Etudes in vitro de l’impact de la pasteurisation du lait maternel sur les cinétiques de digestion et l’absorption intestinale des lipides chez le prématuré

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Submitted on 2 Jun 2020

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Etudes in vitro de l’impact de la pasteurisation du lait maternel sur les cinétiques de digestion et l’absorption

intestinale des lipides chez le prématuré

M Vincent, Olivia Ménard, J. Etienne, Jordane Ossemond, Carole Knibbe, Amélie Deglaire, Didier Dupont, J.C. Picaud, Marie-Caroline Michalski,

Armelle Penhoat

To cite this version:

M Vincent, Olivia Ménard, J. Etienne, Jordane Ossemond, Carole Knibbe, et al.. Etudes in vitro de l’impact de la pasteurisation du lait maternel sur les cinétiques de digestion et l’absorption intestinale des lipides chez le prématuré. Journées francophones de nutrition, Dec 2019, Rennes, France. 2019.

�hal-02737976�

CONTEXTE

CONCLUSION

* armelle.penhoat@inserm.fr

But de l’étude: Evaluer in vitro l’impact de la

pasteurisation du lait maternel sur la digestion gastro-intestinale chez l’enfant prématuré et

sur l’absorption intestinale des lipides.

Le lait maternel est la référence en nutrition néonatale, en particulier pour les prématurés.

Le lait maternel de don, pasteurisé pour prévenir la transmission de pathogènes, est le premier choix pour nourrir les prématurés lorsque le lait de la mère n’est pas disponible. Cependant, la pasteurisation altère la qualité du lait en dénaturant certains composants biologiques.

(Picaud and Buffin 2017, Clin Perinatol)

METHODES

1 Réanimation néonatale, Hôpital de la Croix-Rousse, Hospices Civils de Lyon, F-69004 Lyon

2 Laboratoire CarMeN, INSERM U1060, INRA U1397, INSA Lyon, UCB Lyon 1, 69310 Pierre-Bénite

3 STLO, INRA, Agrocampus Ouest, 35042 Rennes

1) Modèle de digestion in vitro statique chez l’enfant

La pasteurisation diminue la pré-lipolyse du lait maternel mais pas de différence de lipolyse durant la digestion in vitro entre RHM et PHM. Un effet négatif modéré sur l’absorption des lipides est observé pour PHM par rapport à RHM.

Etudes in vitro de l’impact de la pasteurisation du lait maternel sur les

cinétiques de digestion et l’absorption intestinale des lipides chez le prématuré

ABSORPTION DES LIPIDES ANALYSE DE LA LIPOLYSE

Lignée cellulaire Caco-2/TC7, derivée d’un adénocarcinome colorectal humain, est un modèle d’absorption intestinale bien caractérisé. Les cellules sont cultivées dans des plaques Transwell® et incubées pendant 16 heures avec les milieux de digestion dilués RHM et PHM.

L’absorption des lipides est mesurée:

• Par analyse d’image numérique des gouttelettes lipidiques après coloration à l’Oil Red O

• Par mesure de la sécrétion des lipides dans le milieu basolatéral

• Par analyse de l’expression de gènes impliqués dans l’absorption intestinale des lipides

2) Modèle d’absorption intestinale in vitro

 Gouttelettes lipidiques visualisées après coloration Oil Red O dans les cellules incubées avec les laits digérés RHM et PHM

RESULTATS

Lait maternel cru (RHM)

Pool de lait maternel

Lait maternel pasteurisé (PHM)

62,5°C 30min

Analyse de la lipolyse :

• Par chromatographie sur couche mince

• Par quantification des acides gras libres par chromatographie gazeuse

(Menard et al. 2018, Food chemistry)

Phase gastrique:

Fluide gastrique simulé + pepsine

+ lipase

Adapté pour un nouveau-né prématuré de 2kg

Phase intestinale:

Fluide intestinal simulé + pancréatine porcine

+ bile bovine _{60 min}

• Activité lipase stimulée par les sels biliaires (pH-stat)

• Composition en

macronutriments (MIRIS)

• Acides gras totaux

(chromatographie gazeuse)

 Avant digestion in vitro, lipolyse était 52%

plus faible avec PHM vs RHM (p<0.006)

 Pas de différence de lipolyse durant la digestion in vitro

A. Moins 13% de pixels dans gouttelettes lipidiques avec PHM par rapport à RHM (p=0.04).

B. Nombre de gouttelettes par image identique pour les 2 laits digérés (p=0.26).

C. Aire moyenne des gouttelettes plus petite avec PHM (p=0.01).

D. Aire médiane des gouttelettes identique (p=0.22).

Plus de petites gouttelettes dans les cellules Caco-2/TC7 incubées avec PHM alors que le nombre de très grosses gouttelettes était identique pour les 2 laits digérés

 La sécrétion des triglyceride était identique dans les milieux basolatéraux des cellules Caco-2/TC7 incubées avec PHM ou RHM (p=0.26) .

Pas de différence majeure dans l’expression des gènes étudiés, impliqués dans le métabolisme lipidique (résultats non montrés)

 Visualisation des gouttelettes lipidiques après analyse d’image numérique

 Après digestion in vitro , lipolyse était

13% plus faible avec PHM vs RH (p<0.052)

Tr ig ly cé ri d e s (µ m o l/ L) A ir e m o y e n n e ( µ m ²) A ir e m é d ia n e ( µ m ²)

N o m b re d e p ix e ls x 1 0

N o m b re d e g o u tt e le tt e s

RHM PHM RHM PHM

RHM PHM RHM PHM

RHM PHM

RHM PHM

RHM PHM

RHM PHM

Li p o ly se e n tr e G 0 e t I6 0 ( % ) Li p o ly se à I 6 0 ( % ) Li p o ly se à G 0 ( % )

A B

C D

60 min

1) Digestion statique in vitro

2) Absorption intestinale in vitro

RHM PHM

RHM PHM

M. Vincent ^1,2 , O. Menard ³ , J. Etienne ² , J. Ossemond ³ , A. Durand ² , R. Buffin ¹ , E. Loizon ² , E. Meugnier ² ,

A. Deglaire ³ , D. Dupont ³ , J-C. Picaud ^1,2 , C. Knibbe ² , M-C. Michalski ² , A. Penhoat * ²