Étude des variations génétiques chez quelques variétés de fétuques élevées par les marqueurs AFLP

Étude des variations génétiques chez quelques variétés

de fétuques élevées par les marqueurs AFLP

Résumé

Peu d’informations sont disponibles sur la variabilite´ ge´ne´tique chez les fe´tuques e´leve´es (Festuca arundinacea Schreb). Ces renseignements sont importants pour la cartographie ge´ne´tique des populations pour cibler la collecte de germoplasme et son utilisation en croisement. L’objectif de cette e´tude e´tait d’e´valuer la diversite´ ge´ne´tique de sept varie´te´s de fe´tuque e´leve´e de diverses origines. L’e´valuation e´tait base´e sur l’analyse du polymorphisme de longueur des fragments amplifie´s (AFLP), re´ve´le´e par la me´thode de marquage fluorescent et en utilisant des e´chantillons d’ADN en bulk. Sur la base des 105 marqueurs AFLP (amplified fragment length polymorphism) obtenus par deux combinaisons d’amorces, les sept varie´te´s teste´es ont e´te´ regroupe´es selon leurs origines ge´ographiques. Fraydo et Lutine sont ge´ne´tiquement les plus divergentes, Tanit et Sisa pre´sentent une grande similitude ge´ne´tique ; alors que Centurion est d’une structure ge´ne´tique tre`s proche des varie´te´s Flecha et Flecha endophyte´ (E542) ; mais tre`s e´loigne´e ge´ne´tiquement de la varie´te´ Lutine bien que Lutine et Centurion soient des obtentions du meˆme institut (Institut national de la recherche agronomique [Inra]).

Mots cle´s : AFLP ; diversite´ ge´ne´tique ; Festuca arundinacea ; germoplasme. The`mes : ame´lioration ge´ne´tique ; me´thodes et outils ; productions ve´ge´tales.

Abstract

Study of the genetic variation of tall fescue varieties using AFLP markers

Little information is available regarding genetic variation in tall fescue (Festuca arundinacea Schreb). Such information is important in constructing mapping populations and targeting germplasm collection and utilization. The objective of this study was to evaluate the genetic diversity among seven tall fescue accessions from diverse geographic origins. Tall fescue accessions were assayed by a fluorescence-labeled amplified fragment length polymorphism (AFLP) detection method using DNA samples bulked from each accession. On the basis of 105 AFLP markers from two primer combinations, the seven accessions were clustered in groups that largely supported the known origins of these plants. Fraydo and Lutine are genetically the most divergent, Tanit and Sisa are genetically very similar, whereas Centurion has a very similar structure to the genotypes Flecha and endophyte-infected Flecha (E542), and a large genetic distance from Lutine although both Centurion and Lutine were bred by the same institute (Institut national de la recherche agronomique [INRA]).

Key words: AFLP; Festuca arundinacea; genetic diversity; germplasm. Subjects: genetic improvement; tools and methods; vegetal productions. Mohammed Mefti1

Hamena Bouzerzour2 1_{Universite Saad Dahlab}

Faculte des sciences agroveterinaires et biologiques Departement d'agronomie Route de Soumaa BP 270 09000 Soumaa Blida Algerie <mmeftidz@yahoo.fr>

2_{Universite Farhat Abbas}

Faculte des sciences de la nature et de la vie

Departement de biologie vegetale et d'ecologie

Setif Algerie

<hbouzerzour50@gmail.com>

Pour citer cet article : Mefti M, Bouzerzour H, 2012. Étude des variations génétiques chez quelques variétés de fétuques élevées par les marqueurs AFLP. Cah Agric 21 : 4-10. doi : 10.1684/ agr.2012.0540

Tirés à part : M. Mefti

doi:

