃₎

The

_rapid

detection of unknown mutations in nucleic acids. Review. Nat

_{Genet 5,}

111-117

Guérin

_G,

Ollivier

_L,

Sellier P

_(1983).

Étude

du groupe de liaison

Hal,

Phi et

Pgd

chez le _{porc :}

_disposition

relative des 3 locus et estimation des taux de recombinaison. Génét Sél

_{Evol 15,}

55-64

Haley CS,

Knott

_SA,

Elsen JM

_{(1994) Mapping}

_quantitative

trait loci in crosses

between outbred lines

_using

least _squares. Genetics

_136,

1195-1207

Hanset R

₍₁₉₇₅₎

Probabilité d’exclusion de

_paternité

et de

_monozygotie,

_probabilité

de similitude. Généralisation à N allèles codominants. Ann Med Vet

_119,

71-80 Heuertz

_{S, Hors-Cayla}

MC

₍₁₉₇₈₎

Carte

_génétique

des bovins _par la

_technique

d’hybridation

cellulaire. Localisation sur le chromosome X de la

_{glucose-6 phosphate}

déshydrogénase,

la

_{phosphoglycérate kinase, l’a-galactosidase}

A et

_{l’hypoxanthine}

guanine

phosphoribosyl

transférase. Ann Génét

_21,

197-202

Hospital

F,

Chevalet

_C,

Mulsant P

₍₁₉₉₂₎

_Using

markers in _gene

_{introgression}

breeding

programs. Genetics

132,

1199-1210

Hospital F,

Elsen JM

_{(1992) Introgression génique}

assistée par marqueurs. Prod

Anim hors série «Eléments de

_génétique

_quantitative

et

_application

aux

_populations

animales»,

299-302

Jauch

_A,

_Wienberg

_{J, Stanyon}

R et al

₍₁₉₈₉₎

Reconstruction of

_genomic

rearran-gements in _{great apes} and

_{gibbons by}

chromosome

_painting.

Proc Natl Acad Sci

USA,

8611-8615

Lande

_R,

_Thompson

R

_{(1990) Efficiency}

of marker-assisted selection in the

improve-ment of

_quantitative

traits. Genetics

_124,

743-756

Lander

ES,

Botstein D

₍₁₉₈₉₎

_Mapping

mendelian factors

_underlying

_quantitative

traits

_using

RFLP

_linkage

_maps. Genetics

_124,

185-199

Langford CF,

Telenius

_H,

Miller

_NGA,

Thomsen

_PD,

Tucker EM

₍₁₉₉₃₎

Prepara-tion of

_{chromosome-specific}

_paints

and

_{complete assignment}

of chromosomes in the

pig

flow

_{karyotype. Anim}

Genet

_24,

261-267

Legault C,

Caritez JC

₍₁₉₈₃₎

_{L’expérimentation}

sur le _porc chinois en France. I. Performances de

_reproduction

en race pure et en croisement. Génét Sél Evol

_15,

225-240

Legault C,

Sellier

_P,

Caritez

_JC,

Dando

_P,

Gruand J

₍₁₉₈₅₎

_{L’expérimentation}

sur

le _porc chinois en France. I. Performances de

_production

en croisement avec les races

_{européennes.}

Génét Sél

_{Evol 17,}

133-152

Love

J,

Knight A,

Mcaleer

_M,

Todd J

₍₁₉₉₀₎

Towards construction of a

high

resolution _map of the mouse _{genome using PCR-analysed} microsatellites. Nucleic

Acids Res

_18,

4123-4130

Martin

P,

Grosclaude F

₍₁₉₉₃₎

_Improvement

of milk

_protein

_{quality by}

gene

technology.

Livestock Prod Sci

_35,

95-115

Mellink

_C,

Lahbib-Mansais

_Y,

Yerle

_M,

Gellin J

₍₁₉₉₃₎

Localization of four new

markers to

_pig

chromosomes

_{1, 6,}

and 14

_by

radioactive in situ

_{hybridization.}

Cytogenet

Cell Genet

_64,

256-260

Milan

_D,

Yerle

_M,

Schmitz

_{A, Chaput}

_B,

Vaiman

_M,

Frelat

_G,

Gellin J

₍₁₉₉₃₎

A PCR based method to

_amplify

DNA with random

_primers:

_determining

the chromosomal content of

_porcine

_{flow-karyotype peaks by}

chromosome

_painting.

