1.INTRODUCTION 4
1.1. LES RECEPTEURS COUPLES AUX PROTEINES G 4
1.1.1. GENERALITES 4
1.1.2. CLASSIFICATION DES RCPG 4
1.1.3. STRUCTURE DES RCPGS 7
1.1.4. STRUCTURE TRIDIMENSIONNELLE DES RCPG 7
1.1.5. MECANISMES D’ACTIVATION DES RCPG 10
1.1.6. ACTIVITE CONSTITUTIVE DES RCPG 12
1.1.7. PROTEINES G ET TRANSDUCTION DU SIGNAL 13
1.1.8. REGULATION DES RCPG 14
1.2. LES RECEPTEURS AUX CHIMIOKINES ET LEURS LIGANDS 15
1.2.1. GENERALITES 15
1.2.2. LE RECEPTEUR CCR5 16
1.2.3. LE RECEPTEUR CCR7 18
1.2.4. LE RECEPTEUR CXCR4 19
1.3. LE RECEPTEUR CHEMR23 ET LA CHEMERINE 21
1.3.1. LE RECEPTEUR CHEMR23 21
1.3.2. LA CHEMERINE 22
1.4. LA DIMERISATION DES RECEPTEURS COUPLES AUX PROTEINES G 24
1.4.1. GENERALITES 24
1.4.2. MISE EN EVIDENCE DES DIMERES DE RCPG 25
1.4.3. NOUVEAUX CONCEPTS ASSOCIES A LA DIMERISATION 27
1.4.4. LE ROLE DU LIGAND DANS LA DIMERISATION 30
1.4.5. CONSEQUENCES FONCTIONNELLES DE LA DIMERISATION 31
1.5. ALLOSTERIE 33
1.5.1. GENERALITES 33
1.5.2. ALLOSTERIE ET DIMERISATION DES RCPG 34
1.5.3. ALLOSTERIE ET DIMERISATION DES RECEPTEURS AUX CHIMIOKINES 35
2. MATERIEL ET METHODES 37
2.1. VECTEURS D’EXPRESSION 37
2.2. TRANSFECTIONS 38
2.3. CYTOMETRIE DE FLUX (FACS) 39
2.4. MESURE DE L’EXPRESSION DE RÉCEPTEURS À LA SURFACE CELLULAIRE 39 2.5. BRET (BIOLUMINESCENCE RESONANCE ENERGY TRANSFER) 40
2.6. ANALYSE FONCTIONNELLE : TEST AEQUORINE 42
2.7. PREPARATION DE MEMBRANES DE CELLULES 42
2.8. DOSAGE DE PROTÉINES 43
2.9. TEST DE LIAISON DE LIGANDS AUX RECEPTEURS 43
2.10. GENERATION DE BMDC (BONE MARROW‐DERIVED DENDRITIC CELL) 44
3. BUT & STRATEGIE 45
4. RESULTATS 46
4.1. ETUDE DE LA DIMERISATION DES RECEPTEURS AUX CHIMIOKINES 46
4.1.1. INTRODUCTION 46
4.1.2. DIMERISATION DES RECEPTEURS AUX CHIMIOKINES 46
4.1.3. CONCLUSIONS 52
4.2. CONSEQUENCES PHARMACOLOGIQUES DE LA DIMERISATION DES RECEPTEURS AUX CHIMIOKINES 55
4.2.1. CONTEXTE 55
4.2.2. L’HETEROMERISATION DE CHEMR23 AVEC CCR7 ET CXCR4 55 4.2.2.1. Etablissement et caractérisation de lignées cellulaires stables 56 4.2.2.2. Conséquences de l’hétéromérisation de ChemR23 sur les propriétés de liaison 57 4.2.2.3. Conséquences fonctionnelles de l’hétéromérisation de ChemR23 59
4.2.2.4. Conclusions 59
4.2.3. L’HETEROMERISATION DE CCR7 AVEC CCR2, CCR5 ET CXCR4 60 4.2.3.1. Etablissement et caractérisation de lignées cellulaires stables 60 4.2.3.2. Conséquences de l’hétéromérisation de CCR7 sur les propriétés de liaison 61 4.2.3.3. Conséquences fonctionnelles de l’hétéromérisation de CCR7 63 4.2.4.4 Conclusions 66
4.2.4. DISCUSSION 67
4.3. CONCLUSION GENERALE ET PERSPECTIVES 71
5. ANNEXES 73
5.1. THE ACTIVATION MECHANISM OF CHEMOKINE RECEPTOR CCR5 INVOLVES COMMON STRUCTURAL CHANGES BUT A DIFFERENT NETWORK OF INTERHELICAL INTERACTIONS RELATIVE TO RHODOPSIN 73 5.2. PHARMACOGOLOGICAL CONSEQUENCES OF CHEMR23 HETERODIMERIZATION WITH CCR7 AND CXCR4 75
6. BIBLIOGRAPHIE 76