10.1684/agr.2012.0540

L

es gramine´es fourrage`res pe´r-ennes jouent un important roˆle en agriculture. Elles assurent de larges productions de viande et de lait, contribuent a` la conservation des sols et a` la protection de l’envi-ronnement (Wang et al., 2001). Le genre Festuca compte une centaine d’espe`ces, dont certaines sont cou-ramment utilise´es comme gramine´es fourrage`res (Soreng et Davis, 1998). Sur la base de la texture de leurs feuilles, ce genre se subdivise en deux types subge´ne´riques : les fe´tuques a` grandes feuilles telles que Festuca arundinacea et Festuca pratensis et les fe´tuques a` feuilles fines telles que Festuca rubra et Festuca ovina (Turgen, 1985). La fe´tuque e´leve´e (Festuca arundinacea) est le fourrage le plus utilise´, largement cultive´ dans les re´gions tempe´re´es (Sleper, 1985 ; Saha et al., 2005). La fe´tuque est une espe`ce allogame avec un haut degre´ d’auto-incompatibilite´ (Xu et al., 1991). Pour les besoins de l’ame´liora-tion de la producl’ame´liora-tion et de la qualite´ fourrage`re, il est utile d’avoir des informations sur la diversite´ ge´ne´tique disponible. Les marqueurs mole´culai-res s’ave`rent tre`s utiles et efficaces dans ce contexte. Ils aident a` identifier des populations tre`s divergentes, uti-lisables comme mate´riel de de´part dans des croisements, pour ge´ne´rer plus de variabilite´. L’e´tude de la diversite´ ge´ne´tique chez la fe´tuque est complique´e par l’allogamie qui caracte´rise cette espe`ce et qui fait que des diffe´rences apparaissent aussi

bien a` l’inte´rieure de la population qu’entre populations. C’est pour ces raisons que la diversite´ ge´ne´tique chez de telles espe`ces est re´alise´e sur des me´langes (bulk) d’ADN provenant de plusieurs individus par population (Xu et al., 1994).

Parmi les techniques d’e´valuation de la variabilite´ ge´ne´tique, l’AFLP (ampli-fied fragment length polymorphism) est une technique de marquage mole´-culaire permettant de re´ve´ler par PCR (polymerase chain reaction) des polymorphismes de restriction. Cette technique est tre`s fiable et fournit beaucoup plus d’informations que la technique RAPD (random amplifica-tion of polymorphic DNA), puisqu’elle amplifie 10 fois plus de fragments. Le polymorphisme de longueur des frag-ments d’amplification est hautement reproductible, moins sensible aux conditions de la re´action et ne ne´ces-site pas d’informations sur la se´quence d’ADN (Krauss et Peakall, 1998 ; Vos et al., 1995). Fjellheim et Rognli (2005) ont e´value´ 12 cultivars nordiques et une population islandaise naturelle de fe´tuque des pre´s (Festuca pratensis Huds.) par la technologie des mar-queurs AFLP et ont trouve´ des niveaux e´leve´s de diversite´ ge´ne´tique. Reeves et al. (1998) ont utilise´ des profils d’ADN issus de la technique AFLP pour de´terminer la relation entre la taille du ge´nome et l’altitude du site d’origine des populations naturelles de dactyles. L’objectif de la pre´sente e´tude est d’e´valuer la diversite´ ge´ne´-tique et de caracte´riser sept varie´te´s de

fe´tuque e´leve´e, avec les marqueurs mole´culaires AFLP.

Matériel et méthode

Matériel végétal

Les sept varie´te´s de fe´tuque e´leve´e (Festuca arundinacea Schreb.) qui ont fait l’objet d’analyse de la diversite´ ge´ne´tique selon la technique AFLP sont indique´es au tableau 1. Ces varie´te´s ont fait l’objet d’une e´tude agronomique approfondie au cours de la pe´riode 2005-2006 a` 2008-2009, entrant dans le cadre du projet Per-med1(Mefti et al., 2008 ; Pecetti et al., 2011). Les re´sultats montrent des diffe´rences significatives de compor-tement, de persistance et de pro-duction fourrage`re, sugge´rant des diffe´rences d’ordre ge´ne´tique. Pour les besoins de l’analyse de la diversite´ ge´ne´tique, des e´chantillons de la ve´ge´tation des varie´te´s mises en place sur le site expe´rimental de l’Institut technique des grandes cultures (ITCG) de Se´tif ont e´te´ pris au cours de la campagne 2007-2008. Ces e´chantil-lons ont e´te´ analyse´s au laboratoire franc¸ais de l’Institut national de la recherche agronomique (Inra) de

Tableau 1.

Description des variétés de fétuque étudiées.

Table 1. Description of the studied varieties of tall fescue.

