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DISCUSSION 1, Sgéc^f|c|té

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irreversibly sickled érythrocytes by zinc therapy in sickle cell

V, DISCUSSION 1, Sgéc^f|c|té

Dans les conditions expérimentales décrites ci-dessus la détection de «

cellules formant des rosettes est liée à la reconnaissance spécifique de la TF ou de la TF-Zn recouvrant la surface des hématies.

En effet ;

1° l'intensité du phénomène dépend de la quantité de TF ou de TF-Zn utilisées pour la sensibilisation des hématies. L'absence de celles-ci pendant le couplage des globules rouges ou leur rempla­ cement par d'autres protéines ne permettent pas la formation de

caractère partieL de L'inhibition reLève du mode de présentation du Ligand sur une matrice soLide (GR) dont Le contact est forcé par La centrifugation.

3° La Liaison des GR aux Lymphocytes est réversibLe par La présence du Ligand correspondant en soLution et proportionneLLement à sa concentration ou par La modification de La température de Liaison. Nos données s'accordent en grande partie avec ceLLes de PhiLipps (5) sur La rapidité, La spécificité et La réversibiLité de La Liaison de TF-Zn aux récepteurs Lymphocytaires. ELLes s'en distinguent par La mise en évidence d'un optimum thermique différent de cette Liaison qui est de 37° C pour ceLLe de La TF-Zn marquée à L'iode 125 et de 0° à 4° C pour La formation de rosettes TF-ZN. Nous pensons que ceci

résulte de La superposition de 2 phénomènes : La Liaison proprement dite de TF-Zn au récepteur et L'incorporation intraLymphocytaire de TF. CeLLe-ci est à La fois suggérée par L'effet potentiateur de La

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poLy-L-ornithine sur La rétention de complexes I TF-Zn par Les Lymphocytes, un agent connu pour favoriser La pinocytose (5, 6) et La présence de TF dans Les Lymphocytes démontrée récemment par Nishiya et aL. (7). Ce phénomène est rendu impossibLe dans nos conditions par La fixation du Ligand aux globules rouges. L'abaisse­ ment à 4° C de L'optimum thermique pour La formation des RTF-Zn serait dû à L'inhibition d'un phénomène métabolique de captation du zinc Lié à La transfèreine.

182,

Ceci s'accorde avec L'observation du phénomène en sens inverse ; 125

les Lymphocytes fixent moins de TF-Zn marquée à L'I sous L'effet de NaF (5) mais captent plus de zinc (6). Dans ces conditions, il est permis de penser que cet agent a augmenté La reprise du zinc de

La TF par la cellule. Celle-ci se détacherait ensuite plus facile­ ment de la cellule.

2. Çomgara|son_des_rosettes_TF_et_TF3Zn Les deux types de rosettes diffèrent : 1° par Leur optimum thermique,

2° par leur spécificité réciproque : les RTF ne sont pas influencées par la TF-Zn alors que les RTF-Zn sont inhibées par La TF quoique moins fortement que par la TF-Zn,

3° Nous observerons plus tard que l'on peut dissocier L'expression de L'un et de l'autre type de rosettes :

- après synchronisation des cellules activées en culture. - sous l'effet de chélateurs.

- en acroissant la densité cellulaire en culture.

Ces données suggèrent fortement qu'il s'agit de 2 récepteurs qui reconnaissent des structures différentes. Nous ne pouvons pas éta­ blir s'il s'agit de molécules différentes ou si l'un est une forme modifiée de l'autre. Il est vraisemblable que ces 2 types de récep­ teurs se trouvent sur Les mêmes cellules en raison de la similitude des proportions de rosettes dans Les 2 tests.

Dans la plupart des mesures pratiquées sur des lymphocytes du sang périphérique, le nombre de RTF-Zn était légèrement supérieur à celui de RTF. Cette dissociation sera étudiée systématiquement en fonction de l'âge des donneurs de cellules au chapitre 11 et sera abondamment confirmée dans les 2 sens (i.e. RTF > RTF-Zn et RTF-Zn > RTF) au chapitre suivant lorsque nous induiront l'apparition de récepteurs pour la TF et la TF-Zn par stimulation de culture.

ki!!!ii§§_dË_sens|bj^L|té_du_test_pour_La_détect|oQ_de_récegteurs_TF et_IF-Zn

La formation de rosettes résulte de la possibilité de retenir deux hématies sur un lymphocytes, ce qui dépend de la densité des récep­ teurs, de leur affinité pour le ligand fixé sur l'hématie.

La sensibilité de notre test est comparable à celle de la technique par fluorescence indirecte de membrane. Certains auteurs ont détecté environ 5 ^ de lymphocytes (7) et d'autres entre 5,9 et 12,5 % (8) mais avec des écarts très importants.

Il nous paraît probable que cette technique soit influencée par la présence de TF sécrétée par certains lymphocytes T (8) ou préalable­ ment fixée sur des lymphocytes fraîchement isolés.

Notre technique a l'avantage de ne détecter que la fixation membra­ naire de TF; de plus, elle apparaît plus sensible compte tenu de l'utilisation d'un optimum thermique.

Les données actuelles ne permettent pas de savoir si notre méthode détecte toutes les cellules qui reconnaissent spécifiquement la TF.

184.

Ceci est vraisemblable parce que dans nos expériences d'activation lymphocytaire par la PHA, nous détectons jusqu'à 60 % de RTF et de RTF-Zn (cf. chapitre suivant), proportion superposable à celle des

lymphocytes activés et identifiés en autoradiographie par leur incorporation de thymidine tritiée (revu dans 9).

^

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La séparation des lymphocytes en différentes populations de cellu­ les T, Ty, Ty et B ne permet pas d'associer la formation de RTF et de RTF-Zn à une sous-population particulière. Nos données suggèrent que les monocytes n'en forment pas. Ceci est confirmé par Nishiya et al. qui montrent que ceux-ci ne sont pas colorés par immunofluo­ rescence indirecte après phagocytose de particules de latex couvertes de TF.

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