Cytogenet

Cell Genet

62,

139-141

Myers RM,

Maniatis

T,

Lerman L S

₍₁₉₈₇₎

Methods

_{E!zymol 155,}

501-527 Ollivier

_L,

Sellier P

_{(1982) Pig genetics:}

a review. Ann Génét Sél Anim

_14,

481-544

Robic

_A,

Dubois

_C,

Milan

_D,

Gellin J

₍₁₉₉₄₎

A

_rapid

method to isolate micro-satellite markers from cosmid clones.

_(à

_paraître

dans Mammalian Genome vol

₅₎

Rochambeau H

_de,

Chevalet C

₍₁₉₈₅₎

Minimisation des coefficients de

consan-guinité

dans les

_petites

_populations

d’animaux

_domestiques.

Génét Sél Evol

_17,

459-480

Rohrer

_GA,

Alexander

LJ,

Keele

_JW,

Smith

_TP,

Beattie CW

₍₁₉₉₄₎

A microsatel-lite

_linkage

map of the

porcine

genome. Genetics

136,

231-245

Schmitz

_A,

_{Chaput B,}

Fouchet

_P,

_{Guilly MN,}

Frelat

_G,

Vaiman M

₍₁₉₉₂₎

Swine chromosomal DNA

_{quantification by}

bivariate flow

_karyotyping

and

_karyotype

interpretation.

Cytometry 13,

703-710

Vanlergerghe

F,

Boursot

_P,

Catalan

_J,

Gerasimov

_S,

Bonhomme F

₍₁₉₈₈₎

_Analyse

génétique

de la zone

d’hybridation

entre 2

_{sous-espèces}

de souris Mus musculus domesticus et Mus musculus musculus. Genome

_{30, 427-437}

Weber J

₍₁₉₉₀₎

Informativeness of human

_{(dC-dA)n (dG-dT)n}

_{polymorphisms.}

Genomics

_7,

524-530

Weber

_{J, May}

P

₍₁₉₈₉₎

Abundant class of human DNA

_{polymorphisms}

which can

be

_typed

_using

the

_polymerase

chain reaction. Am J Hum Genet

_{44, 388-396}

Weissenbach

_J,

_Gyapar

G,

Dib

C,

Vignal A,

Morissette

_J,

Millasseau

_P,

_Vaysseix

_G,

Lathrop

M

₍₁₉₉₂₎

A

_{second-generation}

_linkage

_map of the human genome. Nature

359,

794-801

Womack JE

₍₁₉₈₄₎

Gene _map of the cow

_(Bos

_taurus,

_2N=60).

In: Genetic _maps

Cold

_Spring

Harbor

_Laboratory

Press

3,

401

Winter

o

AK,

Fredholm

_M,

Thomsen PD

₍₁₉₉₂₎

Variable

_{(dG-dT)n.(dC-dA)n}

Se-quences in the

porcine

genome. Genomics

12,

281-288

Yerle

_M,

Gellin

_J,

Dalens

_M,

Galman 0

₍₁₉₉₀₎

Localization on

_pig

chromosome 6

of markers

_GPI,

_APOE,

and

ENOl,

carried

_by

human chromosomes 1 and

_{19, using}

in situ

_{hybridization. Cytogenet}

Cell Genet

54,

86-91

Yerle

_M,

Gellin

_J,

Echard

_G,

Lefevre

_F,

Gillois M

_(1986).

Chromosomal localiza-tion of

_leucocyte

interferon _gene in the

_pig

_(Sus

_scrofa

domestica

_{L) by}

in situ

hybridization. Cytogenet

Cell Genet

_42,

129-132

Yerle

_M,

Gouveau

_A,

Gellin

_J,

Le Tissier

_P,

Moran C

₍₁₉₉₄₎

_{Rapid mapping}

of cosmid clones on

_pig

chromosomes

by

fluorescence in situ

hybridization.

Mamm

Genome

_{5, 34-37}

Yerle

_M,

Schmitz

_A,

Milan

_D,

_Chaput

_B,

_Monteagudo

_L,

Vaiman

_M,

Frelat

G,