Variétés Sélection Origine Références

Lutine Inra Lusignan, France Types mediterraneens
types

temperes Lelièvre et al. (2008)

Fraydo Melik tallfescue, Australie Israël Reed et al. (2004)

Tanit ISCF Lodi in Sardinia Italie
Maroc Pecetti et al. (2011)

Flecha Gentos SA, Buenos Aires, Argentine France
Tunisie Malinowski (2005)

Flecha endophyte (E-542)

AgReaserch (AR) Grassland,

Palmerston North, Nouvelle Zelande France
Tunisie Bouton et al. (2002).

Centurion Inra Montpellier, France Italie
Tunisie www.agriobtentions.fr

Sisa ISCF Lodi in Sardinia Sicile (Italie) Pecetti et al. (2011)

1

Projet finance´ par l’Union europe´enne (UE), contrat No_{INCO-CT-2004-509140 et intitule´ :}

« Improvement of native perennial forage plants for sustainability of Mediterraean farming systems ».

Lusignan, au cours de la pe´riode allant du 1er au 30 juin de l’anne´e 2008.

Extraction et ampli

fication

de l'ADN

L’ADN ge´nomique de 20 individus par ge´notype a e´te´ extrait et purifie´ a` partir de 50 mg de matie`re fraıˆche foliaire, selon la me´thode du Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) (Webb et Knapp, 1990). L’ADN extrait est teste´ (degre´ de contamination de l’ADN par les ARN et les prote´ines) par spec-trophotome´trie en controˆlant l’absor-bance, respectivement a` 260 nm et a` 280 nm (Sambrook et al., 1989). De meˆme la quantite´ a e´te´ estime´e visuel-lement sous rayons ultra-violets apre`s migration sur gel d’agarose 0,8 % (w/ v). Avant amplification, des bulks ont e´te´ constitue´s selon la me´thode de´crite par Mellish et al. (2002). Cinq bulks d’ADN de 4 individus ont e´te´ forme´s pour chaque varie´te´, en utilisant 5mL d’ADN par individu. L’ensemble a e´te´ dilue´ par 100mL d’eau Gibco1. L’amplification est re´alise´e dans un volume re´actionnel de 20mL de milieu contenant 125 ng d’ADN, 0,2 mM de dNTP, 0,5 U de Taq polymerase. La re´action d’amplification est effec-tue´e dans un thermocycleur de type MJ PTC-100, selon le protocole de Vos et al. (1995) comprenant les e´tapes suivantes. La re´action de digestion enzymatique a e´te´ re´alise´e dans un thermocycleur a` 37 ˚C pendant 2 heu-res, ou` pre`s de 125 ng d’ADN ge´no-mique ont e´te´ dige´re´s par deux enzymes de restriction, EcoRI et MseI pendant deux heures a` 37 ˚C. La ligation des adaptateurs a e´te´ effectue´e dans un volume final de 24mL, graˆce a` l’action du tampon T4 DNA ligase ligase (Invitrogen) a` 20 ˚C pendant 2 heures, enfin le produit est dilue´ au dixie`me dans de l’eau Gibco.

La re´action de pre´amplification est effectue´e dans un volume de 22mL contenant les amorces de pre´amplifi-cation EcoRI + A et MseI + C, mM de dNTP, 5 U/mL de Taq polymerase (MP Biomedicals), ainsi que le tampon de PCR 10X (MP Biomedicals) contenant de´ja` du MgCl2. L’ope´ration s’est de´rou-le´e dans un thermocycleur (MJ PTC-100) selon le proce´de´ suivant : de´na-turation de l’ADN pendant 30 secon-des a` 948C, suivie d’une minute a`

568C et d’une minute d’e´longation a` 728C. Une e´tape finale d’e´longation est re´alise´e a` 728C pendant 10 minutes Ce cycle est re´pe´te´ 20 fois pour terminer avec une tempe´rature finale de 108C. L’amplification se´lective est pre´ce´de´e par le marquage de l’amorce EcoR1 radioactivement par le pentamethine carbcyanine (IRD 700) fluorescente a` la longueur d’onde de 760 nm graˆce

a` l’action de la T4 Kinase. Il s’agit d’amplifier cette fois-ci 5mL d’ADN dige´re´s, ligature´s et pre´amplifie´s qu’on a dilue´ 40 fois en utilisant deux couples d’amorces EcoRI + 3 et MseI + 4 (tableau 2). Les re´actions de pre´am-plification et d’ampre´am-plification se´lective s’effectuent graˆce a` l’action de la Taq DNA polyme´rase dans le thermocy-cleur. Pour cette amplification se´lective

Tableau 2.

Adaptateurs et amorces utilisés pour l'analyse AFLP.

Table 2. Adapters and primer combinations used for the AFLP analysis. Adaptateurs/amorces Séquences (50-30) Adaptateurs EcoRI CTCGTAGACTGCGTACC AATTGGTACGCAGTCTAC Adaptateurs MseI GACGATGAGTCCTGAG TACTCAGGACTCAT Amorces selectives E-AGG/M-CACG E-ACA/M-CTCG GACTGCGTACCAATTCAGG/GATGAGTCCTGAGTAACACG GACTGCGTACCAATTCACA/GATGAGTCCTGAGTAACTCG

AFLP : amplified fragment length polymorphism.

M 1 2‡ ‡ ‡_{3 4 4 5 1 3 4 6 6 4 5 4} ‡₆‡ ‡ ‡_{6 7 7 3}‡_{7 2 1 1 1}‡ ‡₇‡_{3 5}‡_{2 2 6 5 3 2 5 7}‡_M 400 pb 359 pb 325 pb 300 pb 250 pb 192 pb 140 pb 119 pb 71 pb

Figure 1. Profil AFLP des variétés de fétuque élevée obtenu par le couple d'amorces E-ACG/M-CACG. Figure 1. AFLP profile of tall fescue varieties using the primer combination E-ACG/M-CACG. AFLP : amplified fragment length polymorphism ; pb : paire de base.

le programme comprend une premie`re e´tape de 10 cycles divise´e en une phase de de´naturation initiale de 4 minutes a` 94 ˚C suivie d’un cycle d’une minute a` 94 ˚C, puis une phase d’hybridation d’une minute a` 65 et une phase d’e´longation d’une minute et 30 secondes a` 72 ˚C. La deuxie`me e´tape est en revanche compose´e de 23 cycles (une minute a` 94 ˚C pour la de´natura-tion, 30 secondes a` 56 ˚C pour l’hybri-dation des amorces, une minute a` 72 ˚C pour l’e´longation)

Le fractionnement des produits de l’amplification est re´alise´ par un se´quenceur d’ADN LI-COR, 4 000 L. Trois microlitres d’ADN dilue´ a` 100 % sont me´lange´s a` volume e´gal avec le tampon de charge (98 % formamide, 10 mM EDTA, 0,25 % bleu de Bromo-phe´nol, 0,25 % xyle`ne Cyanole) puis de´nature´s pendant 5 minutes a` 958C. Six microlitres de chaque e´chantillon sont de´pose´s dans chaque puits du gel de polyacrylamide a` 6,5 % (w/v) sous un courant de 40W pendant 4 heures et a` une tempe´rature de 478C. Les profils sont traite´s par le logiciel SAGA pour la visualisation des bandes AFLP.

Analyse des données

La diversite´ ge´ne´tique est estime´e a` partir de la matrice de pre´sence (1) absence (0) des bandes polymorphes. La similarite´ ge´ne´tique entre ge´noty-pes a e´te´ calcule´e d’apre`s le coefficient de Jaccard (GSJ) :

GSij = Nij/(Ni + Nj – Nij )

ou` Ni repre´sente le nombre de bandes de´tecte´es sur le ge´notype i et pas sur le ge´notype j ; Nj repre´sente le nombre de bandes de´tecte´es sur le ge´notype j et pas sur le ge´notype i, alors que Nij est le nombre de bandes communes aux deux ge´notypes i et j.

Sur la base de la matrice de similitude un dendrogramme montrant les rela-tions ge´ne´tiques entre les varie´te´s a e´te´ re´alise´ selon la me´thode Unweighted pair group method using arithmetic average (UPGMA) attribue´e a` Sneath et Sokal (1973) en utilisant le logiciel PAST version 2.4 (Hammer et al., 2001). L’analyse en coordonne´es prin-cipales (ACoP) est re´alise´e avec le meˆme logiciel Past dans le but de regrouper les varie´te´s e´tudie´es.

Résultats

et discussion

Les deux couples d’amorces AFLP utilise´es pour analyser la distance ge´ne´tique entre les diffe´rentes varie´te´s par la me´thode du bulk ont permis d’obtenir des profils d’amplification avec une bonne re´solution des bandes et un niveau de variabilite´ des produits d’amplification assez important. Un total de 105 fragments dont la taille varie de 71 a` 388 paires de bases (pb) a e´te´ obtenu ; avec 55 bandes ge´ne´re´es par le premier couple d’amorces E-ACG/M-CACG et 50 bandes par le deuxie`me couple d’amorces E-ACA/ M-CTCG (figures 1 et 2). Soixante-six fragments sont polymorphes, soit 62,85 % du nombre total des bandes observe´es. A` ce sujet, Roldan-Ruiz et al. (2000) rapportent avoir trouve´ 83 % de fragments AFLP polymorphes, chez le ray-grass. Ces auteurs qualifient ce taux d’e´leve´. Bolaric et al. (2005)

rappor-tent, eux aussi, un degre´ de polymor-phisme des marqueurs RAPD de 88 % chez le ray-grass anglais. Un taux de polymorphisme similaire, de 85.4 %, est rapporte´ par Majidi et al. (2006), chez la fe´tuque e´leve´e, avec une moyenne de 10 a` 75 bandes polymor-phes engendre´es par couple d’amorce. Dans ce contexte, Paglia et Morgante (1998) rapportent une moyenne de 12,6 fragments polymorphes par cou-ple d’amorce. Selon Mian et al., 2002, l’amplification se´lective avec le couple d’amorce EcoRI + 3 et MseI + 3 produit un nombre e´leve´ de fragments (plus de 200) a` se´parer sur gel de polyacryla-mide ; en revanche, la combinaison d’amorce EcoRI + 3 et MseI + 4 produit un nombre de fragments plus pratique allant de 80 a` 100.

L’analyse des coefficients des simila-rite´s ge´ne´tiques (GSJ) des marqueurs AFLP base´es sur l’indice de Jaccard et du dendrogramme UPGMA montre des valeurs variant entre 0,35 et 0,8, avec une moyenne de 0,54 sugge´rant une assez grande variabilite´

M 1 2‡ ‡ ‡ 3 4 4 5 1 3 4 6 6 4 5 4‡ 6‡ ‡ ‡ 6 7 7 3‡ 7 2 1 1 1‡ ‡ 7‡ 3 5‡ 2 2 6 5 3 2 5 7‡ M 400 pb 359 pb 325 pb 300 pb 250 pb 192 pb 140 pb 119 pb 71 pb

Figure 2. Profil AFLP des variétés de fétuque élevée obtenu par le couple d'amorces E-ACA/M-CTCG. Figure 2. AFLP profile of tall fescue varieties using the primer combinaition E-ACA/M-CTCG. AFLP : amplified fragment length polymorphism ; pb : paire de base.

intervarie´tale, et un coefficient de corre´lation cophe´ne´tique r = 0,95 (tableau 3, figure 3). A` ce sujet, Powell et al. (1996) et Lu¨bberstedt et al. (2000) ont e´galement obtenu des coefficients de similarite´s e´leve´s pour les AFLP par rapport a` d’autres marqueurs. La varie´te´ australienne Fraydo et la varie´te´ franc¸aise Lutine pre´sentent la plus grande divergence ge´ne´tique (GSJ = 0,35). Fraydo appa-raıˆt ge´ne´tiquement proche des varie´-te´s franc¸aise Centurion et sud-ame´ricaine Flecha. Quant aux varie´-te´s europe´ennes Tanit et Sisa, elles pre´sentent une grande similitude ge´ne´tique (GSJ = 0,73) et forment un groupe, lui-meˆme tre`s distant ge´ne´tiquement de la varie´te´ franc¸aise Lutine, et assez e´loigne´ de la varie´te´ Centurion bien que ces deux dernie`-res varie´te´s soient des obtentions du meˆme institut (Institut national de la recherche agronomique [Inra], France) (figure 3).

Les deux premiers axes de l’analyse en coordonne´es principales (ACoP) expliquent 65,0 % de la variation totale disponible dans la matrice soumise a` l’analyse, avec respective-ment 41,2 % pour le premier axe et 23,9 % pour le second (figure 4). Les re´sultats de l’ACoP confirment ceux du dendrogramme UPGMA. L’axe 1 discrimine nettement entre Fraydo et Lutine, alors que l’axe 2 oppose le groupe forme´ par Flecha, Flecha endophyte´ (E-542) et Centurion a` celui forme´ par Tanit et Sisa (figure 4). Ces divergences entre accessions sem-blent avoir pour cause les origines

ge´ographiques. En effet, Sharma et al. (2000) pour le genre Morus, Vergara et Bughrara (2003) pour le genre Agrostis rapportent des corre´lations positives entre les distances des marqueurs mole´culaires de type AFLP et les coordonne´es de l’origine ge´ogra-phique. En revanche, Cresswell et al. (2001) ainsi que Bolaric et al. (2005) pour le genre Lolium n’ont pas observe´ de liaisons significatives entre la dis-tance ge´ographique et les marqueurs mole´culaires AFLP e´tudie´s.

La me´thode d’ADN bulk a e´te´ de´ja` utilise´e par Mian et al. (2002) pour faire la distinction entre 18 popula-tions de fe´tuque e´leve´e. Yu et Pauls (1993) Sweeny et Danneberger (1997) et Warburton et al. (2000) ont aussi e´value´ la diversite´ ge´ne´tique fonde´e sur des marqueurs mole´culaires entre des populations respectives de Medi-cago sativa, de ray-grass anglais et de maı¨s a` travers des e´chantillons d’ADN en bulk. Cette strate´gie est applique´e pour e´valuer la diversite´

Tableau 3.

Distances génétiques entre les différentes variétés de fétuque basées sur l'indice

de Jaccard.

Table 3. Genetic distance between tall fescue varieties based on Jaccard's index.

Génotype Lutine Fraydo Tanit Flecha E-542 Centurion Sisa

Lutine 1 Fraydo 0,351 1 Tanit 0,454 0,547 1 Flecha 0,451 0,648 0,609 1 E-542 0,425 0,589 0,568 0,800 1 Centurion 0,442 0,621 0,595 0,648 0,641 1 Sisa 0,462 0,641 0,731 0,625 0,581 0,534 1 Similarité 0,96 0,88 0,8 0,72 0,64 0,56 0,48 0,4 100 79 Lutine Tanit Sisa Fletcha E542 Centurion Fraydo 89 44 39 96 r = 0,95**

Figure 3. Dendrogramme des marqueurs AFLP fondé sur l'indice de similarité de Jaccard pour les variétés de fétuque élevée.

Figure 3. UPGMA dendrogram of tall fescue varieties based on AFLP markers, using Jaccard's genetic similarity index.

des populations d’espe`ces allogames (Mian et al., 2002). L’utilisation des marqueurs AFLP constitue un outil pre´cieux pour l’identification des varie´-te´s commercialise´es comme le men-tionnent Roldan-Ruiz et al. (2000).

Conclusion

Les re´sultats obtenus mettent en exer-gue la diffe´renciation des diffe´rentes varie´te´s e´tudie´es, issues de diverses origines. Elles confirment aussi, dans ce cadre-la`, le grand inte´reˆt des mar-queurs mole´culaires, en particulier de type AFLP, dans l’analyse de la diversite´ ge´ne´tique et de l’identification varie´-tale. En effet, cette technique a permis une bonne discrimination et un regrou-pement des accessions e´tudie´es. L’utilisation de ces accessions relative-ment diversifie´es dans un programme d’ame´lioration permettra certainement d’acce´le´rer le processus d’ame´lioration varie´tale. Enfin, l’utilisation de cette technologie sur un large e´ventail de populations de fe´tuques alge´riennes

pre´sente un inte´reˆt certain dans l’ori-entation ulte´rieure des prospections et collectes du mate´riel ge´ne´tique local, e´galement dans le but d’acce´-le´rer le processus de son ame´lioration ge´ne´tique.&

Remerciements

Nos remerciements s’adressent au minis-te`re de l’Enseignement supe´rieur et de la Recherche scientifique ainsi qu’aux responsables du Laboratoire de biologie mole´culaire de l’Unite´ de recherche plu-ridisciplinaire « Prairies et plantes fourra-ge`res » de l’Inra de Lusignan. Nous tenons a` remercier en particulier le Dr Philippe Barre pour son accueil et ses orientations, la Dr Sandrine Flojolot pour ses orienta-tions ainsi que MmeFranc¸oise Durand pour son assistance technique.

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Figure 4. Analyse en coordonnées principales des données de l'AFLP des variétés de fétuque élevée fondée sur l'indice de similarité de Jaccard.

Figure 4. Biplot of principle component analysis based on AFLP markers of tall fescue varieties, using Jaccard's genetic similarity index.

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